減少超排供體羊無精卵的技術措施

董正德 佟桂芝 宋斌

摘要：針對我國肉羊良種化程度低、生產水平和繁殖技術水平低的現狀，從提高肉羊超數排卵的卵子人工授精率、優質胚胎采集率等方面入手提高肉羊胚胎移植效果。選擇提高了優質公（母）羊繁殖率，建立體內胚胎高效生產：即從供（受）飼養管理、體超數排卵、人工授精率，并對內羊產業化生產進行指導，解決我國肉羊生產率和良種化率低的問題，推進舍飼進程，同時緩解草畜矛盾，保持生態平衡。

關鍵詞：肉羊；超數排卵；無精卵；胚胎移植

中圖分類號：S826.3

文獻標識碼：A

文章編號：2095-9737（2018）05-0003-02

1 種公羊的選擇

對于有種公羊的養羊場，超數排卵時，種公羊的配種繁重。在質量上要求品種優良，系譜清楚，外貌特征符合品種要求，膘情中上等，健康，精液質量好，性欲旺盛；在確定參配種公羊數量時，要根據所需配母羊的數量、血緣。即每一個血系中至少要有兩只以上主配公羊，并且公羊配種后要適當休息。

2 種公羊的保健

專人分群飼養，并保持穩定。羊舍要干燥、清潔、有充足的光線。每天運動時間6h以上，距離為6～9 km。略快自然放牧均勻驅趕速度為宜。飲水、食鹽自由采食。供體羊超排時，公羊保證性欲旺盛、精液品質優良，供體母羊才能夠采集到優質受胎。性欲差的公羊，可以用睪酮或者類似物處理。在供體超排時，公羊比平時提高20%～30%營養標準，超排前2月開始。有優質牧場，自由采食和飲水，補飼全價精料、多汁飼料以及胡蘿卜。沒有放牧場，飼草料要全價、適口性好，易消化。最理想的飼草料是用全價料和優質牧草、青貯飼料等混合搭配飼喂。

3 供體母羊的選擇

健康，無生殖疾病，膘情適中，年老，身體過肥或過瘦的母羊超排時出現發情，但不排卵或排出的卵質量差，人T授精后也只能是無精卵。供體母羊系譜清楚，健康，年齡2. 5—6歲，體格健壯，無空懷史。對所選擇的供體母羊提前進行傳染病檢疫，進行預防注射和體內外寄生蟲的驅蟲。要注意檢出已經妊娠母羊，產羔母羊必需產羔40天以后才能作為供體。

4 供體羊的飼養管理

在準備期的飼養管理包括飼喂、飲水、補鹽、運動、試情等內容。對供體羊最好采取放牧與舍飼相結合的飼養管理方式，以利于供體羊均衡攝入所需營養物質。有牧場的地區，采取放牧后補飼的辦法，補飼的精料分早、晚2次喂給。早晨補飼略少些。晚上略多些：全舍飼的羊，被動驅趕運動所需時間較短，在補飼精料量超過0. 75 kg時，一般早、中、晚三次補飼，但注意飼喂后1～2 h反芻時間里羊群要保持安靜。

5 試情公羊的選擇

要求性欲、身體健康狀況良好的本地公羊。試情羊與供體母羊數量比為1： 30。

6 用于超數排卵的激素選擇

國產激素類：FSH（促卵泡素）、LH（促黃體生成素）、PG（前列腺素）、CIDR（含孕激素陰道栓塞）。

進口激素類：可使用國外生產的同類優質產品。7激素劑量（注射總量/只）

FSH（國產）劑量：90～200 U。LH（國產）劑量：根據FSH的注射劑量，肌注80～120 U。

注：進口藥品參照其產品說明書確定劑量。

在母羊放入CIDR之日作為第o天，在放人CIDR的9—13天開始超排，在第6針注射FSH時取出CIDR。撤栓后13 h，用試情公羊，每12 h試情1次，發情供體羊發情12 h必須及時配種。采用本交或本交加人工授精相結合方法，連續配種2～3次，每次間隔12 h。采用人工授精技術進行配種時，保證供體羊撤栓后18～48 h內輸精3次。可進行腹腔內窺鏡子宮深部輸精，或對發情超排母羊自然交配或常規人工輸精。

8 配種

8.1 供體羊發情鑒定

在第6次注射FSH時即對超排供體羊觀察發情。觀察時間：早晚各1次，每次不少于o.5h。觀察方法：系好試情布的試情公羊，放入超排供體母羊群中，每1只試情公羊可檢測30—40只供體母羊，母羊站立、并接受試情公羊爬跨，可以確定該供體母羊已發情，準確記錄供體母羊的發情時間。

8.2 適時輸精

進行第一次輸精的時間：自然發情的母羊在發情后24 h，誘導發情的母羊應該在撤檢后54 h，發情母羊子宮內輸精范圍在發情結束前2～3 h，即排卵前2～3 h，之后每隔12 h輸精1次。鮮精液活力在70%以上，每次人工輸精有效精子數不少于3×10 7，冷凍精液活力在35%以上，輸精次數2～3次。

8.3 人工授精技術

8. 3.1 人工授精前準備

在輸精前1 h，對公羊進行采精，要求采精地點安靜。檢查精液品質，然后根據精子密度、活力稀釋，分裝到0.5 mL的吸管，有效精子數要求為7 000萬個。每側子宮內輸精量0.25 mL。采精前對種公羊外生殖器清洗消毒。采精、精液稀釋、輸精用的器具嚴格滅菌、消毒。子宮頸輸精：母羊外陰部必須經過清洗消毒。稀釋后的精液溫度要保持在25℃左右。用開膣器打開陰道找到子宮頸外口，將輸精器插入子宮頸外口不少于1 cm，注入定量精液。

8.3.2 腹腔內窺鏡子宮內輸精時間

在肉羊撤栓后48 h，利用腹腔鏡子宮內輸精，能提高胚胎受精率、降低胚胎的退化率，能獲得高的受精率。對于超排羊來說，明顯好于常規子宮頸口人工授精和自然交配；在超排羊中自然交配或宮頸輸精時常出現不受精的現象。肉羊宮頸的卷繞結構使精液很難精確到位，另外，同期發情和超數排卵處理本身對精子通過宮頸運輸有一定干擾作用，這對受精率和可移植胚胎的數量有一定影響。腹腔內窺鏡技術的關鍵是適時輸精。LH峰出現的時間大約在去栓后26 h，排卵大約發生在CIDR取出后48～50 h，在未做超排處理和放入CIDR并做超排處理的肉羊中，從LH峰出現到排卵的時間大約是24 h。這說明在超排肉羊中腹腔內窺鏡子宮內輸精的最適時間受超排方案的影響。

8.3.3 子宮內輸精部位

對子宮角前端、子宮角中端、子宮角末端和子宮角基部進行輸精操作時，存在以下技術差異：對于比較粗的子宮角末端及子宮角基部子宮內輸精時，手術的切口相對較大，造成黏連的幾率也就增大，且傷口易受到感染；而手術切口較小的子宮角中部輸精，借助腹腔鏡可清晰地觀察到子宮角中部，且子宮鉗很方便將其牽拉輸精部位，對卵巢等損傷較小，傷口愈合快。研究證明，子宮角中部輸精，并且采用直接對雙側子宮角進行輸精。這樣就可以省去單側輸精時必須仔細觀察母羊兩側卵巢狀況，并且準確判斷是否有卵泡排卵等。

8.3.4 有效精子數

研究證明有效精子數輸入劑量在1×l07—4×107個之間時，胚胎受精率隨著輸精劑量增加而增加，在4×l07個時，胚胎的受精率最高。

8.3.5 冷凍后的注意事項

冷凍精液解凍后，在室溫條件下，停留時間越短越好，做到隨時解凍，隨時輸精。在進行子宮內輸精操作時，解凍后的精液在室溫停留的時間最好不要超過30 min。

8.3.6 改變傳統輸精方法，采用腹腔內窺鏡輸精

通過改進羊凍精稀釋液配方和凍精冷凍程序，利用腹腔內窺鏡進行羊冷凍精液輸精，改變了傳統的子宮頸口輸精方法。突破了凍精配種的技術難題，使羊凍精配種情期受胎率由原來的（子宮頸輸精）33.5%，提高到73. 3%（腹腔鏡輸精），提高了39. 8%。

8.3.7 供體羊補加硒VE的處理

對供體羊開始超排時，注射硒 VE，直至配種結束，劑量為每天3 mL/只，方法是每天上午一次性分點肌肉注射。在飼養管理和激素處理相同的條件下，進行補加亞硒酸鈉VE和相同輸精方式試驗，對供體母羊排卵和受精率的影響。肌注亞硒酸鈉VE的受體母羊，每只平均沖胚11.5枚，顯著高于對照組（8.9枚）（P<0.01），且組內各重復間差異不顯著（ P>O.05），可見，在配種前給母羊補充硒 VE對其排卵有明顯的影響。