不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種母種的影響*

王慶武，叢倩倩，李秀梅，安秀榮

（山東省泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 泰安 271000）

食用菌菌種隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，將會(huì)發(fā)生老化現(xiàn)象，產(chǎn)生一系列生理生化變化[1]，如菌絲萌發(fā)時(shí)間延長(zhǎng)，生長(zhǎng)速度減慢，長(zhǎng)勢(shì)減弱[2]，抗逆性差，品質(zhì)和產(chǎn)量降低等情況，嚴(yán)重影響菇農(nóng)的經(jīng)濟(jì)效益。側(cè)耳屬（Pleurotus spp.）目前已知包含31個(gè)種[3]，其中平菇（Pleurotus osreatus）、杏鮑菇（Pleurotus eryngii）、秀珍菇（Pleurotus pulmonarius）的栽培最為廣泛[4]，為了解側(cè)耳屬3個(gè)主要栽培種的母種保藏時(shí)間對(duì)菌種的影響，開(kāi)展了保藏時(shí)間對(duì)菌種的影響試驗(yàn)，旨在為側(cè)耳屬3個(gè)主要品種的栽培提供科學(xué)依據(jù)，從而為地方菌種生產(chǎn)起到帶動(dòng)和引導(dǎo)作用[5]。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

本實(shí)驗(yàn)室保存的平菇99、秀珍菇和杏鮑菇菌株。

1.2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200 g、麩皮40 g、葡萄糖20 g、硫酸鎂1.5 g、磷酸二氫鉀3 g、瓊脂20 g，定容至1 000 mL。

液體菌種培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200 g、麩皮40 g，煮汁過(guò)濾后，在濾液中加入葡萄糖20 g、硫酸鎂1.5 g、磷酸二氫鉀3 g，定容至1 000 mL，分裝到150 mL三角瓶中。

原種培養(yǎng)基配方：棉籽殼86%、麥麩10%、葡萄糖1%、硫酸鈣1%、生石灰粉2%。

栽培袋培養(yǎng)基配方：棉籽殼67%、玉米芯30%、麥麩10%、硫酸鈣1%、生石灰粉2%。

1.3 母種制作

按照配方，對(duì)供試菌株每隔3個(gè)月制作母種1次，然后放入冰箱內(nèi)4℃保藏，保藏時(shí)間依次為12個(gè)、9個(gè)、6個(gè)、3個(gè)、0個(gè)月共5個(gè)梯度。

1.4 酶活的檢測(cè)

對(duì)3個(gè)種不同保藏時(shí)間的菌株，分別檢測(cè)其菌絲體羧甲基纖維素酶酶活性、淀粉酶酶活性、木聚糖酶酶活性。

1.4.1 菌絲體的培養(yǎng)

在液體菌種培養(yǎng)基中分別接入3個(gè)種不同保藏時(shí)間的菌株，每瓶接入8 mm的菌絲圓片，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，置于25℃靜置培養(yǎng)7 d。

1.4.2 粗酶液的制備

將三角瓶?jī)?nèi)表面菌絲使用4層紗布濾去，取濾液5 mL于10 mL離心管中，4 000 r·min-1，4℃離心10 min，取上清。

1.4.3 纖維素酶酶活性的測(cè)定

按照參考文獻(xiàn)[6]的方法進(jìn)行測(cè)定。酶活力單位（U·mL-1）定義為：在測(cè)定條件下，1 mL酶液每分鐘水解底物生成1 μg葡萄糖所需的酶量。

1.4.4 淀粉酶酶活性的測(cè)定

按照參考文獻(xiàn)[7]的方法進(jìn)行測(cè)定。酶活力單位（U·mL-1）定義為：在測(cè)定條件下，1 mL酶液每分鐘水解底物生成1 μg葡萄糖所需的酶量。

1.4.5 木聚糖酶酶活性的測(cè)定

按照參考文獻(xiàn)[6]的方法進(jìn)行測(cè)定。酶活力單位（U·mL-1）定義為：在測(cè)定條件下，1 mL酶液每分鐘水解底物生成1 μg木糖所需的酶量。

以上測(cè)定以煮沸15 min的粗酶液為對(duì)照，每組3個(gè)重復(fù)，取平均值。

1.5 原種制作

母種保藏時(shí)間到時(shí)后，按常規(guī)方法統(tǒng)一制作原種。

1.6 栽培袋制作

原種滿瓶后制作栽培袋。采用17 cm×33 cm聚丙烯塑料袋，每袋裝干料0.422 kg。

1.7 出菇

栽培袋滿袋后進(jìn)入試驗(yàn)棚，采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)[8]，3次重復(fù)，每重復(fù)30袋，菇棚內(nèi)墻式兩端小口定位出菇[9]。出菇期只給水，不使用任何農(nóng)藥和添加劑[10]，常規(guī)管理。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

記錄酶活值、菌絲生長(zhǎng)情況，子實(shí)體采收后稱重，計(jì)算生物學(xué)效率，采用Duncan’s新復(fù)極差對(duì)各處理數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析[11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌種不同保藏時(shí)間對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

菌種不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種菌絲生長(zhǎng)的影響結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 菌種不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種菌絲生長(zhǎng)的影響Tab.1 Effects of different preservation time on mycelial growth of three species of Pleurotus

由表1可以看出，側(cè)耳屬3個(gè)種的菌種在不同保藏時(shí)間下菌絲均能恢復(fù)生長(zhǎng)，但在菌落萌發(fā)時(shí)間、菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)方面存在差異。平菇菌種保藏時(shí)間3個(gè)月之內(nèi)菌落萌發(fā)最快，菌落的萌發(fā)時(shí)間為1 d，保藏時(shí)間6個(gè)月～9個(gè)月時(shí)，菌落的萌發(fā)時(shí)間為2 d，保藏時(shí)間12個(gè)月時(shí)，菌落的萌發(fā)時(shí)間為3 d；剛轉(zhuǎn)接的菌種菌絲生長(zhǎng)速度最快，為 4.24 mm·d－1，保藏時(shí)間12個(gè)月的菌種菌絲生長(zhǎng)速度最慢，為3.47 mm·d－1；保藏時(shí)間6個(gè)月之內(nèi)菌絲長(zhǎng)勢(shì)好，保藏時(shí)間6個(gè)月～12個(gè)月菌絲長(zhǎng)勢(shì)較好。杏鮑菇菌種保藏時(shí)間3個(gè)月之內(nèi)菌落萌發(fā)最快，萌發(fā)時(shí)間為1 d，保藏時(shí)間超過(guò)3個(gè)月萌發(fā)時(shí)間逐漸延長(zhǎng)；剛轉(zhuǎn)接的菌種菌絲生長(zhǎng)速度最快，為4.18 mm·d－1，菌絲長(zhǎng)勢(shì)好，隨保藏時(shí)間的延長(zhǎng)菌絲生長(zhǎng)速度減慢、長(zhǎng)勢(shì)減弱。剛轉(zhuǎn)接的秀珍菇菌種菌落萌發(fā)最快，萌發(fā)時(shí)間為1 d，菌絲生長(zhǎng)速度最快，為3.02 mm·d－1，且菌絲長(zhǎng)勢(shì)好；保藏時(shí)間3個(gè)月及以上，菌落萌發(fā)時(shí)間逐漸延長(zhǎng)，菌絲生長(zhǎng)速度逐漸減慢，長(zhǎng)勢(shì)減弱。

2.2 菌種不同保藏時(shí)間對(duì)酶活性的影響

菌種不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種菌絲酶活性的影響結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 菌種不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種菌絲酶活性的影響Tab.2 Effects of different preservation time on mycelial enzyme activity of three species of Pleurotus

由表2可以看出，母種不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種的酶活性有一定的影響。保藏時(shí)間對(duì)平菇羧甲基纖維素酶和淀粉酶酶活性影響差異不顯著，對(duì)木聚糖酶酶活性影響差異顯著，隨著保藏時(shí)間的延長(zhǎng)，木聚糖酶酶活性逐漸降低。杏鮑菇3種酶的活性隨保藏時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低。保藏時(shí)間對(duì)秀珍菇羧甲基纖維素酶和木聚糖酶酶活性影響差異不顯著，對(duì)淀粉酶酶活性影響差異顯著，隨著保藏時(shí)間延長(zhǎng)，淀粉酶酶活性逐漸降低。

2.3 菌種不同保藏時(shí)間對(duì)生物學(xué)效率的影響

菌種不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種生物學(xué)效率的影響結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可以看出，側(cè)耳屬3個(gè)種菌種在不同保藏時(shí)間下生物學(xué)效率、出菇污染率均有差異。3個(gè)種隨菌種保藏時(shí)間的延長(zhǎng)，其子實(shí)體生物學(xué)效率均逐漸降低。平菇99和秀珍菇菌種保藏時(shí)間3個(gè)月之內(nèi)各自出菇污染率最低，且他們之間無(wú)差異，當(dāng)保藏時(shí)間超過(guò)3個(gè)月，隨其保藏時(shí)間延長(zhǎng)各自出菇污染率逐漸升高；杏鮑菇菌種保藏時(shí)間6個(gè)月之內(nèi)出菇污染率最低，彼此間無(wú)差異，當(dāng)保藏時(shí)間超過(guò)6個(gè)月，隨其保藏時(shí)間延長(zhǎng)出菇污染率逐漸升高。

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)表明，不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種母種菌絲生長(zhǎng)有一定的影響，3個(gè)種菌種隨保藏時(shí)間的延長(zhǎng)其菌落萌發(fā)時(shí)間延長(zhǎng)，菌絲生長(zhǎng)速度逐漸減慢，菌絲長(zhǎng)勢(shì)也逐漸減弱。

表3 菌種不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種生物學(xué)效率的影響Tab.3 Effects of different preservation time on biological efficiency of three species of Pleurotus

不同保藏時(shí)間對(duì)平菇木聚糖酶酶活性有影響，隨保藏時(shí)間延長(zhǎng)，酶活性降低，其他2種酶酶活性影響不大。杏鮑菇3種酶活性隨保藏時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低，表明酶活性與生物學(xué)效率呈正相關(guān)。不同保藏時(shí)間對(duì)秀珍菇淀粉酶酶活性有影響，隨其保藏時(shí)間延長(zhǎng)酶活性降低，其他2種酶酶活性影響不大。此外，不同保藏時(shí)間對(duì)側(cè)耳屬3個(gè)種出菇污染率和生物學(xué)效率也有影響，隨菌種保藏時(shí)間的延長(zhǎng)，生物學(xué)效率逐漸降低，出菇污染率逐漸升高，表明隨保藏時(shí)間的延長(zhǎng)，菌種活力減弱，抗逆性降低，菌種老化，致使產(chǎn)量降低，污染率升高。根據(jù)試驗(yàn)中菌種保藏時(shí)間對(duì)菌絲生長(zhǎng)、生物學(xué)效率和出菇污染率的影響，生產(chǎn)中建議側(cè)耳屬3個(gè)種母種保藏時(shí)間不超過(guò)3個(gè)月，以保持菌種活力，保證菌種質(zhì)量與產(chǎn)量。

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