少腹逐瘀湯加減方對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠干預的研究

孟桐宇

遼寧中醫(yī)藥大學，遼寧沈陽 110032

少腹逐瘀湯出自《醫(yī)林改錯》，本書由清代醫(yī)家王清任編寫。其方組成：小茴香七粒炒，干姜二分炒，元胡一錢，沒藥一錢炒，當歸三錢，川芎一錢，官桂一餞，赤芍二錢，蒲黃三錢生，靈脂二錢炒，水煎服。少腹逐瘀湯，此方治少腹積塊疼痛，或有積塊不疼痛，或疼痛而無積塊，或少腹脹滿，或經(jīng)血見時，先腰痠少腹脹，或經(jīng)血一月見三、五次，接連不斷，斷而又來，其色或紫，或黑，或塊，或崩漏兼少腹疼痛，或粉紅兼白帶，皆能治之，效不可盡述[1]。該研究在原方上又進行了加減，藥物組成如下小茴香（炒）7粒、干姜（炒）0.6 g、胡索 3 g、沒藥（研）6 g、當歸 9 g、川芎 6 g、官桂 3 g、赤芍6 g、蒲黃 9 g、五靈脂（炒）6 g、丹參 15 g、香附 10 g、烏藥10 g、甘草6 g。為了探討少腹逐瘀湯加減方對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠干預，該文從PGE2及血小板粘附性的指標探討少腹逐瘀湯加減方治療寒凝血瘀痛經(jīng)的作用機制研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 選用3月齡的SPF級健康 Wistar雌鼠48只，均200 g左右。所有大鼠均性成熟但未交配。于SPF 級動物房內飼養(yǎng)，室內溫度(24±1)℃，濕度(50±5)%，光照。使用清潔級大鼠全營養(yǎng)飼料，自由飲用清水。

1.1.2 實驗藥物 少腹逐瘀湯加減方（小茴香（炒）7粒、干姜（炒）0.6 g、胡索 3 g、沒藥（研）6 g、當歸 9 g、川芎6 g、官桂 3 g、赤芍 6 g、蒲黃 9 g、五靈脂（炒）6 g、丹參15 g、香附 10 g、烏藥 10 g、甘草 6 g）

1.1.3 實驗藥物制備少腹逐瘀湯加減方一副共90 g,分別用8倍量蒸餾水高溫煎煮3次，20 min/次。合并3次藥物溶液，過濾并減壓濃縮到與原藥質量1∶1（g：mL）的體積量。依據(jù)《藥理實驗方法學》中體表面積折算大鼠每日給藥劑量，將人的臨床用藥劑量換算成大鼠的劑量。經(jīng)計算少腹逐瘀加減方人臨床用藥1.5 g/kg。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗動物分組處理 將處于發(fā)情期的雌性大鼠隨機分為6組:空白對照組、模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組（臨床劑量）、中藥高劑量組，陽性藥對照組，每組8只，共48只動物。除空白對照組外，其余各組大鼠制備寒凝血瘀痛經(jīng)大鼠病證結合動物模型：用0～4℃冰水浸泡大鼠，1 次/d，6 min/次，連續(xù) 35 d，以寒冷刺激誘導形成寒凝血淤癥模型，同時大鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.03 mg/只/d,使子宮同步化，制造原發(fā)性痛經(jīng)模型。于造模的第15天開始分別給予中藥低劑量組、中藥中劑量組（臨床劑量）、中藥高劑量組少腹逐瘀加減方灌胃；陽性藥對照組以安瑞克布洛芬灌胃；空白對照組、模型組用等量生理鹽水灌胃，1 次/d，連續(xù) 35 d。

1.2.2 指標檢測 ①扭體反應：連續(xù)灌胃35 d，最后一日給藥1 h后，各組腹腔注射縮宮素2 U/只，觀察30 min內大鼠扭體次數(shù)并計算扭體潛伏期、扭體次數(shù)抑制率。扭體潛伏期=開始扭體時間-注射縮宮素時間；扭體抑制率=（模型組扭體均數(shù)-，給藥組扭體均數(shù)）/模型組扭體均數(shù)×100%。跟據(jù)Schmauss提出的行為學評分標準，統(tǒng)計大鼠扭體次數(shù)、大鼠扭體潛伏期時間（min）及扭體抑制率。②血小板粘附性的指標：造模后,各組大鼠均注射10%水合氯醛溶液(0.3 mL/kg)麻醉,采血,將血液置于含肝素或乙二胺四乙酸二鉀 (測血細胞比容時)的真空采血管中,混勻,離心,采用全自動血流變測試儀迅速檢測大鼠的全血黏度。③大鼠血清中PG含量：大鼠腹腔靜脈取血，約5 mL,4℃，2 500 r/min,離心15 min,取上清液，置于-80℃冰箱內保存，ELISA試劑盒檢測血清中PGE2。④大鼠子宮勻漿NO含量：取雙側子宮以冰凍的生理鹽水洗凈拭干稱重，制成10%的子宮組織勻漿，以 1 800 r/min，低溫離心15 min，取上清液，按NO試劑盒說明書的實驗步驟嚴格操作。

1.3 統(tǒng)計方法

各組數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行分析，用（±s）表示計量資料，進行 t檢驗，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

①少腹逐瘀湯加減方對寒凝血瘀型大鼠扭體反應次數(shù)的影響,與空白對照組相比，其余5組均有扭體反應且扭體次數(shù)、扭體評分明顯增高（P<0.01)，說明大鼠痛經(jīng)模型制備成功。與模型組比較，陽性藥對照組、中藥低劑量組、中藥中劑量組（臨床劑量）及中藥高劑量組的扭體潛伏期明顯延長(P<0.05)，扭體次數(shù)明顯減少(P<0.01)，見表 1。

表1 少腹逐瘀湯加減方對大鼠的扭體反應的影響程度（±s）

表1 少腹逐瘀湯加減方對大鼠的扭體反應的影響程度（±s）

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別 潛伏期（min） 扭體次數(shù)（次）空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組30（5.11±1.35）&（10.35±0.66）&*（8.45±1.78）&*（8.96±0.74）&*（8.02±1.33）&*0（6.33±1.03）&（1.50±0.55）&*（2.17±0.75）&*（1.75±0.50）&*（1.75±1.16）&*

②少腹逐瘀湯加減方對寒凝血瘀型大鼠血小板粘附性的影響,與空白對照組相比，其余五組的低切值明顯升高（P<0.01)，與模型組相比 ,陽性藥對照組、中藥低劑量組、中藥中劑量組（臨床劑量）及中藥高劑量組在高、低切變率均明顯降低血流變(P<0.05)。見表2。

表2 少腹逐瘀湯加減方對大鼠血清PGE2含量的影響程度[（±s），pg/mL]

表2 少腹逐瘀湯加減方對大鼠血清PGE2含量的影響程度[（±s），pg/mL]

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別PGE2空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組0.51±0.61（0.49±0.50）&（0.43±0.116）&*（0.45±0.13）&*（0.48±0.12）&*（0.47±0.15）&*

③少腹逐瘀湯加減方對寒凝血瘀型大鼠血清中PG含量的影響,模型組PGE2含量最低(P<0.01)。治療后，PGE2含量明顯升高(P<0.05)。見表 3。

表3 少腹逐瘀湯加減方對全血粘度的影響程度（±s，n=8）

表3 少腹逐瘀湯加減方對全血粘度的影響程度（±s，n=8）

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別 低切 高切空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組46.61±7.58（22.04±3.24）&（44.61±0.59）&*（39.66±0.56）&*（44.44±8.10）&*（48.02±6.12）&*7.05±1.15（3.86±0.48）&（6.32±1.60）&*（8.81±0.98）&*（7.02±1.63）&*（7.69±1.66）&*

④少腹逐瘀湯加減方對寒凝血瘀型大鼠子宮勻漿NO含量的影響,大鼠子宮勻漿中NO的含量與模型組相比都有較大的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。NO可表現(xiàn)出致痛和鎮(zhèn)痛雙重角色，增多則其抑制作用而陣痛。見表4。

表4 少腹逐瘀湯加減方對子宮組織NO含量的影響程度+[（±s），μmol/gprot]

表4 少腹逐瘀湯加減方對子宮組織NO含量的影響程度+[（±s），μmol/gprot]

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別NO空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組0.19±0.167（0.36±0.356）&（0.39±0.754）&*（0.42±0.128）&*（0.42±0.092）&*（0.51±0.115）&*

⑤少腹逐瘀湯加減方對寒凝血瘀型大鼠血小板聚集值的影響，與空白對照組相比，其余5組的PT及APTT增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表5。

表5 少腹逐瘀湯加減方對凝血四項的影響程度（±s）

表5 少腹逐瘀湯加減方對凝血四項的影響程度（±s）

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別PT animal凝血酶原時間（動物）APTTanimal活化部分凝血活酶時間 凝血酶時間空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組7.83±0.26（7.48±0.22）&（8.28±1.07）&＊（7.60±0.10）&＊（7.78±0.25）&＊（8.16±0.49）&＊18.42±4.24（16.60±0.52）&（39.34±14.52）&＊（21.23±6.37）&＊（17.33±1.38）&＊（18.40±3.16）&＊36.85±2.22（33.48±4.20）&（19.82±6.17）&＊（29.13±7.18）&＊（35.68±1.05）&＊（35.24±4.15）&＊

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學分析寒凝血瘀型的痛經(jīng)的病理因素，認為血液循環(huán)對其有著十分重要的影響[2]。研究顯示其主要與血液流變的指標變化，微循環(huán)流通不暢以及血流動力學改變等多方面有著密切聯(lián)系[3]。該文運用冰水浴的方案構造寒凝血瘀型痛經(jīng)的模型，經(jīng)過一系列的理化測驗，發(fā)現(xiàn)大鼠的全血高切黏度、大鼠的全血低切黏度、大鼠血清中PGF2含量以及大鼠子宮勻漿NO含量等多種數(shù)據(jù)均發(fā)生了改變，這些現(xiàn)象在一定程度上可以展示了臨床上患有寒凝血瘀型痛經(jīng)的女性患者的一些臨床體征。

少腹逐瘀湯在治療寒凝血瘀型的痛經(jīng)十分有效，有研究可以證明少腹逐瘀湯對機體的作用機理及藥理作用[4]。在少腹逐瘀湯的基礎上進行了加減，增加了四味藥，丹參、烏藥、香附、甘草。丹參活血祛瘀，通經(jīng)止痛的。香附疏肝理氣、調經(jīng)止痛，主行血分，功擅理氣開郁；烏藥順氣降逆、散寒止痛，專走氣分，長于順氣散寒二藥合用，有理氣解郁、散寒止痛之功效。甘草有調和攻補之藥的功效。增加丹參、烏藥、香附、甘草四味藥，使藥方的散寒止痛及活血祛瘀能力進一步增強。

該實驗顯示服用少腹逐瘀湯加減方治療和服用安瑞克布洛芬治療均可使扭體的潛伏期延長，扭體次數(shù)有均顯著下降，說明少腹逐瘀湯加減方和安瑞克布洛芬對寒凝血瘀型痛經(jīng)均有改善，且能證明少腹逐瘀湯加減方有較好的療效。中藥組低劑量，中藥組中劑量，中藥組高劑量這3種比較中藥組低劑量扭體潛伏期最長，扭體次數(shù)最少。其次，該實驗中除空白對照組外血液粘稠度均有增加。但在治療后，采取中藥組和安瑞克布洛芬的血液粘稠度均有降低。此外，PG的含量與痛經(jīng)的形成有著密切的關系[5]。同時，PGE2含量的升高同樣可以抑制子宮平滑肌痙攣性收縮的發(fā)生，改善子宮的缺血缺氧的狀態(tài)，最終發(fā)揮止痛的功效。

[參考文獻]

[1]王清任.醫(yī)林改錯[M].天津:天津科學技術出版社，1999.

[2]宿樹蘭,趙新慧,華永慶,等.四物湯及類方香附四物湯揮發(fā)性成分與子宮平滑肌收縮效應相關性研究[J].世界科學技術-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2008,10(2):50-57.

[3]宿樹蘭,段金廒,王團結，等.少腹逐瘀湯對寒凝血瘀大鼠模型血液流變性及卵巢功能的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2008,14（12）：41-43.

[4]吳修紅,楊恩龍，楊新鳴，等.少腹逐瘀湯對寒凝血瘀型子宮內膜異位癥大鼠激素及其受體的影響[J].中藥材,2015,38（6）：1251-1253.

[5]鞏海亮，賈小紅,宋蘭英，等.少腹逐瘀湯配合針刺對痛經(jīng)大鼠的鎮(zhèn)痛作用及對子宮收縮性和前列腺素水平的影響［J］.中國臨床研究,2016.29（5）：590-593.