某市包裝飲用水微生物污染狀況分析

◎ 呂海鵬，王亞飛，許貝貝

（中檢集團中原農食產品檢測（河南）有限公司，河南 鄭州 450000）

隨著近年來環境污染的加劇，人們對于飲用水的要求不斷提高，包裝飲用水產業取得飛速發展[1]。但與此同時，國內外關于包裝飲用水中檢出大腸菌群和銅綠假單胞菌的報道也逐漸增多，引起了諸多學者和消費者的普遍關注。大腸菌群為一群在37 ℃條件下培養24 h能發酵乳糖、產酸、產氣，且需氧和兼性厭氧的革蘭陰性無芽孢桿菌的統稱，多存在于溫血動物糞便中，人、畜糞便對外界環境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因[2]。因此，大腸菌群被國際上公認為檢測各種水質、醫藥及食品在衛生學上安全性的指示菌[3]。銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）是一類生長條件要求低、耐不良環境能力強、氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌，在空氣、土壤、水、人體皮膚、呼吸道和腸道等環境中有廣泛的分布，是一種常見的條件致病菌[4]。其具有易定植、易變異、耐藥機制復雜等特征，導致桶裝飲用水污染事件逐漸增多，甚至引起食物中毒[5]，國際食品法典委員會（Codex Alimentarius Commission，CAC）、國際食品微生物標準委員會（ICMSF）及我國國家標準均有對銅綠假單胞菌指標的檢測[6]。

為了檢測某市市售包裝飲用水中微生物的污染情況，根據GB 19298-2014《食品安全國家標準 包裝飲用水》中微生物限量要求，對所有樣品進行了大腸菌群和銅綠假單胞菌檢測，并對檢測結果進行了統計學分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

BSC-1300ⅡA2型生物安全柜（蘇凈安泰）、DNP-9272 型恒溫生化培養箱（上海精宏實驗設備有限公司）、高壓蒸汽滅菌鍋（上海申安醫療器械廠）、MFS-3A-250K 不銹鋼過濾系統（廣東環凱微生物科技有限公司）、臺式多功能紫外分析儀。

結晶紫中性紅膽鹽瓊脂、煌綠乳糖膽鹽肉湯、無菌生理鹽水、假單胞菌瓊脂基礎培養基、乙酰胺肉湯、納氏試劑、金氏B培養基、綠膿菌素測定用培養基、氧化酶試紙、無菌微孔濾膜（直徑47 mm，孔徑0.45μm）（廣東環凱微生物科技有限公司）。

陽性對照菌銅綠假單胞菌（ATCC27853，ATCC）、大腸埃希氏菌（ATCC25922、廣東省食品微生物安全工程技術研究研發中心）。

1.2 樣品來源

檢測45份樣品全部來自該市在售的包裝飲用水，產品包裝規格為300 mL～1.5 L的瓶裝水樣品38批次，4.5 L～19 L的桶裝純凈水19批次，所有樣品均在保質期內。

1.3 檢測方法與依據

根據GB 19298-2014《食品安全國家標準 包裝飲用水》[7]中微生物限量要求，采用GB 4789.3-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數》[8]第二法平板計數法和GB 8538-2016《飲用天然礦泉水檢驗方法》[9]分別對樣品進行大腸菌群和銅綠假單胞菌的檢測，最后采用陽性菌株做質控，參照GB 19298-2014《食品安全國家標準 包裝飲用水》進行合格性評價，同時采用Excel數據處理軟件對數據進行統計處理，不合格率的顯著性比較用x2檢驗。

2 結果與分析

2.1 不合格率

采用GB 4789.3-2016[8]平板計數法進行大腸菌群檢測，57批次樣品中有3批次樣品至少有1份樣品檢出大腸菌群，36 ℃條件下在結晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板培養24 h后，出現紫紅色菌落且周圍有紅色膽鹽沉淀環，接種煌綠乳糖膽鹽肉湯48 h后產氣，判定為3批次為大腸菌群陽性。大腸菌群不合格率為5.26%。檢測結果如圖1所示。

采用GB 8538-2016[9]中銅綠假單胞菌檢測方法進行檢測，57批次樣品中有12批次樣品至少有1份樣品中檢出銅綠假單胞菌，依據GB 8538-2016[9]對可疑菌落進行生化鑒定，結合陽性菌株作為對照，判定為12批次樣品為銅綠假單胞菌陽性。銅綠假單胞菌不合格率為21.05%。檢測結果如圖1所示。

圖1 57批次包裝飲用水中微生物項目不合格率統計圖

2.2 不合格率分析

本實驗所抽取的水樣有瓶裝飲用水和桶裝飲用水兩類，對兩類樣品的不合格率進行了統計分析，其中桶裝飲用水中銅綠假單胞菌的不合格率為52.63%，大腸菌群不合格率為15.79%；瓶裝飲用水銅綠假單胞菌不合格率為5.26%，大腸菌群檢出率為0，同時檢測出大腸菌群的3批次樣品中也檢出了銅綠假單胞菌，而瓶裝飲用水中未發現大腸菌群污染，檢測結果如圖2所示。同時對大腸菌群的不合格率進行相關性分析，結果表明，不同包裝間的差異有統計學意義（x2=6.35，P=0.012，P＜0.05）；對銅綠假單胞菌的檢出率進行相關性分析結果表明，不同包裝間的差異有統計學意義（x2=9.07，P=0.003，P＜0.05）。

圖2 桶裝飲用水和瓶裝飲用水微生物項目不合格率統計圖

3 結論

根據GB 19298-2014《食品安全國家標準 包裝飲用水》[7]中微生物限量要求，每批次樣品的5份平行樣品中，均不得檢出銅綠假單胞菌。本次抽檢的市售包裝飲用水樣品中合格率為78.95%，銅綠假單單胞菌檢出導致的不合格率達21.05%，這與前人報道結果接近[10]，說明目前該市包裝飲用水還存在致病菌污染的問題。目前，有報道稱銅綠假單胞菌屬于食源性和水源性致病菌，且銅綠假單胞菌的生長會對產品亞硝酸鹽含量等理化性狀造成影響，導致經濟損失得以發生[11]。在國內外許多國家和地區已經將大腸菌群作為判斷食品中是否有糞便污染的重要指示菌，本研究中檢測出大腸菌群的3批次樣品中也檢出了銅綠假單胞菌，說明桶裝飲用水在生產過程中存在微生物污染的風險；且3批次樣品均為都是小型生產企業生產的桶裝飲用水，可能是這些生產企業對生產過程中衛生狀況未引起足夠的重視，導致出現了微生物污染狀況，實驗結果分析銅綠假單胞菌與大腸菌群檢驗結果無顯著相關性，這與報道的研究結果過一致[12]，駱業巧研究結果表明飲用水中指示菌的檢出已相對獨立，與其他微生物是否檢出已無必然聯系，兩種微生物的引起污染的方式不同[10]，但該市在同一批次樣品中同時檢出兩種微生物，說明這些企業的生產過程中的消毒衛生狀況堪憂。

桶裝飲用水的銅綠假單胞菌不合格率高于瓶裝飲用水，說明桶裝飲用水在生產過程中存在更高微生物污染的風險。經調查發現，瓶裝飲用水由于清洗消毒相對比較簡單，污染往往發生在灌裝環節[13]，然而從結果來看，該市生產企業已引起足夠重視。而小型的桶裝包裝飲用水生產企業往往消毒處理設施比較簡單，而且環境潮濕，對于微生物的繁殖十分有利，這就導致無法控制銅綠假單孢菌的繁殖生長。大桶清洗難度相對較大，多數生產企業采用未經處理的水清洗車間和桶，這直接導致沖洗過程也可能造成微生物二次污染，引起更多包裝飲用水桶的污染[13-15]，這就導致檢測過程中同一批次中5份樣品均檢出銅綠假單胞菌。

本研究結果表明，該市市售包裝飲用水存在微生物污染安全隱患，尤其是銅綠假單胞菌。因此，生產企業在生產過程中應該嚴格把控質量，應提高安全衛生意識，同時食品監管部門應在生產加工過程中加強監督和衛生培訓工作，切實保障消費者的身體健康。

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