苞葉杜鵑組織培養初步研究

劉敏 陳欣 蔡超 宋斐飛

[摘 要]對苞葉杜鵑進行了組織培養研究，結果表明：以加入ZT2.0mg/L的WPM培養基效果較好，以莖尖為材料的誘導率較高。

[關鍵詞]組織培養；苞葉杜鵑

[中圖分類號]S685.21 [文獻標識碼]A

苞葉杜鵑（Rhododendron redowskianum），又稱云間杜鵑，為杜鵑花科（Ericaceae）、杜鵑花屬（Rhododendron）矮小落葉灌木，株高20cm左右，分枝多，根系發達呈墊狀植物。葉互生，長橢圓形，長1-2cm，葉緣具長腺毛。花少數生枝頂，紫紅色，花徑2cm， 花冠五裂，其中一側裂至基部，至使冠呈左右對稱狀。花后結蒴果。苞葉杜鵑在長白山苔原帶具有水土保持和維持生態平衡的重要作用，為吉林省I類保護植物。苞葉杜鵑在長白山分布數量少，在天池附近的旅游區應倍加愛護，防止踐踏與采摘。花美麗可愛，可研究人工栽培為觀賞花卉。

目前，關于苞葉杜鵑組織培養快速繁殖技術研究較少，對此，我們摸索出適合吉林地區快速繁殖苞葉杜鵑的方法，并建立苞葉杜鵑的苗木生產基地，為園林綠化供應苗木。

1 材料和方法

1.1 材料來源

于5月中旬在長白山上，剪取苞葉杜鵑幼嫩枝條，放于水中進行室內培養，次日接種。

1.2 實驗方法

1.2.1 配置培養基

培養基的配置主要采取以下步驟：

1.2.1.1 溶解瓊脂及蔗糖。用天平準確稱取8g瓊脂和20g蔗糖，將瓊脂放入小鍋中，加水、加熱溶解，同時用玻璃棒不斷攪拌，直至沸騰，停止加熱，再把蔗糖放入鍋中，攪拌充分后，將液體倒入大燒杯中。

1.2.1.2 加入WPM培養基母液。分別向大燒杯中加入大量元素、微量元素、鐵鹽、肌醇、有機溶劑和不同濃度的細胞分列素（ZT），組合溶液見表1，細胞分裂素濃度見表2。

1.2.1.3 調整PH值。將PH值調到約4.8-5.0。

1.2.1.4 分裝。將已經調好的溶液分裝到洗刷干凈的三角瓶中。

1.2.1.5 培養基滅菌。將三角瓶擺放在高壓滅菌鍋中，接通電源高壓滅菌，當溫度達到121°C，壓力達到0.105MPa時，滅菌15min。

1.2.2 苞葉杜鵑組織培養步驟

1.2.2.1 器皿、工具的洗滌。

1.2.2.2 植物材料的表面滅菌。

首先，刷洗、沖洗植物材料。將苞葉杜鵑植株剪成適當大小，放在手中加兩滴洗滌精，小心搓洗。放入干凈小燒杯中，再用蒸餾水沖洗。

其次，將清洗干凈的植物材料連同燒杯一起放在工作臺上，升汞消毒10min，浸泡過程中用干凈玻璃棒不斷攪拌，充分接觸。再用蒸餾水沖洗4-5次，沖洗完畢，便可接種。

1.2.2.3 接種。

整個過程中實驗環境及材料均需要無菌操作。將吸水紙鋪在器皿上，將材料用鑷子取出，用剪刀剪成1cm小段，每段上要含有芽，插植到培養基上。

1.2.2.4 培養條件。

將裝有接種材料的三角瓶放到培養室中培養，溫度保持在25°C，采用自然光照。

1.2.2.5 試驗觀察。

分別在5月21日、5月29日和6月9日對試驗結果進行觀察，并記錄染菌、褐化和生長分化情況。

2 結果與分析

實驗結果見表3

從表3可以看出，以莖尖誘導無菌芽效果較好，25d后誘導率達50%，濃度為2.0mg/L的細胞分裂素（ZT）對外植體誘導較為適宜，誘導率為56%。

3 結論與討論

3.1 培養基對組培的影響

不同植物對培養基要求不同，大量微量元素、鐵鹽、肌醇、蔗糖的濃度以及pH的變化都會影響外植體的生長，培養基中NH4+濃度過高，就會引起植物體褐化；pH的變化則可引起酚類與過氧化酶活性結合部位的改變，也會影響植物組織發生褐化。在實驗過程中充分考慮到苞葉杜鵑喜酸性土壤，因此培養基要調整其PH值為4.8-5.0。這是苞葉杜鵑組培成功的關鍵因素之一。

3.2 外植體對組培的影響

外植體體積過大易污染，不宜采納；而過小，成活率又會很低。不同的植物、器官和組織，其形態發生能力都不相同。此外生理學的發育年齡，也對組織形態發生有影響。一般情況幼年比老年的組織形態發生能力強，且帶菌少，這也是很重要的規律之一。

3.3 光照對組培的影響

光照的作用主要是在形態形成的誘導方面，它涉及植物細胞分化的若干重要過程，通過光合作用在特殊的細胞里積累淀粉，一定量淀粉聚集后，便引起器官發生。誘導器官形成時，不需要很強的光，對多數植物來說，保持16h光照，8h黑暗是適宜的。而光的波長，對不同植物的反應也有差異。在藍光下幼苗生長旺盛，根系粗壯；白光下幼苗纖弱；紅光下出苗少。光強上，植物的組培對此要求則十分嚴格，2000-3000lx的光強一般可滿足植物光周期中對光強的要求。

3.4 溫度及其他方面的影響

一些研究表明，大多數培養中的細胞，其生長適宜溫度為26-28oC，但是仍有一些例外。有些植物組織培養還需要低溫處理或受到晝夜溫度環境的影響，而且溫度可能影響到形態發生的類型。

此外基因型、消毒是否徹底、母株的生理狀態、生長季節等對苞葉杜鵑的組織培養有一定影響。

[參考文獻]

[1] 陳嶸.中國樹木分類學[M].北京：科學出版社，1953.

[2] 湯桂鈞，張建安，蔣建平，等.高山杜鵑的組織培養快速繁殖技術研究[J].上海農業學報.2004（03）.

[3] 王亦菲，孫月芳，周潤梅，等.兩種西洋杜鵑的組織培養[J].上海農業學報，2003（02）.