基因分型和ABO疑難血型三步分析法鑒定ABO疑難血型1例

柯浩珍

青海省人民醫院輸血科（西寧810007）

患者女，年齡26歲。于2016年10月28日因“月經”后感頭暈，乏力，伴面色萎黃，前往地方醫院，血常規化驗提示：血紅蛋白50 g/L，完善血型及交叉配型后輸注A型Rh陽性紅細胞懸液3 U，次日復查血紅蛋白上升至69 g/L，患者自感頭暈乏力有所緩解。2016年11月1日患者再次復查血常規提示：血紅蛋白41 g/L，感全身疲乏無力加重，突然出現惡心、嘔吐，病情進行性加重，為進一步診治于2016年11月2日來我院急診就診，并以“貧血原因待查”收入血液科。當時急查血常規提示血紅蛋白37 g/L，患者血型正反定型結果不符，不規則抗體篩查陽性，直抗實驗陽性。骨穿結果是溶血性貧血，結合實驗室初步檢測結果和患者臨床資料來判斷ABO正反定型不一致的原因，針對性設計試驗進行驗證，最終未能確定患者血型。送往省中心血站參比室鑒定結果為：已輸入異體血不易確定，隨機抽取血樣標本寄往江蘇省血液中心，通過基因檢測，基因型為A102/002，在血型結果未確定前，前后共輸注O型Rh陽性洗滌紅細胞6 U。材料：標準檢測抗?A、抗?B 血清（上海血液生物，批號：201512125）；ABO標準紅細胞（江陰力博醫藥生物，批號：201609008）；紅細胞不規則抗體篩選細胞（江陰力博醫藥生物，批號：201609005）；抗球蛋白試劑抗IgG+C3d，抗IgG，抗C3d（上海血液生物，批號：20165001）；聚凝胺試劑（合肥天一生物，批號：20151208）；人類ABO血型基因檢測試劑盒（PCR?SSP法）（批號：201604013）；TIANamp Blood DNA kit血液基因組提取試劑盒（秀鵬生物，Cat。#DP318?03，Lot。#P4129）；離心機（日本久保田KA?2200型）。

血型血清學試驗：經典試管法進行ABO正反定型。經典試管法DAT和IAT。經典試管法抗冷抗體吸收試驗。經典試管法磷酸氯喹放散試驗。經典試管法自身抗體吸收試驗。以上試驗都按照《全國臨床檢驗操作規程》（第3版）操作和標準進行結果判斷［3］。

ABO疑難血型三步分析法:第1步：復檢ABO血型：（1）重新采集血樣：分抗凝血和不抗凝血2管，排除血樣采錯，靜脈輸液處采樣和血樣不規范等因素。（2）核對試劑、器材：核對試劑效期，仔細閱讀試劑說明書，特別是操作規程和注意事項；核對離心機轉速，時間，離心力，以及其他器材有無污染，排除試劑、器材，特別是離心力不標準的干擾。第2步：根據臨床資料，結合ABO血型鑒定結果，逐條對照使用排除法進行排除，分析可能導致正、反定型不一致的原因，最終可疑是AIHA、淋巴瘤、自身抗體以及輸異型血干擾ABO正反定型。第3步：對不能排除的原因，設計針對試驗驗證?？梢墒茿IHA、輸異性血，加做血型血清學試驗（青海省血液中心參比室協助完成）。

PCR?SSP ABO血型基因分型試驗按照人類ABO血型基因檢測試劑盒（PCR?SSP法）說明書操作，首先按照TIANamp Blood DNA kit血液基因組提取試劑盒說明書操作（此試驗由江蘇省血液中心參比室完成）。

患者直接抗人球蛋白試驗IgG+C3d（2+），IgG（2+），C3d（2+）。血型基因分型結果為A102/002型，即該患者的基因分型結果為A型。見表1。

討論 正確鑒定ABO血型，是確保臨床安全輸血的關鍵。在實際工作中經常遇到正反定型不相符致血型鑒定困難的病例，針對此病例正反定型不相符這一情況，采用ABO疑難血型三步分析法對其分析，通過第一步排除人為因素，試劑，儀器等原因和第二步結合臨床資料和ABO血型鑒定結果，逐條排除原因后，不能排除原因為：自身免疫性溶血性貧血（AIHA），輸異型血，淋巴瘤以及自身抗體，而淋巴瘤被骨穿結果是溶血性貧血得以排除，而自身免疫性溶血性貧血，可分為溫抗體型和冷抗體型，其自身抗體具有凝集自身和他人的紅細胞，并破壞紅細胞，再加上輸注了異體血，不排除產生了免疫性抗體，都會影響ABO血型鑒定結果［4］。依次根據疑難血型三步分析法的第三步，對不能排除的原因，針對性地試驗驗證加做了吸收放散試驗、抗冷抗體吸收試驗、磷酸氯喹放散試驗、自身抗體吸收試驗后，但血型鑒定結果還是不易確定，結果見表1，最后通過基因檢測，基因型為A102/002。該患者2016年11月2日至2016年11月7日期間輸注6 U O型Rh陽性洗滌紅細胞。臨床綜合直接抗人球蛋白等多項實驗室檢查，以及臨床資料分析，確診為自身免疫性溶血性貧血，合并對癥治療后，于2016年11月9日血清學方法鑒定ABO血型定型為A型RhD陽性。

表1 患者ABO血型正反定型和不規則抗體結果Tab.1 Results of positive,negative and irregular antibody typing of ABO blood group in patients

基因檢測技術的特點為穩定，簡便，快速，準確，試劑是由化學組成，易于獲得標準化，且無需新鮮標本。眾多研究表明基因分型是正確判定血型不可缺少的輔助手段，尤其在疑難血型鑒定：如紅細胞直接抗人球蛋白試驗陽性和具有凝集作用紅細胞的血型，通常都會遇到麻煩，在這種情況下可以使用基因分型技術鑒定血型。對于新近輸血患者或多次輸血患者，由于外周血中含有供者的血液細胞，使用經典的紅細胞凝集試驗不能正確鑒定血型，也可以使用基因分型方法鑒定。

總之，導致正反定型不符的疑難原因有很多，之前沒有規范的方法參考解決這一情況，輸血科血型鑒定工作處于思路混亂，無從下手，而ABO疑難血型三步分析法為血型鑒定工作者制定了規范性的原因分析與標準的實驗操作規程，給我們提供了一個清晰的思路和試驗步驟，可以短時間內正確鑒定出血型，但由于血型血清學技術的局限性，有些疑難血型還是不易確定，ABO基因分型技術可用于彌補血清學技術的不足之處，特別是針對新近輸血的患者或直接抗人球蛋白試驗為陽性的患者的血型鑒定，所以，二者的結合，在處理疑難血型鑒定時，以最快速度鑒定正確血型，使得輸血治療更加及時安全有效，以提高臨床輸血醫學水平。