全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)系統(tǒng)精密度和準(zhǔn)確度性能驗(yàn)證

周 龍 譚玉潔*

（1 重慶三峽中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 萬州 404000；2 貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽 550001；3 貴州醫(yī)科大學(xué)附屬白云醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴州 貴陽 550014）

檢驗(yàn)儀器和項(xiàng)目的性能評(píng)價(jià)備受檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)界關(guān)注[1]。檢測(cè)系統(tǒng)的分析性能驗(yàn)證是臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理和實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的重要內(nèi)容之一。我國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法和ISO15189：2012[2-3]均對(duì)性能驗(yàn)證做了相應(yīng)的規(guī)定和要求。為提高實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理目標(biāo)和籌備ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，本文參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（Clinical And Laboratory Standards Institute，CLSI）頒布的標(biāo)準(zhǔn)化文件[4-5]及其他文獻(xiàn)方法與要求[6-9]，對(duì)羅氏cobas 8000全自動(dòng)生化分析儀部分檢測(cè)項(xiàng)目的準(zhǔn)確度、精密度性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià)。驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目包括總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、三酰甘油（TG）、膽固醇（CHOL）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）和血糖（GLU）共10項(xiàng)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：實(shí)驗(yàn)用質(zhì)控品、校準(zhǔn)品均來自德國(guó)羅氏公司原裝進(jìn)口，且與檢測(cè)儀器、試劑相配套。實(shí)驗(yàn)用樣本來自衛(wèi)生部臨檢中心2016年9月配發(fā)的5個(gè)水平的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（External Quality Assessment，EQA）干粉樣品。以上實(shí)驗(yàn)用品均-20 ℃保存。

1.2 儀器與試劑：儀器為羅氏cobas 8000全自動(dòng)生化分析儀，儀器經(jīng)專業(yè)技術(shù)工程師安裝、調(diào)試、校準(zhǔn)后，各項(xiàng)指標(biāo)正常，確定正常工作。試劑為羅氏公司配套的試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，且都在有效期內(nèi)，同一批次的試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品均足量。

1.3 方法：按照本實(shí)驗(yàn)室的儀器和項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件，對(duì)儀器定期進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)、校準(zhǔn)和質(zhì)量控制。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程均有常規(guī)質(zhì)量控制并在控，嚴(yán)格按照儀器及試劑說明檢測(cè)標(biāo)本，同時(shí)在檢測(cè)過程中監(jiān)測(cè)標(biāo)本結(jié)果，以確保整個(gè)分析過程中儀器處于在控的良好狀態(tài)。

1.3.1 精密度驗(yàn)證：參考CLSI指南文件EP15-A2要求[4]。批內(nèi)精密度驗(yàn)證[10]：將已準(zhǔn)備好的足量的PCCC1、PCCC2兩個(gè)濃度的質(zhì)控品各分成20份，隨機(jī)插入患者樣本中，連續(xù)測(cè)定待驗(yàn)證的10個(gè)項(xiàng)目，2 h內(nèi)完成，分別計(jì)算其均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV），評(píng)價(jià)批內(nèi)精密度；批間精密度驗(yàn)證[10]：將已準(zhǔn)備好的足量的PCCC1、PCCC2質(zhì)控品各分裝成20份，-20 ℃保存。每天各取1份，待標(biāo)本完全溶解平衡至室溫后混勻，進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，結(jié)果存檔。待20天檢測(cè)完，分別計(jì)算其x-、SD和CV，評(píng)價(jià)批間精密度。對(duì)于計(jì)算的x-、SD和CV，以我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制定的質(zhì)量指標(biāo)（允許總誤差 TEa≤15%）為依據(jù)[11]，批內(nèi)CV≤1/4TEa，批間CV≤1/3TEa，同時(shí)比對(duì)廠家聲稱的精密度要求，以驗(yàn)證精密度性。

1.3.2 準(zhǔn)確度驗(yàn)證：EP15-A3 建議臨床實(shí)驗(yàn)室用定值參考物質(zhì)進(jìn)行正確度驗(yàn)證[12]，采用衛(wèi)生部2016年9月發(fā)放的第三批5個(gè)水平的室間質(zhì)控品進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)待驗(yàn)證的10個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行測(cè)定，將測(cè)定值與衛(wèi)生部臨檢中心給定的靶值進(jìn)行比較[11]，結(jié)果以小于衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)檢驗(yàn)項(xiàng)目及可接受性能準(zhǔn)則規(guī)定的允許偏差為合格。同時(shí)將實(shí)測(cè)值與靶值繪制散點(diǎn)圖，得出相關(guān)方程進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用Office 2010 Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)行t或χ2檢驗(yàn)，P＜0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 精密度：檢測(cè)的批內(nèi)精密度CV小于1/4TEa，批間精密度CV小于1/3TEa，符合《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明》中對(duì)分析性能的要求，也符合廠家規(guī)定的精密度要求，見表1。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 準(zhǔn)確度：衛(wèi)生部2016年9月發(fā)放的第三批5個(gè)水平的EQA樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示準(zhǔn)確度全部通過驗(yàn)證，成績(jī)均為100%。用實(shí)測(cè)值與給定的靶值繪制散點(diǎn)圖，進(jìn)行相關(guān)性分析，得出相關(guān)方程，結(jié)果顯示各檢測(cè)項(xiàng)目的均有較好的相關(guān)性（R2＞0.99），見表2。

表2 準(zhǔn)確度驗(yàn)證

3 討 論

檢驗(yàn)程序的分析性能常通過分析儀器、校準(zhǔn)品和試劑形成的組合即檢測(cè)系統(tǒng)而實(shí)現(xiàn), 故檢驗(yàn)程序的分析性能常可理解為檢測(cè)系統(tǒng)的分析性能[13]。為確保檢測(cè)系統(tǒng)的分析性能和檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，無論自建檢測(cè)系統(tǒng)還是配套檢測(cè)系統(tǒng)，在實(shí)驗(yàn)室出具檢驗(yàn)結(jié)果前，均要驗(yàn)證廠家聲明的各種性能指標(biāo)。ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可也要求申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)設(shè)備、檢測(cè)系統(tǒng)或方法的主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)其能夠達(dá)到臨床檢測(cè)所要求的標(biāo)準(zhǔn)[2-3]。本文對(duì)羅氏cobas 8000全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行精密度和準(zhǔn)確度性能驗(yàn)證，為本實(shí)驗(yàn)室配套檢測(cè)系統(tǒng)的方法學(xué)性能驗(yàn)證提供簡(jiǎn)單可行的方法和實(shí)驗(yàn)方案。

由于大多數(shù)檢驗(yàn)報(bào)告只檢測(cè)一次就發(fā)報(bào)告，故要求檢驗(yàn)結(jié)果具有良好的重復(fù)性，即良好的精密度。沒有良好的精密度，準(zhǔn)確度無從談起。精密度常用檢測(cè)結(jié)果的CV值來評(píng)估，CV值越小則精密度越高，說明試劑或者儀器越穩(wěn)定，重復(fù)性越好。評(píng)價(jià)精密度的方法有多種，包括Westgard推薦的簡(jiǎn)易方案[14]，也有2014年最新發(fā)布的經(jīng)典方法即EP5-A3方案[4]。本實(shí)驗(yàn)室采用后者，檢測(cè)的各個(gè)項(xiàng)目也達(dá)到了嚴(yán)格的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)CV≤1/4TEa，批間CV≤1/3TEa。橫向比較，不管是高濃度還是低濃度標(biāo)本，其批內(nèi)精密度均小于其批間精密度，這也與理論相符。通過精密度驗(yàn)證，表明該檢測(cè)系統(tǒng)穩(wěn)定，重復(fù)性好。在確認(rèn)檢測(cè)系統(tǒng)精密度符合要求的基礎(chǔ)上，進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)確度驗(yàn)證方法包括：與參考方法比較、回收試驗(yàn)和應(yīng)用參考物質(zhì)。雖前兩種是最好的驗(yàn)證方法，但由于其方法實(shí)驗(yàn)繁瑣，成本高，數(shù)據(jù)處理有難度等缺點(diǎn)，僅適合有條件的實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)、廠家或?qū)I(yè)科研人員，故不適于大多數(shù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)室。本實(shí)驗(yàn)室選用定值參考物質(zhì)，即衛(wèi)生部臨檢中心發(fā)放的EQA樣品，此類EQA物質(zhì)，其均值可作為有權(quán)威的賦值[15]，同時(shí)具有很強(qiáng)的操作性和實(shí)用性。根據(jù)EP15-A3要求對(duì)5個(gè)EQA樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示準(zhǔn)確度全部通過驗(yàn)證，成績(jī)均為100%。同時(shí)用實(shí)測(cè)值與給定靶值繪制散點(diǎn)圖，得出相關(guān)方程，顯示各檢測(cè)項(xiàng)目均有較好的相關(guān)性（R2＞0.99），有理由相信該系列配套檢測(cè)系統(tǒng)準(zhǔn)確度均符合要求。

羅氏cobas 8000全自動(dòng)生化分析儀作為一種最新的、最先進(jìn)的生化分析儀，其自動(dòng)化程度高、測(cè)試速度快、精確度好以及準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，被廣大實(shí)驗(yàn)室和科研單位所接受和認(rèn)可，適合樣本量大的大型實(shí)驗(yàn)室用于臨床檢測(cè)。羅氏cobas 8000檢測(cè)系統(tǒng)有成熟的檢測(cè)方法，配套的原裝試劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品，當(dāng)然檢測(cè)成本相對(duì)比較高。通過驗(yàn)證該檢測(cè)系統(tǒng)的精密度和準(zhǔn)確度性能指標(biāo)與廠商規(guī)定的分析性能一致，符合質(zhì)量目標(biāo)要求，可用于臨床檢測(cè)。 本研究選用質(zhì)控品和EQA樣本，節(jié)省了一定的成本，選擇的驗(yàn)證方案具有實(shí)用性和可操作性。通過驗(yàn)證，為本實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化和認(rèn)可提供重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

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