替莫唑胺原料藥粒度測定方法研究

米瀟 崔東冬

摘 要：采用 Malvern Mastersizer 2000 型激光粒度分析儀研究微粉化替莫唑胺粒度測定方法。通過篩選分散劑種類、表面活性劑及其濃度，設定儀器參數，篩選樣品濃度及進行溶液穩定性研究確定了一種全新的替莫唑胺粒度測定方法。方法的精密度和耐用性驗證結果表明本文確定的方法精密度及耐用性好。本法可準確測定微粉化替莫唑胺原料藥的粒度。

關鍵詞：替莫唑胺；粒度；光散射法；微粉化

Abstract：A new test method was studied for the determination of particle size of Temozolomide by using Malvern Mastersizer 2000 type laser size analyzer.The method was established by the screening of dispersion agent，surfactant and its concentration，setting the parameters of analyzer，screening of samples concentration，and studying of solution stability.The method was validated for precision and robustness.The method validation results showed that the test method established by this study is precise and robust.The test method can be used to test the particle size of micronized temozolomide accurately.

Key words：Temozolomide；Particle size；Light scattering method；Micronization

替莫唑胺（Temozolomide，1）是一種治療腦膠質瘤療效較好的新藥，其具有較寬的抗腫瘤譜、可口服、易于透過血腦屏障、安全等優點。1在二甲基亞砜中略溶，在水中微溶，在冰醋酸中微溶，在甲醇中極微溶解，在乙醇中幾乎不溶解。[1]

1原料藥微粉化后，靜電作用增大，采用篩分法容易糊篩，難操作，效率低，不利于產品粒度的測定。因此，本研究旨在通過建立一種全新的，能準確、快速地測定微粉化1粒度的光散射法光散射法濕法測定法。

1 儀器與試藥

Malvern Mastersizer 2000型激光粒度分析儀，HYDRO2000MU 型濕法進樣器（英國 Malvern 公司）

1（Lunarsun，含量 98%-102%）；山梨糖醇酐三油酸酯（司盤85）為化學純，正己烷、無水乙醇為分析純。

2 方法與結果

微粉化后的替莫唑胺，顆粒極細，非常容易產生靜電，故采用光散射法濕法測定法。

2.1 方法的確定

2.1.1篩選分散劑

根據1的溶解度，初步選定乙醇為分散劑。實驗過程中發現乙醇會逐步溶解1。溶劑的極性會影響藥物的溶解度，故根據溶劑的極性大小選定正已烷為分散劑。

將1加入正己烷中，超聲，樣品粘于燒杯壁底及壁上，且成團塊狀。因此判定需在正己烷中加入表面活性劑防止粒子聚集。吐溫80不能改善樣品粘壁。0.1%和0.2%的司盤85—正己烷作為分散劑分散效果無明顯差異，最后選定0.1%的司盤85--己烷作為分散劑。

2.1.2設定儀器參數

在用激光粒度儀進行粒度測定時需設定的主要儀器參數有分散介質折射率、樣品折射率、樣品吸收率。分散介質的折射率可通過文獻查得，己烷的折射率為1.372。1的折射率為1.520。樣品的吸收率為0.1。[2]

攪拌器轉速設定為2000rpm，循環時間設定為2分鐘。

2.1.3篩選樣品濃度

樣品濃度需滿足儀器靈敏度要求并使粒子保持單個原始態。濕法測定所需的供試品量通常應達到檢測器遮光度范圍的8 ～ 20%。[3]

10mg，20mg，30mg，和40mg1，用10ml0.1%的司盤85--己烷分散，超聲30秒后檢測。樣品濃度過小，儀器遮光率達不到8%的要求，樣品濃度過大，則儀器遮光度超過20%，儀器提示加入更多的分散劑。最后確定30mg 樣品分散到10ml0.1% 司盤85-正己烷為合適的樣品濃度

2.1.4溶液穩定性研究

樣品配制好后，超聲30秒，室溫放置5分鐘，觀察到樣品重新粘在燒杯底部及壁上，振搖后樣品不能重新分散。配制好的樣品，超聲30秒后，立即進樣，溶液循環測定20分鐘，粒度結果變化不明顯。所以配制好的樣品應立即進樣，樣品可在系統中穩定循環20分鐘。

2.1.5確定的方法

稱取1.0+/-0.05克span-85，用正己烷稀釋到1000ml（01%）做分散劑。取微粉化的替莫唑胺30mg，放入一盛有10ml分散劑的50ml燒杯中，超聲30秒鐘。往Hydro SM進樣器（小杯進樣器）中加入100ml分散劑，攪拌下用滴管將供試液轉移入進樣器中。循環速度2000rpm，循環2分鐘。

2.1.6分析方法驗證

在建立藥品質量標準時，分析方法需經驗證。[3]根據粒度測定方法的特點，驗證了方法的精密度和耐用性。

（1）精密度。精密度通常包括重復性和中間精密度。

（2）重復性。實驗員A按照2.1.5章節描述的方法配制六份樣品并進行測定。6個樣品的d（0.5）RSD應小于10%，d（0.1）、d（0.9）的RSD應小于15%。結果見表1。

結論：6個樣品的d（0.1），d（0.5），d（0.9）的RSD均小于5%，符合驗證標準。

（3）中間精密度。實驗員B隔天按照2.1.5章節描述的方法配制六份樣品并進行測定。實驗員A和B共12個樣品的d（0.5）RSD應小于10%，d（0.1）、d（0.9）的RSD應小于15%。結果見表2。

結論：12個樣品的d（0.5）RSD小于5%，d（0.1）、d（0.9）的RSD小于10%。符合驗證標準。產品粒度分布穩定，方法精密度好。

（4）耐用性。影響光散射法測定的實驗條件有：樣品超聲時間，攪拌器轉速，樣品循環時間。驗證時每次只能改變一個條件。驗證標準為：改變條件和正常條件下測定結果的d（05）RSD應小于10%，d（0.1）、d（0.9）的RSD應小于15%。各條件下的d（0.1），d（0.5），d（0.9）測定結果見下：

超聲：20秒：7.515，18.241，39.406；30秒：7.486，18.190，39.185；60秒：6.021，17.005，39.534；RSD（%）：d（0.1）12.2，d（0.5）3.9，d（0.9）0.4。

攪拌器轉速：1800 rpm：6.041，17.879，40.803；2000rpm：7486，18.190，39.185；

2500rpm：5.952，17.638，40.575；RSD（%）：d（0.1）13.3，d（0.5）1.5，d（0.9）2.2；

循環時間：1分鐘：7.615，18.344，38.530；2分鐘：7.593，18.31，38.426；3分鐘：7.565，18.267，38.447；RSD（%）：d（0.1）0.3，d（0.5）0.2，d（0.9）0.1；

結論：各驗證條件下個樣品的d（0.1），d（0.5），d（0.9）RSD符合驗證要求。本方法的耐用性好。

3 分析和討論

采用光散射法濕法測定時，分散劑的種類非常關鍵，需選擇不溶解原料藥的溶劑。溶劑可依據極性藥物在非極性溶劑中難溶，非極性藥物在極性溶劑中難溶的原理選擇。在分散劑中加入良好的表面活性劑有助于達到更好的分散效果，應篩選表面活性劑的濃度以達到更好的分散效果。樣品測定時樣品配制用分散劑及進樣器中的溶劑應保持一致，否則會破壞樣品的分散效果，影響測定結果的準確性。樣品濃度對測定很關鍵，以控制儀器遮光度達到8%-20%為宜。超聲可使聚集的顆粒分散開，但應觀察超聲后樣品可以放置的合適時間，避免樣品放置后重新聚集。

參考文獻：

[1]萬艷武.替莫唑胺的工藝條件探索與質量控制研究[D].南京：南京大學，2011.

[2]關玉晶，楊波，蔣翠鶯.光散射法測定難溶性藥物粒度[J].Strait Pharmaceutical Journal，2017，29（7），1-3.

[3]國家藥典委員會編.中國藥典[S].2015.四部.374-377.

作者簡介：米瀟（2000-），女，高中生；崔東冬（1973-），男，主要從事藥物開發和應用。