血清軟骨寡聚基質蛋白對類風濕關節炎的診斷價值

呂超昌，馮少杰，張續德，劉鳳霞

軟骨寡聚基質蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)是近年來研究較多的一種軟骨代謝標記物[1]，主要由軟骨細胞和滑膜細胞分泌，表達于所有關節結構中，包括韌帶、肌腱和滑膜等。關節軟骨一旦損傷，COMP首先釋放入滑液，隨后進入血液。因此，血清和關節液中的COMP 水平可以反映軟骨的降解破壞程度和滑膜炎的嚴重程度[2]。已有研究發現，血清COMP水平可以作為風濕性疾病關節軟骨破壞的新型標記物，并且能作為觀察關節炎患者療效的指標[3]。本研究采用ELISA方法，定量檢測RA患者和健康人群中的COMP及抗環瓜氨酸肽抗體(anti-cyclic citrullinated peptide antibody，抗CCP抗體)水平，評價COMP對RA的診斷價值。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2011-01至2013-02在山東濰坊市人民醫院就診的RA患者82例，均符合2010年修訂后的ACR推薦的RA診斷標準[4]，其中男21例，女61例，平均(49.93±11.15)歲，且符合下列要求：年齡>18歲，未經任何治療，無其他風濕性疾病或嚴重疾病，自愿參加本次實驗，在濰坊居住時間≥1年。健康對照人群選取同一時間內在山東濰坊市人民醫院查體中心進行體檢的健康人34例，其中男10例，女24例，平均(47.60±15.49)歲，且符合下列要求：無免疫風濕疾病、腫瘤、慢性感染等病史，與患者無親屬關系，與患者平均年齡差距在2歲以內。本研究經醫院倫理委員會審核批準，所有對象均簽署了知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 分組 根據體格、實驗室檢查將患者分為活動期組和緩解期組。活動期組患者滿足下列標準中的4或5條：(1)晨僵時間≥1 h；(2)有中度靜息痛；(3)腫脹關節≥3個；(4)壓痛關節≥8個；(5)紅細胞沉降率(ESR)>30 mm/h。緩解期患者滿足下列要求且時間超過2個月：(1)晨僵時間≤15 min；(2)無靜息痛；(3)無關節腫脹和壓痛；(4)ESR<30 mm/h(男)或20 mm/h(女)。

根據患者手部X線表現和參考文獻[5，6]將患者分為兩組：骨關節異常組和骨關節無異常組。

1.2.2 血樣采集及試劑來源 所有患者(治療前)及健康人群采集靜脈血5 ml入含有分離膠的真空黃頭管，室溫自然凝固20 min，3800 r/min離心20 min后將血清移至EP管-80 ℃保存至待檢。COMP試劑盒由美國神谷生物公司提供，抗CCP抗體試劑盒和標準品均由上海富藥科芯生物技術有限公司提供。兩種試劑均采用酶聯免疫吸附(ELISA)方法測定, 酶標儀判讀結果。所有操作步驟均嚴格按照試劑盒說明書。COMP和抗CCP抗體最低檢測濃度分別為0.4 ng/ml和0.1 U/L。

1.3 統計學處理 采用SPSS17.0軟件進行統計學分析，組間比較采用t檢驗或Mann-Whitney U-test。繪制ROC曲線，選取最佳截斷值并計算AUC、靈敏度和特異度，分析COMP和抗CCP抗體的最佳截斷值和診斷效果。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 COMP、抗CCP抗體、ESR、CRP、RF水平的比較 RA患者COMP、抗CCP抗體水平高于健康組，差異有統計學意義(P<0.05)；ESR、CRP、RF差異無統計學意義(表1)。

分組例數COMP(ng/ml)抗CCP抗體(RU/ml)ESR(mm/h)CRP(mg/dl)RF(U/ml)RA組8229.51±9.2165.57±58.6210.94±6.854.90±3.30125.10±65.84健康組3417.85±5.5521.48±24.458.35±6.533.87±2.76101.50±60.36t8.375.721.881.601.80P0.0000.0000.0630.1120.075

2.2 RA患者活動期和緩解期COMP水平的比較 46例RA患者活動期COMP水平(33.08±8.80) ng/ml和36例緩解期COMP水平(24.94±8.80) ng/ml的比較得出兩組COMP水平差異有統計學意義(t=4.4，P<0.05)，RA患者COMP水平活動期組高于緩解期組。

2.3 RA患者骨質破壞組和骨質未破壞組COMP水平的比較 44例RA患者骨關節異常組COMP水平(31.77±8.21) ng/ml高于38例骨關節無異常組COMP水平(26.88±9.71) ng/ml，差異有統計學意義(t=2.471，P=0.0156)。

2.4 ROC曲線分析 COMP檢測的ROC曲線下面積為0.864(95%CI為0.790,0.937)，最佳截斷值為21.51 ng/ml，其對RA患者診斷的靈敏度為0.817，特異度為0.882;抗CCP抗體ROC曲線下面積為0.746(95%CI為0.674,0.854)，最佳截斷值為34.76 RU/ml，其對RA患者診斷的敏感性為0.610，特異性為0.824(表2)。

表2 類風濕關節炎COMP和抗CCP抗體檢測的

3 討 論

RA是以侵蝕性、對稱性多關節炎為主要臨床表現的慢性、系統性自身免疫性病，影響世界0.5%～1.0%的人口[7]，最顯著的特點是外周關節出現炎性滑膜炎[8]，常伴隨有關節軟骨和骨關節的進展性和不可逆性損傷，可引起關節畸形和致殘，因此早期診斷對RA治療和預后具有重要影響[9]。COMP由二巰鍵相連的五聚蛋白, 屬于凝血栓蛋白家族, 是一類軟骨基質破壞降解過程中釋放到血液和滑膜的大分子物質[10]，成為研究骨與關節損傷的熱點。本研究發現：(1)RA患者COMP水平高于健康組，且活動期組高于緩解期組、骨關節異常組高于骨關節無異常組，表明COMP不僅可以區分RA患者和健康人群，還可判斷疾病的嚴重性，與國內外研究報道一致[11-14]。雖然有研究表明RA患者的COMP水平顯著高于健康對照人群，在早期骨關節損害患者中也有意義，但其實驗結果受年齡、病程、體質指數等影響較大[15]。(2)RA患者和正常人ESR、CRP、RF差異無統計學意義，與沈榮春等[16]研究結果一致。雖然ESR和CRP可以反映RA的疾病活動度，但以此為實驗室檢查指標來診斷RA時其靈敏度和特異度較差[17]。(3)經ROC曲線分析得出：當COMP以21.51 ng/ml為最佳截斷值來診斷和排除RA患者時，其AUC(0.864)、靈敏度(0.817)、特異度(0.882)均高于抗CCP抗體以34.76 RU/ml為最佳截斷值來診斷和排除RA患者時的AUC(0.764)、靈敏度(0.610)、特異度(0.824)。但也有研究結果顯示COMP為指標來診斷RA時只有15%～48%的靈敏度和66%～69%的特異度[18]，因此COMP作為診斷指標的實用性仍需研究[19]。

綜上所述，本研究首次證明用COMP的最佳截斷值為21.51 ng/ml來鑒別RA患者和健康人群，推測COMP可以作為RA患者實驗室診斷的最新指標，但需要注意COMP水平受肌肉含量、年齡、性別、飲食等因素的影響[20]。

【參考文獻】

[1] Skoumal M, Kolarz G, Klingler A. Serum levels of cartilage oligomeric matrix protein. A predicting factor and a valuable parameter for disease management in rheumatoid arthritis[J]. Scandinavian Journal of Rheumatology, 2003, 32(3):156-161.

[2] Garnero P,Piperno M,Gineyts E,etal.Cross sectional evaluation of biochemical markers of bone,cartilage,and synovial tissue metabolism in patients with knee osteoarthritis: relations with disease activity and joint damage[J].Ann Rheum Dis,2001,60(6):619-626.

[3] Morozzi G, Fabbroni M, Bellisai F,etal. Cartilage Oligomeric Matrix Protein Level in Rheumatic Diseases[J]. Annals of the New York Academy of Sciences, 2007, 1108(1):398-407.

[4] Aletaha D, Neogi T, Silman A J,etal. 2010 Rheumatoid arthritis classification criteria:an American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative initiative[J]. Arthritis Rheum,2010, 62: 2569-2581.

[5] Steinbrocker O, Traeger C H, Batterman R C. Therapeutic criteria in rheumatoid Arthritis[J]. J Am Med Assoc,1949; 140:659-662.

[6] 中華醫學會風濕病學分會. 類風濕關節炎診斷及治療指南[J]. 中華風濕病學雜志, 2010, 14(4):265-270.

[7] Sokka T, Kautiainen H, Toloza S,etal.QUEST-RA: quantitative clinical assessment of patients with rheumatoid arthritis seen instandard rheumatology care in 15 countries[J].Ann Rheum Dis, 2007,66: 1491-1496.

[8] 王少坤, 袁威玲, 湯艷春,等. 超聲檢查在早期類風濕關節炎外周關節病變中的應用[C]// 華東六省一市風濕病學學術年會暨2011年浙江省風濕病學學術年會. 2011.

[9] Kaushik P, Kaushik R. Diagnosis and management of rheumatoid arthritis.[J]. American Journal of Medicine, 2008, 121(6):9-10.

[10] Kim H J, Lee Y H, Kim C K. Changes in serum cartilage oligomeric matrix protein (COMP), plasma CPK and plasma hs-CRP in relation to running distance in a marathon (42.195 km) and an ultra-marathon (200 km) race[J]. European Journal of Applied Physiology, 2009, 105(5):765-770.

[11] M?lbaek K,H?rslev-Petersen K,Primdahl J. Diagnostic delay in rheumatoid arthritis: a qualitative study of symptom interpretation before the first visit to the doctor[J]. Musculoskeletal Care,2016,14:26-36.

[12] 黃 闊,張慶勇,李光迪.軟骨寡聚基質蛋白在類風濕性關節炎中的臨床應用價值[J].中國衛生檢驗雜志,2015,25(20):3486-3488.

[13] Fujikawa K,Kawakami A,Tamai M,etal.High serum cartilage oligomeric matrix protein determines the subset of patients with early stage rheumatoid arthritis with high serum C-reactive protein，matrix metalloproteinase-3，and MRI-proven bone erosion[J].J Rheumatol，2009,36(6): 1126-1129.

[14] Andersson M L, Svensson B, Petersson I F,etal. Early increase in serum-COMP is associated with joint damage progression over the first five years in patients with rheumatoid arthritis[J]. BMC sculoskelet Disord,2013,14:229.

[15] Defrawy A O E, Gheita T A, Raslan H M,etal. Serum and synovial cartilage oligomeric matrix protein levels in early and established rheumatoid arthritis[J]. Zeitschrift Fur Rheumatologie, 2015, 74(Suppl 2):1-6.

[16] Shen R, Ren X, Jing R,etal. Rheumatoid factor, anti-cyclic citrullinated peptide antibody, C-reactive protein, and erythrocyte sedimentation rate for the clinical diagnosis of rheumatoid arthritis[J]. Lab Med ,2015,46:226-229.

[17] Shen R, Ren X, Jing R,etal. Rheumatoid Factor, Anti-Cyclic Citrullinated Peptide Antibody, C-Reactive Protein, and Erythrocyte Sedimentation Rate for the Clinical Diagnosis of Rheumatoid Arthritis.[J]. Laboratory Medicine, 2015, 46(3):226-229.

[18] Nikolaisen C, Rekvig O P, Nossent H C. Diagnostic impact of contemporary biomarker assays for rheumatoid arthritis[J]. Scandinavian Journal of Rheumatology, 2007, 36(2):97.

[19] Bender A L, Da S I, von Mühlen C A,etal. High specificity but low sensitivity of the cartilage oligomeric matrix protein (COMP) test in rheumatoid arthritis and osteoarthritis[J]. Clinical Chemistry & Laboratory Medicine, 2010, 48(4):569-570.

[20] Tseng S，Reddi A H，Di Cesare P E.Cartilage oligomeric matrix protein(COMP) : A biomarker of arthritis[J].Biomark Insights,2009,17(4):33-44.