外周血Th17細胞對膿毒癥急性腎損傷的早期診斷價值

何 晗，劉新君，魏 炯

(四川省巴中市中心醫院腎內科 636000)

急性腎損傷(AKI)是由多種原因引起的腎功能不全，導致毒素蓄積，近年來，其發病率和病死率均呈明顯升高趨勢[1]。有研究顯示，膿毒癥是引起AKI的重要原因，其病死率高達44%[2]。因此，對膿毒癥AKI進行早期診斷，從而有效進行干預治療，是降低其病死率的關鍵。有研究顯示，外周血Th17細胞可作為膿毒癥的早期診斷標志物，對于膿毒癥的診斷具有較高的敏感度和特異度[3]。但外周血Th17細胞對膿毒癥AKI的早期診斷效能如何，目前少有相關研究報道。本研究通過觀察膿毒癥及膿毒癥AKI患者外周血Th17細胞水平，探討外周血Th17細胞水平在膿毒癥AKI早期診斷中的作用，并指導臨床治療，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年8月至2016年8月本院收治的300例膿毒癥患者作為研究對象，其中男215例，女85例；年齡21～80歲，平均(51.2±10.3)歲。所有患者均滿足2012年膿毒癥國際診斷與治療指南標準[4]。排除免疫系統疾病、終末期腎臟病、長期行血液透析及近期使用免疫抑制劑治療的患者。膿毒癥的病因主要包括：肺部感染105例，腹腔感染70例，尿路感染50例，皮膚軟組織感染30例及其他45例。根據膿毒癥是否并發AKI，將上述患者分為AKI組(65例)和非AKI組(235例)。AKI組患者均滿足AKI診斷標準：48 h內患者體內肌酐升高水平≥26.5 μmol/L或肌酐增加≥基線水平的50%，或尿量持續6 h內<0.5 mL/(kg·h)。根據急性生理與慢性健康狀況(APACHE Ⅱ)評分標準對AKI組患者按病情嚴重程度進行分級。另選取同期在本院體檢的80例健康者作為對照組。兩組研究對象在性別、年齡等方面比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；同時，AKI組與非AKI組在膿毒癥病因方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)。該臨床研究獲得本院倫理委員會批準，并嚴格遵守醫學倫理規范執行。

1.2治療方法 所有膿毒癥患者均參照2008年膿毒癥國際治療指南標準給予膿毒癥集束化治療，包括抗感染、液體復蘇、強化胰島素、營養及呼吸支持等治療，必要時給予小劑量糖皮質激素及連續性血液凈化治療。

1.3標本采集與檢測 在取得知情同意的情況下，采集膿毒癥患者治療前后及對照組血液標本。(1)外周血Th17細胞檢測：清晨空腹采集膿毒癥患者及對照組外周靜脈血3 mL，經肝素抗凝，1 500 r/min常溫下離心15 min后，采用流式細胞儀檢測Th17細胞水平，具體操作步驟參照外周血Th17細胞檢測相關參考文獻[5]。(2)白細胞介素(IL)-17和IL-6：采用ELISA檢測各組研究對象外周血IL-17和IL-6水平，嚴格按試劑盒(武漢博士德生物科技有限公司產品)說明書操作。(3)采集外周靜脈血標本檢測血常規、胱抑素C(Cys C)及其他指標。

2 結 果

2.1各組Th17細胞、IL-17、IL-6及Cys C水平比較 見表1、圖1。AKI組外周血Th17細胞、IL-17、IL-6及Cys C水平均明顯高于非AKI組和對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。非AKI組外周血Th17細胞、IL-17、IL-6水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，而Cys C水平比較，兩組差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 各組Th17細胞、IL-17、IL-6及Cys C水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與非AKI組比較，#P<0.05

圖1 不同組間外周血Th17細胞水平

2.2AKI組患者治療前后外周血Th17細胞、IL-17、IL-6及Cys C水平比較 見表2。經有效治療后，AKI組患者外周血Th17細胞、IL-17、IL-6及Cys C水平較治療前均明顯降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。

表2 AKI組患者治療前后Th17細胞、IL-17、IL-6及Cys C水平比較

注：與治療前比較，*P<0.05

2.3外周血Th17細胞與IL-17、IL-6、Cys C及APACHE Ⅱ評分的相關性分析 對AKI組患者外周血Th17細胞與IL-17、IL-6、Cys C及APACHE Ⅱ評分進行相關分析結果顯示，外周血Th17細胞與IL-17、IL-6、Cys C水平及APACHE Ⅱ 評分均呈明顯正相關(r=0.81、0.65、0.72、0.76，P<0.01)。

2.4AKI組外周血Th17細胞的ROC曲線分析 通過ROC曲線分析發現，外周血Th17細胞的曲線下面積(AUC)為0.850(95%CI：0.771～0.912)，截斷值為7.4%，敏感度和特異度分別為86.1%和83.5%；IL-17的AUC為0.801(95%CI：0.715～0.895)，截斷值為35.1 ng/L，敏感度和特異度分別為78.2%和79.5%；IL-6的AUC為0.759(95%CI：0.674～0.831)，截斷值為23.2 ng/L，敏感度和特異度分別為70.1%和68.6%；Cys C的AUC為0.783(95%CI：0.701～0.857)，截斷值為2.2 mg/L，敏感度和特異度分別為76.5%和74.8%。外周血Th17細胞AUC、敏感度及特異度均明顯優于IL-17、IL-6及Cys C。

3 討 論

膿毒癥是誘發AKI的重要原因，其主要機制與內毒素、炎癥因子的大量釋放，導致腎損傷有關[6]。盡管對膿毒癥AKI發生的早期認識和治療已取得一定進展，但AKI患者的病死率目前仍然較高，其重要原因之一是缺乏有效的早期診斷膿毒癥AKI的生物標志物，延誤了最佳的治療時間窗。傳統的生化標志物如SCr、24 h尿量及尿素氮等指標雖然臨床應用廣泛，但容易受年齡、性別等外界因素的影響，同時其水平變化較慢，不能早期反映腎功能情況[7]。因此，探索新的早期診斷膿毒癥AKI的標志物，是提高膿毒癥AKI患者生存率的關鍵。

炎性反應在膿毒癥的發生和發展過程中起著關鍵作用，其中淋巴細胞是刺激炎性反應及調節免疫應答的重要效應器[8]。根據細胞表面分化抗原的不同，T淋巴細胞分為CD4+和CD8+2個亞群，其中CD4主要表達于輔助T細胞，參與細胞介導的免疫應答。近年來研究發現，在轉化生長因子β和IL-6的共同誘導下可分化一種新的淋巴細胞亞群Th17，其主要分泌IL-17，參與炎性反應[9]。Th17細胞可通過招募中性粒細胞，使其激活，抵抗細菌感染[10]。相關研究證實，在膿毒癥及相關感染性疾病中，其外周血中Th17細胞水平明顯升高，并且與疾病的嚴重程度密切相關，機體Th17細胞水平及其功能在極大程度上決定了其患者病情嚴重程度及預后情況[11-12]。本研究通過檢測各組外周血Th17細胞水平，結果顯示，膿毒癥AKI組明顯高于非AKI組和對照組，表明外周血Th17細胞水平的升高可能與膿毒癥AKI的發生有關。針對AKI組患者病情給予相應治療后，其外周血Th17細胞水平明顯降低，表明外周血Th17細胞水平的變化與膿毒癥AKI患者的臨床治療效果密切相關。進一步相關性分析顯示，外周血Th17細胞水平與IL-17、IL-6、Cys C及APACHE Ⅱ評分呈明顯正相關，即外周血Th17細胞水平與AKI患者病情嚴重程度密切相關。通過ROC曲線分析顯示，外周血Th17細胞水平對膿毒癥AKI的早期診斷價值高于IL-17、IL-6及Cys C水平，并且其敏感度和特異度均較高，可更有效地反映早期腎損害。本研究由于膿毒癥AKI樣本量偏少，缺乏足夠說服力，同時存在部分未被納入的AKI患者，可能導致一定的偏倚。此外，由于樣本量的限制，未對納入的膿毒癥AKI患者的病情嚴重程度進一步分層比較各分組間指標的差異。需進一步擴大樣本量，采取多中心聯合的方式對外周血Th17細胞水平在早期診斷膿毒癥AKI的臨床價值方面做進一步研究。

綜上所述，外周血Th17細胞水平對早期診斷膿毒癥AKI患者具有較高的敏感度和特異度，可作為膿毒癥AKI早期診斷的新型生物標志物。

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