胃癌患者外周血和腫瘤灶中髓源性抑制細胞表達水平研究

周雅瑩，文錦麗，周繼豪

(深圳市人民醫院臨床醫學研究中心，廣東 深圳 518020)

髓源性抑制細胞 （myeloid derived suppressor cells，MDSCs）是一群分化未成熟的髓來源細胞，正常生理狀態下，該群細胞可分化為巨噬細胞、粒細胞和樹突狀細胞，當受到腫瘤來源的膜型和分泌型生物活性物質（Tumor derived factors，TDFs）刺激

時，則可通過多種途徑參與免疫應答反應，引起機體自身的免疫功能下降，進而導致疾病的發展與惡化[1，2]。目前研究已經證實MDSCs的表達改變與乳腺癌、宮頸癌、結腸癌的發生發展相關[3－5]。本研究觀察了胃癌患者外周血和腫瘤灶中MDSCs表達的變化，并分析該變化可能的相關因素，現報道如下。

1 研究對象與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月－2017年4月經我院確診的胃癌患者26例，其中男性15例，女性11例，平均年齡為59.85±10.88歲。選取2016年5月-2016年12月于我院進行體檢的健康志愿者14例，其中男性8例，女性6例，平均年齡56.14±10.91歲。胃癌患者與健康體檢者在年齡、性別構成上差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 入選標準 ①患者均為首次確診為原發性胃癌；②患者均行胃癌根治術；③患者術前均未進行放療、化療；④患者均無其他系統腫瘤。

1.3 觀察指標 記錄患者一般資料，包括患者性別、年齡；記錄患者腫瘤大小、有無淋巴結轉移、TNM分期及分化程度。

1.4 實驗方法 于術前、術后4周采集胃癌患者外周靜脈血，采集健康體檢者外周靜脈血，各2ml，于術中采集胃癌患者腫瘤灶組織。血液標本以EDTA-Na2抗凝管保存。所有標本經處理后進行流式分析，檢測以HLA-DR－/CD11b+/CD33+為MDSCs的表面標志物的細胞數量比例。抗體及紅細胞裂解液選用美國Biolegend公司的鼠抗人HLA-DRECD單克隆抗體、鼠抗人CD33-Cy5單克隆抗體、鼠抗人CD11b-FITC單克隆抗體，PBS磷酸鹽緩沖液為院內自制。

1.5 統計方法 將各組數據采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，各組數據采用均數±標準差 （±s）表示，計數資料比較采用χ2檢驗，計量數據采用t檢驗和方差分析，相關分析采用Pearson相關性分析。以P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌患者術前、術后4周與健康體檢者外周血MDSCs表達 胃癌患者術前外周血HLA-DRCD11b+CD33+MDSCs表達高于健康體檢者外周血的表達，差異有顯著統計學意義（P＜0.01），胃癌患者術前外周血HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達高于術后4周外周血的表達，差異有顯著統計學意義（P＜0.05），胃癌患者術后4周外周血HLADR－CD11b+CD33+MDSCs表達高于健康體檢者外周血的表達，差異有顯著統計學意義（P＜0.01），見表1。

2.2 胃癌患者腫瘤灶和外周血MDSCs表達 胃癌患者腫瘤灶HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達高于外周血的表達，差異有統計學意義（P＜0.01），胃癌患者腫瘤灶和外周血HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達成正相關（P＜0.05），見表 2。

2.3 胃癌患者外周血MDSCs表達水平與臨床資料的關系 胃癌患者外周血中HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達與腫瘤TNM分期、有無淋巴轉移、腫瘤分化程度相關（P＜0.05），與患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤深度不相關（P＞0.05），見表 3。

3 討論

胃癌的發病率位于所有惡性腫瘤的第四位，死亡率列于第二位，是常見的惡性腫瘤。我國每年因胃癌而死亡的人數占所有由惡性腫瘤引起死亡總人數的近25%[6]。研究表明，腫瘤的發展可能與患者自身免疫功能受損有關[7，8]。MDSCs作為與肌體免疫應答和腫瘤免疫逃逸有關的一群細胞，已經被證實在眾多腫瘤疾病中起著重要的作用[3-5，9]。因此，本研究以胃癌患者外周血、腫瘤組織和健康體檢者外周血為研究對象，通過流式細胞儀檢測以 HLA-DR－/CD11b+/CD33+為標記的 MDSCs所占比例，分析其表達特點和臨床資料間的關系。

表1 胃癌患者術前、術后4周與健康體檢者外周血MDSCs表達

表2 胃癌患者腫瘤灶與外周血MDSCs表達（±s）

表2 胃癌患者腫瘤灶與外周血MDSCs表達（±s）

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表3 胃癌患者外周血MDSCs表達水平與臨床資料的關系（±s）

表3 胃癌患者外周血MDSCs表達水平與臨床資料的關系（±s）

分組性別 男女0.0920.927年齡0.1830.856腫瘤直徑0.6200.539分化程度≥60＜60≥5cm＜5cm分化低分化2.4610.018淋巴轉移 有無3.7620.001浸潤深度例數 MDSCs表達水平 t/F值 P值15 11 12 14 14 12 10 16 9 17 13 13 0.9330.357 TNM分期未達深肌層達到深肌層Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅳ期6 8 7 5 3.58±1.94 3.51±1.88 3.48±2.03 3.62±1.87 3.73±2.05 3.22±2.14 2.13±1.01 3.72±1.87 2.08±0.96 3.87±1.24 3.76±2.13 3.13±1.18 2.47±1.87 2.43±1.57 4.44±1.45 5.37±1.18 5.4240.006

本研究結果1表明，胃癌患者術前外周血MDSCs表達高于健康體檢者，且手術后4周的外周血MDSCs表達雖較術前有所降低，但仍高于健康體檢者。這可能與腫瘤組織釋放一系列的腫瘤來源的TDFs刺激MDSCs前體細胞增殖分化為MDSCs有關，與Sinha[10]等的研究結果一致。當手術切除腫瘤灶后，TDFs的釋放隨之減少，MDSCs前體細胞轉化為MDSCs的刺激因素減少，導致MDSCs的表達降低，但仍較體檢健康者高，提示刺激MDSCs增殖轉化因素的存在是有一定時間的，這種免疫受損的狀態具體需要多久才能恢復正常，尚需進一步研究。

本研究結果2表明，胃癌患者腫瘤灶MDSCs表達高于外周血，且二者呈正相關關系。盡管有眾多研究報道，腫瘤灶中MDSCs表達高于外周血的表達，但同時也有相反的報道。Feng[11]，Sun[12]，Eruslanov[13]等認為在非小細胞肺癌、腸癌、膀胱癌腫瘤灶中MDSCs表達高于外周血，Gros[14]等認為在黑色素瘤患者外周血中MDSCs表達高于腫瘤灶。這可能與腫瘤灶微環境中刺激MDSCs增殖轉化的因素高于外周血有關，但具體受哪些因素調節，及腫瘤灶中微環境與外周血微環境的區別有何不同，仍需要進一步研究。

本研究結果3表明，胃癌患者外周血中MDSCs表達與腫瘤TNM分期、有無淋巴轉移、腫瘤分化程度相關，與患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤深度不相關。胃癌腫瘤TNM分期越高，外周血中MDSCs表達越高，這一結果與Diaz-Montero[15]在乳腺癌中的研究結果相一致，這一結果提示，隨著腫瘤的發展，越來越多可刺激MDSCs增殖轉化的因素上調了外周血MDSCs表達，同時由于MDSCs具有抑制腫瘤免疫系統作用，可使患者免疫系統受損，導致腫瘤進一步增殖和轉移，進而印證了外周血中MDSCs表達與淋巴轉移、腫瘤分化程度相關。因此，該結果提示，胃癌患者外周血MDSCs表達可反映出腫瘤發展情況，可以作為臨床監測指標。

綜上所述，胃癌患者外周血HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達可能與胃癌的發生發展密切相關，MDSCs有可能成為評估胃癌預后的指標。關于具體的機制研究還需進一步探討。

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