組培速生楸青枯病及病原調查

李成凱,邵云華,薛德山,戰鑫,熊雄

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組培速生楸青枯病及病原調查

李成凱1,邵云華2*,薛德山3,戰鑫2,熊雄2

1. 山東省萊蕪市林業局, 山東 萊蕪 271100 2. 山東農業大學 植保學院, 山東 泰安 271018 3. 山東省海陽市林業局, 山東 海陽 265100

組培速生楸青枯病主要危害地莖和根部，癥狀類型：1. 地莖變黑壞死，上部萎焉死亡，壞死地莖處出現許多小菌核；2. 隨苗木木質化增高，根部腐爛壞死，植株死亡，壞死病部出現粉狀孢子。在溫度高濕度大的情況下發病重。經組織分離和接種試驗，主要病原菌為，其次是。

組培速生楸; 青枯病; 癥狀; 病原

楸（C.A.Mey.）紫葳科喬木，高8~10 m，我國廣泛分布，是優良的用材、庭院觀賞、園林綠化樹種。隨著國家綠色發展和山東生態區域建設綜合開發造林的需要，上海杉一植物科技公司，連續4年經多代組培和定向優選出的楸樹優良新品系，其生根能力強，特別速生、優質、干直，深受歡迎。2015年發現田間苗期植株不斷枯死，先是地莖部變黑，逐步向上向下蔓延，最后整株死亡。關于對該病的研究，國內未見報道[1]。為此，結合全省林業有害生物普查，我們對該病進行了全面調查和研究，現將結果報道如下。

1 危害癥狀

2015年從組培速生楸苗圃中發現植株青枯，2016年調查，在山東、河南、河北栽培區均有零星發生，以栽植后50 cm左右的幼苗發展速度最快，見葉萎焉，幾天就會死亡；另一種情況是隨著苗木木質化程度增高，生長在70~100 cm的苗木，根部變黑死亡，導致整個植株枯萎。特別是進入7月高溫高濕發病重[2]。

該病主要危害速生楸的地莖處，逐步向上擴展，導致植株枯死。一種情況是初期，地莖表皮出現淺色小潰瘍，后漸變暗褐色至黑色水漬狀病斑，隨即擴大包圍全莖，這時上部葉片萎焉，頂芽枯死，以后下部葉片也相繼枯死下垂但不脫落；另一種情況是隨著苗木木質化程度增高，生長在80 cm左右的苗木，根部壞死，導致植株死亡。剖開受害干莖，可見皮層肥腫皺縮，內皮組織腐爛呈海綿狀，灰白色，其中生有許多小菌核，木質部也有少量菌核。根部壞死，拔出苗木，皮層容易脫離，病部有粉狀孢子。

圖 1 速生楸青枯病危害狀

2 病原

2.1 組織分離

2015病害出現后，我們先后從山東、河北采集材料，用常規方法組織分離4次，分離病組織248塊。先用清水沖洗，后用4%有效氯漂白粉液和70%酒精表面消毒，最后用無菌水沖洗3次，置于PDA培養基上，分別置于25 ℃、27 ℃、29 ℃、31 ℃、33 ℃下培養，10 d后檢查結果(表1)。病組織經分離培養，得到3種不同的真菌菌落，其中主要有球殼孢菌和鐮孢霉菌，同時出現少量鏈格孢菌，發現鐮孢霉菌27 ℃、球殼孢菌31 ℃~33 ℃生長最盛。

表 1 組培速生楸青枯病組織分離結果

2.2 接種試驗

用病組織分離培養得到地球殼孢菌和鐮孢霉菌單孢純培養，將獲得的孢子分別配制孢子懸浮液(×100視野含50個左右孢子)；把速生楸當年枝條和根部進行表面消毒，無菌水沖洗；用燙傷和不燙傷兩種方法噴灑接種，無菌水作對照；保濕24 h后，放入27 °C溫箱中水培5 d，再放入31 °C溫箱中水培5 d檢查結果見表2。再分離發病枝條的組織，獲得原病菌見表3。由表2、3可知，兩種病原菌都有明顯的致病性。燙傷和不燙傷接種，前者更容易接種。

表 2 組培速生楸青枯病室內接種試驗

表 3 室內接種組織再分離結果

為進一步證實兩種病菌的致病性，在2016年試驗苗圃于6、7、8月分別進行了3次苗木接種試驗，接種方法同室內。接種后20 d檢査結果見表4。苗圃接種組織分離結果見表5。兩種病菌在無傷情況下，都未成功；有傷口時，易侵染誘發病害，其癥狀與原來發現的癥狀相同。

表 4 苗圃接種試驗

表 5 苗圃接種組織再分離結果

3 病原菌鑒定[3]

3.1 Macrophomina sp.

該菌主要寄生于速生楸植株的地莖。分生孢子埋生于寄主組織中，孔口露出組織外，分生孢子單胞，大小為19.5~29.0×6.0~7.5 μm，無色，長橢圓形，先端稍彎曲。多數情況下，分生孢子不產生或很少產生，主要出現的是菌核。菌核黑褐色，扁球形和橢圓形，表面光滑，直徑49.5×200.7 μm。初步確定為菜豆球殼孢菌（(Tassi) Goid）。

3.2 Fusarium sp.

該菌在PDA培養基上，菌落開始為灰白色,后漸變紫色，10 d左右變為深紫羅蘭色。25 ℃下，經5 d培養，菌落直徑平均為4.0 cm。小型胞子卵形至橢圓形，單細胞，少有一分隔，大小為5.0~11.7×2.2~4.2 μm，著生在短而分枝少的孢子梗單瓶口瓶梗上。小梗長5.0~39.5 μm；大型孢子生在短而多分枝的孢子梗上，近月牙形至鐮刀形，兩端尖，彎曲，一般3~5分隔。3隔孢子18.2~49.0×2.5～4.0 μm，5隔孢子36.0~54.5×3.0~4.7 μm。厚垣孢子多，一般生在菌絲中間，偶爾可呈鏈狀。根據Booth·C的分類系統，該菌形態與尖鐮孢菌基本一致，初步確定為尖鐮孢菌（Shlecht）。

4 結果與討論

（1）組培苗速生楸青枯病其癥狀表現,初期主要發生于當年生苗速生楸地莖，后期根部。一種是起初地莖表皮水漬狀變黑壞死，后上部嫩枝葉萎焉死亡，壞死地莖內皮組織腐爛處生有許多小菌核；另一種是隨苗木木質化增高，根部內皮組織腐爛壞死，植株死亡，壞死根部苗木皮層易脫離，病部出現粉狀孢子。在高溫高濕情況下兩種類型發病重。

（2）經癥狀觀察、組織分離和接種試驗初步鑒定，組培苗速生楸青枯病病原主要有菜豆球殼孢菌（）和尖鐮孢菌（)兩種，從2種病菌對速生楸危害程度觀察，菌地莖處重，后期根部出現菌多，sp.在組織分離中有少量出現，但沒有致病性。尖鐮孢菌專化型較多，尖鐮孢菌在速生楸上的專化型，待深入研究。在組織分離時，這兩種病原菌出現的頻率都很高，地莖和根部相連，這兩種菌之間的關系以及互作對植物的危害等，有待進一步深入研究探討。

[1] 方中達.植病研究方法[M].北京:農業出版社,1977

[2] 中國林業科學研究院.中國森林病蟲害[M].北京:中國林業出版社,1984

[3] 魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海:上海科學技術出版社,1979

Investigation into Bacterial Wiltand Pathogenesis ofC. A. Mey. Made of Tissue Culture Rapidly

LI Cheng-kai1, SHAO Yun-hua2*, XUE De-shan3, ZHAN Xin2, XIONG Xiong2

1.271100,2.271018,3.265100,

Bacterial wilt fromC. A. Mey. Made of tissue culture rapidly mainly injures stems and roots and symptom types show that stems become black necrosis and there are many small sclerotia on it, upper parts wilt till death; with the lignification of seedlings increasing, Root decays necrosis and powdery spores on necrotic parts to death. There are more serious diseases in high temperature and humidity. The main pathogens were identified asfirstlyand thenby means of tissue isolation and inoculation test.

C.A.Mey.; bacterial wilt; symptom; pathogenesis

S436.412.1+5

A

1000-2324(2018)03-0460-03

2017-04-12

2017-04-29

山東林業有害生物普查

李成凱(1964-),男,本科,高級工程師,主要從事林木病蟲害防治工作. E-mail:IW6214047@163.com

Author for correspondence. E-mail:shaoyunhua@163.com