兩種方法在檢測肺泡灌洗液中結(jié)核分枝桿菌的結(jié)果分析

李娜娜，劉梅，劉權(quán)賢，王鴻，何月娟，王建華，陳玲

（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸二科，貴州 遵義 563003）

0 引言

肺結(jié)核是最常見的結(jié)核病，同時(shí)也是結(jié)核病最重要的傳染源，因此對肺結(jié)核患者準(zhǔn)確、及時(shí)的診斷和治愈不僅讓患者恢復(fù)了健康，而且在消除傳染源、控制結(jié)核病流行工作中也具有重要作用[1]。當(dāng)前肺結(jié)核實(shí)驗(yàn)室診斷方法多樣，本研究旨在分析羅氏培養(yǎng)法和Gene Xpert MTB/RIF法在肺泡灌洗液檢出結(jié)核分枝桿菌的陽性率，探討兩者的診斷價(jià)值。具體結(jié)果如下：

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取2017年1月至2017年6月于某院就診的可疑肺結(jié)核病患者420例，其中男性229例，女性191例；年齡7-87歲。

1.2 儀器與試劑

Gene Xpert MTB/RIF檢測試劑盒購自美國Cepheid公司生產(chǎn)，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。所有羅氏培養(yǎng)的培養(yǎng)基均按照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》制備，抗酸染色液試劑盒由珠海貝索生物有限公司提供。

1.3 研究方法

1.3.1 Gene Xpert MTB/RIF檢測肺泡灌洗液中的結(jié)核分枝桿菌

每例患者行支氣管鏡檢查后留取肺泡灌洗液2份，每份10mL，任選1份灌洗液3000r/min離心20min，然后棄上清留取1mL沉淀用于Gene Xpert MTB/RIF檢測，按照Gene Xpert MTB/RIF檢測操作流程進(jìn)行檢測，2h后觀察結(jié)果。

1.3.2 羅氏培養(yǎng)法檢出肺泡灌洗液中的結(jié)核分枝桿菌

選取10mL肺泡灌洗液，加入等倍體積4.0%的 NaOH 消化處理10min，然后去1mL接種到酸性羅氏斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)箱孵育，每周記錄結(jié)核分枝桿菌生長情況，連續(xù)觀察8周，8周后未生長細(xì)菌報(bào)告陰性。若培養(yǎng)基斜面上見菌落生長，則進(jìn)行抗酸染色檢測，檢測陽性再采用對硝基苯甲酸(PNB)鑒定。

1.3.3 羅氏比例法藥物敏感性試驗(yàn)

按照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》要求，培養(yǎng)陽性新鮮菌落通過超聲分散儀磨菌制備成1.0麥?zhǔn)蠞岫龋♂尦?0-2mg/mL和l0-4mg/mL，分別接種10μl到羅氏培養(yǎng)基和含利福平濃度為40μg/mL，37℃培養(yǎng)4周后觀察報(bào)告結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用Graphpad prism統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，采用配對卡方檢驗(yàn)進(jìn)行比對χ2檢驗(yàn),以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Gene Xpert MTB/RIF法檢測結(jié)果

420份可疑肺結(jié)核患者臨床標(biāo)本Gene Xpert MTB/RIF檢測陽性83例，陽性率19.8%，其中羅氏培養(yǎng)陽性42例，占Gene Xpert MTB/RIF檢測陽性的50.6%。檢出結(jié)核分枝桿菌利福平耐藥4例，耐藥率4.8%。

2.2 羅氏培養(yǎng)法培養(yǎng)結(jié)果

420份肺泡灌洗液羅氏培養(yǎng)陽性50例，培養(yǎng)陽性率為11.9%，其中Gene Xpert MTB/RIF檢測陽性42例，占羅氏培養(yǎng)陽性標(biāo)本的84.0%。

2.3 羅氏培養(yǎng)法與Gene Xpert MTB/RIF法比較

羅氏培養(yǎng)法培養(yǎng)陽性的50例肺泡灌洗液中，Gene Xpert MTB/RIF陽性42例，兩者之間符合率為84.0%。 羅氏培法養(yǎng)陰性的369例標(biāo)本中，Gene Xpert MTB/RIF法陽性41例，占11.1%，41例患者經(jīng)查詢病歷結(jié)果確認(rèn)臨床診斷均為肺結(jié)核；Gene Xpert MTB/RIF法陽性率為19.8%，羅氏培養(yǎng)法檢出的陽性率為11.9%，Gene Xpert MTB/RIF法陽性率高于羅氏培養(yǎng)法，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。以傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，Gene Xpert MTB/RIF檢測法的敏感度為50.6%，特異度為97.6%，陽性預(yù)測值為84.0%，陰性預(yù)測值為88.9%。

2.4 羅氏培養(yǎng)法與Gene Xpert MTB/RIF法任一陽性

羅氏培養(yǎng)與 Gene Xpert MTB/RIF法任一陽性標(biāo)本91例，陽性率為21.7%，聯(lián)合羅氏培養(yǎng)法與Gene Xpert法共同檢測肺泡灌洗液，可提高肺結(jié)核患者陽性檢出率。見表1。

表1 2種檢測方法不同組合對肺泡灌洗液結(jié)核分枝桿菌的檢出情況

3 討論

肺結(jié)核的診斷常規(guī)以痰標(biāo)本檢測為主，臨床中約1/3的患者為痰液稀少或無痰。支氣管鏡檢查是診斷肺結(jié)核尤其是涂陰肺結(jié)核的重要手段，是無法自主排痰患者必不可少的檢查手段，不僅可以直觀地觀察氣管、支氣管黏膜的受累部位及情況，同時(shí)還可以進(jìn)行活檢、刷檢、肺泡灌洗及活檢病理檢查，通過對這些標(biāo)本的檢測可以提高涂陰肺結(jié)核患者的檢出率［2]。Gene Xpert MTB/RIF檢測法是目前結(jié)核病診斷中污染少、簡便易行、快速準(zhǔn)確的一種分子生物學(xué)方法[3]，已經(jīng)運(yùn)用于痰液、尿液、胸腹水、肺泡灌洗液以及腦脊液等多種臨床樣本的檢測[4-6]。本實(shí)驗(yàn)Gene Xpert MTB/RIF法的敏感度為50.6%，均低于低于Steingart KR等[7]報(bào)道的67.0%，也低于林永通、黃建斌等[8，9]國內(nèi)學(xué)者報(bào)道，但高于陳潔報(bào)道的31.6%[10]，本實(shí)驗(yàn)肺泡灌洗液的檢出率與國內(nèi)外報(bào)道基本一致。本文2種方法聯(lián)合應(yīng)用不僅可以提高肺泡灌洗液的陽性率，同時(shí)培養(yǎng)方法與Gene Xpert MTB/RIF方法相對照，還可以區(qū)分檢測對象感染的結(jié)核分枝桿菌是活菌還是死菌，特別是確診結(jié)核后已經(jīng)進(jìn)行抗結(jié)核治療的患者，通過傳統(tǒng)培養(yǎng)法可以驗(yàn)證治療方案的有效性。

綜上所述，Gene Xpert MTB/RIF檢測系統(tǒng)在檢測臨床疑似肺結(jié)核病患者肺泡灌洗液中都具有重要的意義，盡管Gene Xpert MTB/RIF檢測系統(tǒng)的敏感性高于傳統(tǒng)培養(yǎng)法，但是傳統(tǒng)培養(yǎng)法的價(jià)值也是不可忽視的，建議臨床常規(guī)進(jìn)行2種方法的檢測。

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