注射用左卡尼汀含量測定方法學建立

于梅

摘 要： 目的：本文通過建立高相液相色譜法對注射用左卡尼汀含量的測定，并對建立的方法進行方法學驗證。方法：Agela XBP-C18色譜柱，檢測波長：225nm；流速：1.0ml/min；進樣量：20μl；柱溫：室溫。結果：濃度在1.19～8.00mg/ml范圍內，Y=144.43X+7.2867，r為0.9997，線性關系良好，中間精密度平均含量為100.9%，RSD為0.22%，重復性RSD為0.43%；平均回收率為100.10%，RSD為0.24%。結論 高效液相色譜法檢測注射用左卡尼汀的含量具有簡便、準確度高、重復性強等特點，值得推廣應用使用此方法檢測注射用左卡尼汀含量。

關鍵詞： 高相液相色譜法；注射用左卡尼汀；含量測定

左卡尼汀是哺乳動物能量代謝的必需的體內天然物質，其主要功能是促進脂類代謝。它既能將長鏈脂肪酸帶進線粒體基質，并促進脂類氧化分解，為人體內的細胞提供足夠的能量，又能將其線粒體內產生的短鏈脂酰基輸出。本品的補充可緩解其因體內缺乏引起的骨骼肌和心肌脂肪代謝紊亂等組織的功能障礙，且注射用左卡尼汀也未見不良反應，療效較好，臨床應用本品的患者較多[1]。因此為了臨床用藥安全，本文建立了注射用左卡尼汀的含量測定方法，能夠準確的檢測。

1.儀器與試藥

1.1儀器

Agilent-1200型高效液相色譜儀. 紫外檢測器； XS105DU電子天平：梅特勒公司

1.2試藥

試劑：磷酸（分析純）：哈爾濱化工化學試劑廠；甲醇（色譜純）：SK Chemicals Ulsan

庚烷磺酸鈉（色譜純）：山東禹王實業有限公司化工分公司；水：注射用水。

對照品：來源：中國食品藥品檢定研究院，批號：101041-201503，純度99.9%。

2.方法與結果

2.1色譜條件系統適用性

色譜柱：1、Agela XBP-C18，5μm， 4.6×250mm。流動相：0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（取磷酸11.5ml，加1mol/L氫氧化鈉溶液100ml，加水稀釋至2000ml，用磷酸或1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至2.4）-甲醇-庚烷磺酸鈉（82ml：18ml：0.4g）。檢測波長：225nm；流速：1.0ml/min；進樣量：20μl；柱溫：室溫

2.2測定法

精密稱取本品適量，加水稀釋制成加水溶解并制成每1ml中含左卡尼汀4mg的溶液，搖勻。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取左卡尼汀對照品適量，加水溶解并制成每1ml中含左卡尼汀4mg的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算供試品中左卡尼汀的含量[2]。

3.方法學驗證

3.1 方法專屬性試驗

精密稱取空白輔料和量取空白溶劑20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在左卡尼汀主峰位置沒有色譜峰出現，說明溶劑和空白輔料對含量測定無干擾。專屬性較好。

3.2線性關系試驗

精密稱取左卡尼汀對照品（含量：99.9%）603.21mg，置50ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1.0 ml、1.7 ml、3.0 ml、3.3 ml、5.0 ml、6.7ml，分別置10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成系列線性溶液。分別吸取上述系列對照品溶液各20μl注入色譜儀，記錄色譜圖。

結果表明：左卡尼汀溶液濃度在1.19～8.00mg/ml范圍內，Y=144.43X+7.2867，r為0.9997，線性關系良好，可滿足含量測定的要求[3]。

3.3進樣精密度試驗

對照溶液配制：取對照品40.05mg，置10ml量瓶中，用流動相溶解并定量稀釋至刻度，配成每1ml約含4mg的溶液。取上述對照品溶液，照上述色譜條件，連續進樣6次。結果RSD為0.66%：本品含量測定方法精密度好。

3.4中間精密度試驗

考察隨機變動因素對精密度的影響，在同一實驗室，不同日期、由不同分析人員、用不同實驗設備測定結果之間的精密度。

取本品（批號：170629），照上述色譜條件，進行試驗。計算中間精密度平均值及RSD 結果表明：有不同分析人員，在不同日期不同設備測得的左卡尼汀注射液平均含量為100.9%，RSD為0.22%，該試驗符合測定要求。

3.5重復性試驗

取本品（批號：170629）6份，分別用流動相稀釋制成每1ml約含左卡尼汀4mg的溶液，分別搖勻，作為供試溶液，分別精密吸取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果：RSD為0.43%，本品含量測定的重復性良好。

3.6回收率試驗

分別精密稱取左卡尼汀原料藥（含量：98.96%）32.33mg、40.42mg、48.50mg，置于10ml量瓶中，制成含左卡尼汀分別為標示量的80%、100%、120%的供試品溶液，每個濃度各3份。另精密稱取對照品約40mg，置于10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照品溶液。分別精密量取供試品溶液、對照品溶液各20μl，照上述色譜條件試驗，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算。由測得量與加入量的比值，即得回收率[4]。

結果表明：平均回收率為100.10%，RSD為0.24%，符合準確度試驗要求。

3.7溶液穩定性試驗

取本品（批號：170629），照上述色譜條件，室溫放置，分別于0、1、2、4、6、8小時進樣，試驗結果：供試品溶液在8個小時內測定結果的相對標準偏差為0.28%，結果表明供試品溶液在室溫放置8小時較穩定。

3.8樣品含量測定

精密稱取適量，用流動相稀釋制成每1ml中約含4mg的溶液，作為供試品溶液；另精密稱取左卡尼汀對照品適量，用流動相稀釋制成每1ml中約含4mg的溶液，作為對照品溶液。分別取上述兩種溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，即得。左尼汀注射液樣品3批及被仿制藥，依法測定，三批供供試品及被仿制藥的含量測定結果分別是：供試品：99.85%、100.22%、99.46%；被仿制藥：98.77%。%結果表明：三批供試品及被仿制藥含量均不少于90.0% [5]。

4.結論

通過對注射用左卡尼汀的含量測定方法學驗證，結果：線性1.19～8.00mg/ml范圍內呈良好的線性關系，且重復性、準確度、中間精密度較高，溶液在8小時能穩定。結果表明此方法能準確的測定注射用左卡尼汀的含量，因此該方法可行性較高。建議使用此方法測定注射用左卡尼汀的含量。

參考文獻

[1]閔翠娥 陸媛 江少儀 譚勝連 HPLC法測定左卡尼汀注射液含量及有關物質 廣東藥學院學報 2009， 25（6）.

[2]高立軍 王濤 全東琴高效液相色譜法測定左卡尼汀注射液的含量 科學技術與工程2011， 11（30）.

[3]李峰 高效液相色譜法用于左卡尼汀注射液的含量檢測 中國基層醫藥 2010， 17（16）.

[4]袁彩君 朱天新高效液相色譜法測定左卡尼汀注射液的含量及雜質A 中國當代醫藥 2015， （19）.

[5] 耿銀銀 許麗曉 方會超 王莉 劉萬卉 親水作用色譜法測定左卡尼汀注射液含量及雜質A 煙臺大學學報（自然科學與工程版） 2017， 30（3）.