80例人乳頭瘤病毒HPV分型陽性檢測結果分析

鳳婷，陳徳林，金長碧，劉雁

人乳頭瘤病毒（human papilloma virus,HPV）是一種無包膜的雙鏈DNA病毒，目前已發現的HPV種類有200多種，然而只有30多種與生殖道系統腫瘤有關。在臨床上，引起肛門外生殖器尖銳濕疵和宮頸病變（包括宮頸癌）的亞型主要有HPV6、11、16、18、31、33、35和38型等8個亞型[1]。科學家已經發現感染高危型HPV是導致宮頸癌發生的主要原因，這為宮頸癌的防控帶來了新的契機。而HPV感染較為普遍，絕大多數婦女均感染過HPV，并且多數為一過性[2]。國內學者研究發現，在我國與宮頸高級別病變密切相關的HPV型別依次是16、18、45、31、33[3]。近年來，中國宮頸癌的發病率和死亡率呈上升趨勢[4]。患病的“年輕化”趨勢非常明顯。有研究表明，對宮頸癌患者早期診斷、治療，其5年治愈率可達80%～90%[5]。因此有效的篩查方法是發現宮頸癌前病變，阻斷、降低宮頸癌發生的重要手段之一。

1 材料與方法

1.1 標本來源 本院婦產科住院患者,女性80例,年齡21～80歲.平均年齡42.3歲。標本都以無菌專用棉拭子采集本院婦產科患者宮頸分泌物，加入專用病毒保存液中,旋緊管蓋并密封送檢.

1.2 標本采集方法 標本都以無菌專用HPV宮頸刷由臨床醫生采集本院婦產科患者宮頸分泌物放入HPV專用病毒保存液中,旋緊管蓋并密封送檢。

1.3 采集完的標本應立即送檢或放在4℃冰箱內（若現場沒有冰箱，可立即放入冷藏箱內），在24小時內用冷藏箱運送至實驗室進行檢測。若24小時內不能送達，需置-70℃以下保存。

1.4 核酸提取 ①將密閉送檢宮頸分泌物反復攪拌洗脫刷上分泌物混勻，準確吸取200μl標本加入EP管中，12 000轉離心10 min，去上清；②沉淀中加入500μl無菌生理鹽水，吹打混勻，震蕩數秒鐘，離心10 min，去上清；③沉淀中加100μl提取液,吹打混勻,震蕩數秒鐘，瞬時離心數秒鐘，100℃加熱10 min,12 000離心5 min備用；④將配好反應液取36μl于擴增管中，加入提取DNA 4μl后，震蕩數秒鐘，離心30 s上機擴增檢測。

1.5 試劑 上海之江生物有限公司生產的人乳頭瘤病毒核酸核酸提取宮頸分泌物HPV分型檢測HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、82和66型等，均為批檢合格產品。

1.6 儀器 本次研究采用SLAN-96P核酸檢測儀。

1.7 方法

1.7.1 實驗步驟 按照SLAN-96P核酸檢測操作規程進行檢測,實時熒光定量PCR技術可實時監測PCR的整個反應過程，從整個實時監測的熒光曲線上找到擴增反應的指數擴增起始期，利用每一個擴增檢測到達指數擴增期起始所需要的擴增循環數來進行定性檢測。根據、臨界、陽性質控條件進定性結果判定分析，確定檢測結果有效。

1.7.2 質量控制 陰性質控品的增長曲線不是”S”型曲線或無Ct值；陽性質控品的增長曲線呈”S”型曲線且Ct值≤30。結果判斷：若檢測樣本無典型”S”型擴增曲線或Ct值≥34.8，則判斷為HPV型陰性；若檢測樣本呈典型”S”型擴增曲線或Ct值≤34.8，則判斷為HPV型陽性。

1.8 統計學方法 用SPSS統計軟件處理，組間比較采用配對資料t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 本次研究的80例患者都來自臨床住院最終確診為子宮腫瘤、子宮平滑肌瘤、子宮炎癥患者。

2.2 子宮腫瘤36例定性檢出陽性率主要16型為38.9%、52型陽性為27.8%、58型陽性為22.2%、39型陽性為8.3%、82型陽性為8.3%、68型陽性為5.6%。

2.3 子宮平滑肌瘤23例檢出陽性率主要16型為21.7%、52型陽性為17.4%、58型陽性為13.0%、82型陽性為13.0%、39型陽性為8.7%、68型陽性為8.7%。

2.4 子宮炎癥21例定性檢出陽性率主要52型陽性為28.6%、58型陽性為 23.8%、59型陽性為 19.0%、16型為14.3%、18型陽性為9.5%、68型陽性為9.5%、35型陽性為9.5%。各組間差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

3 討論

3.1 人乳頭瘤病毒是一組無包膜的小DNA病毒，能誘發人和多種高級脊椎動物的皮膚黏膜產生疣和乳頭狀瘤，是引起男、女生殖道感染常見病原體。HPV的血清型超過66種，HPV感染的后果與HPV的型別有密切關系。 黏膜感染中有近30種類型的HPV可以引起生殖道感染，其危險程度分為低危險型HPV和高危險型HPV（可能導致惡性變）。低危險型HPV6、11、42、43、和44型等，可引起尖銳濕疣，引起惡性變的概率較小。高危險型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、82和66型等，可導致男性陰莖癌和女性宮頸癌。HPV通常經性接觸傳染。本次研究80例女性宮頸分泌物高危險型HPV陽性分型在子宮腫瘤、子宮平滑肌瘤、子宮炎癥患者宮頸分泌物中HPV分型結果來探討如何指導臨床預防和治療。

表1 HPV陽性80例分型病毒核酸檢測三種病毒子宮腫瘤、子宮平滑肌瘤、子宮炎癥陽性分型關系[n（%）]Table 1 HPV positive detection of viralnucleic acid in 80 cases of uterine tumor,uterine leiomyoma and uterine inflammation[n(%)]

3.2 此次研究對象為80例，標本較少,但是仍然發現人乳頭瘤病毒HPV分型陽性患者,子宮腫瘤陽性率高達45%(36例)，與子宮平滑肌瘤陽性率高達28.7%（23例）和子宮炎癥陽性率26.3%（21例）。呈顯著性差異，說明高危險型HPV分型檢測陽性患子宮惡性腫瘤概率相當高。

3.3 子宮惡性腫瘤HPV分型發現HPV16型占38.9%與HPV52型占27.8%和HPV58型占22.2%以及其它類型呈顯著性差異，HPV感染導致子宮惡性腫瘤以HPV16型為主，如果三項聯合檢測88.9%,通過這三聯合HPV分型可對危險度進行評估。

3.4 子宮平滑肌瘤HPV分型HPV16型占21.7%、HPV52型占17.4%與HPV58型占13.0%,HPV82型占13.0%,發現子宮平滑肌瘤由人乳頭瘤病毒HPV感染引起主要HPV16、52、58和82型。四項合占65.2%,而HPV16、52和58又是引起惡性腫瘤的主要亞類型。應引起高度觀注。可較準確地評估婦女患宮頸癌的危險度。

3.5 子宮炎癥HPV分型HPV52型占28.6%、HPV58型占23.8%、HPV59型占19.0%與HPV16型占14.3%,四項結果呈顯著性差異,人乳頭瘤病毒HPV感染引起子宮炎癥主要是HPV52、58、59和16型。

3.6 通過人乳頭瘤病毒HPV感染診斷輔助分型檢測，可對危險度進評估，進議作為婦女健康體檢篩查指，及時進行有效預防和治療，降低患宮頸癌的危險度。

終上所述，子宮腫瘤主要是16型、52型和58型感染為主，子宮平滑肌瘤主要是16型、52型和58型感染為主，子宮炎癥主要52型、58型、59型和16型感染為主。但三項聯合檢測為88.9%，通過這三聯合HPV分型可對對危險度進行評估。

參考文獻

[1] 張靜,張亞靜.HPVL1蛋白在宮頸鱗狀上皮內病變中的表達及意義[J].實用醫學雜志,2013,29(19)：3199-3201.

[2] 莊勛,顧曉梅,何愛琴.宮頸癌危險因素的流行病學調查[J].中國婦幼保健,2008,23(28)：4053.

[3] 王宏景,龍秀榮,耿建祥,等.宮頸癌瘤組織中HPV感染基因型分布的比較研究[J].國際檢驗醫學雜志,2014,35(5)：533-535.

[4] 胡尚英,鄭榮壽,趙方輝,等.1989至2008年中國女性子宮頸癌發病和死亡趨勢分析[J].中國醫學科學院學報,2013,36(2)：129-135.

[5] 金紅雁,黃惠娟,陸紅梅.HPV,TCT及陰道鏡對宮頸癌篩查的意義[J].中國婦幼保健,2010,25(29)：4307-4308.