人γ干擾素誘導蛋白16與子癇前期發病的關系

葉耀群 鄭松柏 龍健靈 董福昌

[摘要] 目的 探討人γ干擾素誘導蛋白16（IFI16）與子癇前期（PE）的關系。 方法 選擇2015年6月～2017年3月廣州市番禺區何賢紀念醫院（以下簡稱“我院”）收治的PE患者125例作為研究組，另外選擇同期于我院進行體檢的健康孕婦53例作為對照組。分別采用酶聯免疫吸附測定法和蛋白免疫印跡法檢測孕婦血清中IFI16水平和胎盤中IFI16蛋白的表達，并用Pearson相關分析PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白表達的相關性。 結果 研究組孕婦血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平均明顯高于對照組（t=17.580、16.135，均P < 0.01）；與輕度PE患者相比，重度患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平均明顯升高（t=18.883、 14.845，均P < 0.01）；早發型和晚發型PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平之間的差異無統計學意義（t=0.360、0.840，均P > 0.05）；PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平呈正相關（r=0.725，P < 0.05）。 結論 PE患者血清中IFI16和胎盤中IFI16蛋白表達水平異常升高，并且與疾病發展密切相關，可以作為臨床診斷指標，并且為治療PE提供新的靶點。

[關鍵詞] 人γ干擾素誘導蛋白16；子癇前期；血清；胎盤

[中圖分類號] R730.231 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）04（c）-0094-04

The relationship between human-induced protein 16 and preeclampsia

YE Yaoqun1 ZHEN Songbai2 LONG Jianling2 DONG Fucang2

1.Department of Obstetrics and Gynecology， Panyu District He Xian Memorial Hospital of Guangzhou， Guangdong Province， Guangzhou 511400， China； 2.Test Center Laboratory， Guangzhou Huayin Medical Testing Center Co. Ltd.， Guangdong Province， Guangzhou 511400， China

[Abstract] Objective To explore the relationship between human interferon-inducible protein 16 （IFI16） and the onset of preeclampsia （PE）. Methods From June 2015 to March 2017， 125 patients with PE in Panyu District He Xian Memorial Hospital of Guangzhou （"our hospital" for short） were selected as the research group. In addition， 53 cases of healthy pregnant women in our hospital during the same period were treated as control group. The levels of IFI16 in serum and IFI16 protein expression in the placenta of pregnant women were detected by enzyme-linkedimmunosorbent assay and Western blotting respectively. The correlation between the level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of pregnant women with PE was analyzed by Pearson. Results The levels of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of research group were significantly higher than those in the control group （t=17.580， 16.135， all P < 0.01）. Compared with patients of mild PE， the level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of patients with severe PE significantly increased （t=18.883， 14.845， all P < 0.01）. There were no statistically significant differences of the level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta between early onset and late onset （t=0.360， 0.840， all P > 0.05）. The expression levels of IFI16 in the serum of PE patients were positively correlated with the expression level of IFI16 in the placenta （r=0.725， P < 0.05）. Conclusion The level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of patients with PE are abnormally elevated， they are closely related to the disease development， which can be used as a clinical diagnosis of indicator and provide a new target for the treatment of PE.

[Key words] Human interferon-inducible protein 16； Preeclampsia； Serum； Placenta

子癇前期（preeclampsia，PE）是妊娠期高血壓疾病中常見的類型，目前全球的發病率為3%～12%，是導致孕產婦和新生兒死亡的重要原因之一[1]。臨床主要表現為妊娠20周后出現高血壓、蛋白尿或多系統器官損傷、胎兒生長受限等，重度PE危險性更大，是導致我國孕產婦死亡的第二大原因[2-3]。雖然大部分子癇前期患者血壓在分娩后12周內會恢復正常，但是造成母嬰不良結局，目前臨床上主要采用解痙、降壓、擴容、利尿、糖皮質激素、終止妊娠等綜合方法[4]。PE的發生為2個階段：第一階段，胎盤灌注量減少；第二階段，激活和/或損害孕婦的血管內皮細胞，導致周邊多個系統不同程度的損傷[5]。PE的發病機制復雜，其病因尚未完全明確，其發病機制主要分為以下4個方面[6-7]：①血管內皮功能受損；②免疫炎癥活動過度；③抑制新生血管的形成；④胰島素抵抗。近年來，人γ干擾素誘導蛋白16（interferon-inducible protein 16，IFI16）在PE的發生過程中發揮重要作用，但是其與PE的關系研究并不多見[8-9]。本研究中通過檢測不同PE患者血清和胎盤中IFI16表達水平，觀察其與PE的關系，為臨床診斷和治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年6月～2017年3月廣州市番禺區何賢紀念醫院（以下簡稱“我院”）收治的PE患者125例，作為研究組，所有患者的診斷及分類標準均符合第八版《婦產科學》[10]，納入標準：①均為單胎妊娠；②患者臨床資料完整，且依從性高；③經患者及其家屬同意，并簽署知情同意書。排除標準：①合并心、肝、腎等重大臟器病變患者；②精神意識障礙患者；④入組前1個月服用抗炎和降壓藥物進行治療。入組患者年齡25～35歲，平均（27.69±2.34）歲；孕齡32～39周，平均（36.04±2.14）周；嚴重程度：輕度75例，重度50例；疾病類型：早發型（孕齡<34周）36例，晚發型（孕齡≥34周）89例。另外選擇同期于我院進行體檢的健康孕婦53例作為對照組，年齡25～34歲，平均（27.53±2.28）歲；孕齡32～38周，平均（36.06±2.23）周。兩組孕婦的年齡和孕齡差異無統計學意義（P > 0.05）。所有研究過程均符合我院醫學倫理委員會的相關規定。PE嚴重程度評價按照文獻[10]標準。輕度PE：妊娠20周后血壓水平不低于140/90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），24 h尿蛋白水平不低于0.3 g或隨機尿蛋白呈陽性（+），同時伴隨出現上腹部疼痛和頭痛等癥狀。重度PE：妊娠20周后血壓水平不低于160/110 mmHg，24 h尿蛋白水平不低于2.0 g或隨機尿蛋白呈陽性（++），血肌酐含量高于106 μmol/L，血小板低于100×109/L，血清中谷丙轉氨酶水平升高，視覺障礙及持續性上腹部疼痛。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 IFI16試劑盒購自美國Sigma公司，酶標儀為美國Thermo公司生產的VARIOSKAN FLASH Elx800型，鼠抗人IFI16單克隆抗體購自美國Abcam公司（工作濃度1︰200），兔二抗和PVDF膜由北京中杉金橋生物技術有限公司提供，蛋白裂解液試劑盒和ECL顯色液購自北京索萊寶科技有限公司。

1.2.2 血清IFI16水平檢測 所有孕婦均于入院次日清晨空腹抽取肘正中靜脈血3 mL，置于未涂肝素鈉的采血管中，室溫下靜置20 min，以3500 r/min的速度離心10 min，離心半徑為13 cm，分離上清液即得血清，置于-80℃冰箱中待測。采用酶聯免疫吸附測定法檢測孕婦血清中IFI16水平，嚴格按照試劑盒的說明書進行操作。

1.2.3 胎盤中IFI16蛋白的表達 孕婦分娩結束后，保留胎盤組織，采用蛋白免疫印跡法檢測胎盤中IFI16蛋白的表達，使用蛋白裂解液試劑盒提取胎盤組織中的蛋白，應用Bradford法檢測其濃度。取100 μg樣品進行SDS-PAGE電泳蛋白后轉移至PVDF膜上，在4℃下5%脫脂奶粉封閉過夜，一抗為鼠抗人IFI16單克隆抗體（工作濃度1︰200），使用TBST緩沖液沖洗3次，然后在膜上加IRDye680LT標記的羊抗鼠抗體（工作濃度1︰2000），37℃孵育2 h，加入ECL顯色液進行顯色并曝光，使用美國LICOR公司Odyssey雙色紅外激光成像系統計算條帶的灰度值，內參為β-actin，使用兩者的比值表示IFI16蛋白的相對表達水平。

1.2.4 觀察分析方法 比較健康孕婦和PE孕婦血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達情況，同時比較不同程度和不同類型PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達情況，另外比較PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白表達的相關性。

1.3 統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Pearson系數進行相關性分析，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組孕婦血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平比較

研究組孕婦血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P < 0.01）。見表1。

2.2 不同程度PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平比較

與輕度PE患者相比，重度患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平均明顯升高，差異有統計學意義（P < 0.01）。見表2。

2.3 不同類型PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平比較

早發型和晚發型PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平比較差異無統計學意義（P > 0.05）。見表3。

2.4分析PE患者血清中IFI16水平與胎盤中IFI16蛋白的表達水平的相關性

PE患者血清中IFI16水平與胎盤中IFI16蛋白的表達水平呈正相關（r=0.725，P=0.027）。

3 討論

PE被認為是母體系統性的炎性反應，正常妊娠過程中，母胎界面發生變化從而適應激活的炎癥免疫反應，有利于建立并維持正常的妊娠，同樣，炎癥免疫反應在PE的發病過程中起著重要作用[11]，孕婦出現PE后，免疫平衡系統被打破，炎性反應增強，激活大量的炎癥細胞，并且黏附在血管上，產生嚴重的炎性反應，損傷血管內皮細胞，使得血管重鑄發生異常[12-13]。PE發病前期，內細胞損傷是重要環節，但是內細胞損傷的發病機制尚未明確，研究發現[14]，內皮細胞中的IFI16參與抑制細胞分化、增殖及凋亡的過程，在外界因素的影響下，IFIF16從細胞內轉移到細胞外，血清中高濃度的IFI16水平參與內皮細胞損傷，推測IFI16是血管性疾病的重要調控因子。

干擾素結合相應的受體，誘導干擾素相關蛋白的表達，從而發揮免疫調節、加速細胞凋亡及抑制細胞增殖的作用[15]。干擾素γ誘導蛋白200家族包括13個鼠成員蛋白，如p202a、p202b、p203、p204等，和5個人成員蛋白，如IFI16、AIM2、MNDA、PYHIN1，該家族蛋白主要對于各類免疫反應、細胞周期調節、細胞生長及分化中發揮重要作用[16]。IFI16作為干擾素γ誘導蛋白200家族成員之一，基因編碼定位于1q21～23，主要出現在成纖維細胞、上皮細胞、造血細胞和內皮細胞的細胞質或細胞核內，是細胞內雙鏈DNA的免疫受體，參與細胞生長、凋亡、衰老及血管形成等過程[17-18]。本研究結果發現，研究組孕婦血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平均明顯高于對照組（P < 0.05），推測可能是因為PE患者處于高炎性反應和氧化應激狀態，導致血清IFI16及胎盤中IFI16蛋白的高表達[5]。結果還發現，隨著PE嚴重程度的加重，血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平顯著升高（P < 0.05）。這與朱敏等[6]的研究結果一致，IFI16的氨基端有一個DAPIN結構域，由88個氨基酸組成，這個結構域通過介導干擾素的應答反應、細胞凋亡及炎性信號通路蛋白的集合從而影響細胞凋亡及炎癥反應的功能[19]，同時氨基端PYRIN結構域與銜接蛋白ASC結合，形成活化的炎癥小體，激活caspase-1，上調白細胞介素-1β和白細胞介素-18，激活機體的免疫反應[20]，另外IFI16結合細胞周期相關蛋白，調控信號通路，減慢細胞周期的發展，加速細胞衰老和凋亡，從而發揮細胞的生長及周期調節作用[16]。早發型和晚發型PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平之間的差異無統計學意義（P > 0.05），這可能與選擇病例的范圍及特點有段，或者是選擇樣本量較小導致的后期研究中需要擴大樣本量和樣本選擇的范圍進一步研究。另外，PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表達水平呈正相關（P < 0.05），可能是因為受到外界因素的影響，細胞壞死，胎盤中的IFI6蛋白表達水平升高，通過胎盤和血液的屏障，進入血液循環系統[5]。

綜上所述，IFI16在PE患者的血清及胎盤中表達水平升高，并且與PE的嚴重程度密切相關，為臨床上診斷PE提供新的指標，同時為治療PE開拓新的治療思路。

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（收稿日期：2018-01-18 本文編輯：任 念）