雞感染新城疫的診斷及抗體水平檢測

詹麗娥 陸冰洋 劉華棟 李婷婷 唐娟 王彩先 丁樹榮

摘要：近年來，在山西省不同地區總發現有新城疫（ NDv）的發生。本文針對一例疑似病例通過臨床癥狀，剖檢變化，PCR鑒定等方法對其進行診斷，確定其為新城疫感染。研究過程中發現通過使用血凝抑制試驗方法對養殖場的雞群進行采血檢測，測定養殖場整體抗體水平高低不均勻，確定雞群整體存在發病風險，從而為養殖場新城疫的防控提供參考。

關鍵詞：新城疫；RT-PCR；抗體

2017年3月9日山西省晉中地區某養雞場150日齡的蛋雞發生疾病，此養雞場存欄雞8000只，近期部分雞發生疾病。整群精神狀態差，采食量和飲水量均下降。場主攜帶3只發病雞（2只活雞，1只死雞）來筆者研究室進行診斷。

1臨床癥狀

病雞精神沉郁、垂頭縮頸、翅翼下垂、雞冠、肉髯發紫呈暗紅色、呆立、狀似昏睡、食欲減少。主要癥狀表現在呼吸道，包括咳嗽、張口呼吸、呼吸時偶爾會伴有拉長的怪叫聲。嗉囊內積有液狀內容物，倒提時常從口角流出大量酸臭的暗灰色液體。排黃綠色或黃白色水樣稀便，有時混有少量血液。雞產蛋下降或停產，蛋殼質量變差；

2病理變化

病變主要集中在消化道，腺胃、小腸和盲腸病變最為明顯。腺胃乳頭腫脹、出血或潰瘍，尤其是在與食道或腺胃交界處最明顯。十二指腸黏膜及小腸黏膜出血或潰瘍，有的可見到“棗核狀潰瘍灶”，表面有黃色或灰綠色纖維素膜覆蓋。盲腸扁桃體腫大、出血和壞死。呼吸道以卡他性炎癥和氣管充血、出血為主。鼻道、喉、氣管中有漿液性或卡他性滲出物。

3 PCR鑒定

從發病雞的肺臟、肝臟、脾臟等器官取樣19，剪碎混勻后取0.05g研磨，8000rpm離心后取上清液，使用新城疫病毒通用型RT-PCR檢測試劑盒檢測NDV，取已處理的樣品，加入裂解液600 μ L，充分顛倒混勻，室溫靜置3～5min。將液體吸入吸附柱中，13000rpm離心30s。棄去收集管中的液體，加入600μL洗液，13000rpm離心30s。重復上一步。棄去收集管中液體，13000rpm空柱離心2min，以除去殘留的洗滌液。將吸附柱移入新的1.5mL離心管中，向柱中央加入洗脫液50μL，室溫靜置1min，13000rpm離心30s，離心管中液體即為模板RNA。反轉錄條件為：42℃45min，94℃3min；PCR反應條件為：94℃30s，55℃30s，72℃30s，共循環35次，72℃延伸7min。使用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增結果，結果見圖1。

由圖1結果可見，擴增出明顯的條帶，與試劑盒里設定的擴增片段大小相符。

4診斷

通過臨床癥狀、剖檢病理變化和PCR鑒定，確定病雞感染新城疫。

5抗體檢測

采用農業部1999年頒布的14種動物疫病檢測方法中的紅細胞凝集抑制試驗（ Hl），微量法[1]檢測被檢血清Hl抗體效價。對全雞場雞群進行抗體檢測，按照0.5%的比例抽樣。按照比例抽檢出39份樣品，檢測結果見表1。

由表1可知，該養殖場的抗體效價分布從3到8都有，可見分布極為不均勻。

6防治

針對試驗結果，在飲水中添加安普霉素防止大腸桿菌感染，肌內注射新城疫I系疫苗[2]，同時淘汰處理已發病的病雞。養殖場加強通風、清掃和消毒工作。經使用治療方案5天后，雞群整體精神恢復正常，無死亡。

7討論

新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastledisease virus，NDv）引起的危害多種家禽特別是陸生禽類的最主要傳染病之一。一些發達國家采用強制撲殺強毒感染禽群為主的方法，已基本控制了本病[3]。由于整體飼養管理水平的限制和強毒感染的普遍存在，免疫接種目前仍是我國控制新城疫的主要辦法[4]。

雞群建立快速的黏膜免疫和在組織、血液中產生持久高水平的循環抗體，在強毒感染情況下的臨床保護和有效降低排毒率方面更好[5]。而且新城疫的保護力與抗體的平均水平[6]和抗體結果的離散度[7]具有相關性。本例雞場的抗體檢測結果可見抗體分布不均勻，根據農業部標準，抗體水平低于4 log2即沒有保護力，缺乏保護力的雞數量較多，由于目前已經有雞發生新城疫，這樣的抗體水平很難抵抗新城疫病毒的攻擊而導致群體暴發新城疫。

本例雞場出現抗體水平的不均勻與養殖場飼養管理水平相關，經與場主溝通，雞場的免疫主要由飼養員來做，由于飼養員對疫苗的運輸、保存、使用等方面的技術水平有限，而且免疫后不做抗體檢測，不關注免疫效果，此次抗體檢測的結果可見抗體水平高低不均勻，很多雞的抗體水平過低，不具有保護力。此次發病應為抗體水平過低的雞最先感染新城疫引起的發病。

參考文獻：

[1]于大海，崔覘林，中國進出境動物檢疫規范[M]北京：中國農業出版社，1997：336-340

[2]王玉茂，周海永，李峰蛋雞新城疫與大腸桿菌混合感染的診治[J]黑龍江畜牧獸醫，2014，（3）：76-77

[3]程小果，王慧，程寧，新城疫的合理免疫及常見疫苗使用誤區[J]動物醫學進展，2016，37（6）：116-120

[4]SaffYM，蘇敬良，高福，索勛，譯禽病學[M]北京中國農業出版社.2012：81-82

[5]朱錢龍，李艷，堯國榮，等雞新城疫免疫程序的探討[J]黑龍江畜牧獸醫，2012，（6）：124-126

[6]甘孟侯.中國禽病學[M]北京：中國農業出版社.1999：8-21

[7]湯承，岳華，劉小銀，等免疫雞群新城疫強毒感染及其與Hl抗體的相關性研究，中國家禽，2009，31（4）：11-14