雙Schiff-Base取代的3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮衍生物的合成及活性研究

姚彬榮，劉方正，劉 巖，楊 威，侯 迷，陳 琴，王春華，侯桂革

(濱州醫學院 藥學院，山東 煙臺 264003)

圖1 3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮衍生物的結構Fig.1 Structures of 3,5-bis(arylidene)-4-piperidone derivatives

近年來醫療技術得到迅猛發展，但腫瘤仍是具有挑戰性的健康問題。姜黃素已被證實具有較好的抗腫瘤活性，但其化學結構不穩定、生物利用度低[1-4]，因此對其重要的α,β-不飽和酮藥效團進行衍生化研究具有重要意義。3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮是一類α,β-不飽和酮與β-氨基酮相結合的新型姜黃素類似物，其結構中含有兩個α,β-不飽和酮藥效團A，可與腫瘤細胞中的巰基發生兩次連續的烷基化反應，這是此類藥物與腫瘤細胞的主要結合位點，而當中心哌啶酮的氮原子被其它基團取代后,則形成一個輔助結合位點B。分子兩側的芳香基團若有其它活性基團取代，則對于整個分子與腫瘤靶點的結合更加有利，可形成輔助結合位點C。3個結合位點的協調作用，可以有效地提高分子的細胞毒活性[5-7]。Shoji等[8]研究發現，3,5-二(2-氟苯亞甲基)-4-哌啶酮(EF24,圖1)在MDA-MB-231人乳腺癌細胞和DU-145人前列腺癌細胞中通過依賴氧化還原機制引起細胞周期停止和凋亡，從而發揮抗癌作用。Yadav等[9]研究了EF24在表達IL-1受體的低容血量休克的大鼠模型上的藥物作用，發現EF24可有效調節IL-1受體途徑。Dimmock等[10]研究發現3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮中兩個芳環為構象E時抗腫瘤活性較好。Awasthi等[11]研究發現3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮衍生物(CLEFMA)能通過氧化應激機制引起肺腺癌H441細胞的自我吞噬。另外,Zhou等[12]報道了一系列不對稱的3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮化合物(MACs)可通過抑制Beas-2B細胞中TNF-α、IL-6、IL-1β和VCAM-1 等炎癥因子的mRNA表達起到抗炎作用，從而對急性肺損傷(ALI)具有治療作用。

本課題組設計并合成了一系列3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮衍生物，并通過評價其對腫瘤細胞系的細胞毒性及抗腫瘤活性，篩選出部分體外抗腫瘤活性和抗多藥耐藥活性的化合物，進一步系統研究了該類化合物的構效關系[13-17]。研究發現，將多酚類芳醛與氨基取代的3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮縮合得到雙Schiff-Base化合物，可對THP-1顯示較好的抑制活性，而多鹵素取代的3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮衍生物及其活性研究尚未見報道。為系統研究該類化合物的構效關系，尋找低毒高效的抗腫瘤藥物，本文通過Claisen-Schmidt縮合、SnCl2/HCl還原以及Schiff-Base縮合反應得到一系列雙Schiff-Base取代的3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮衍生物，并對其抗腫瘤活性進行了系統研究。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

N-甲基-4-哌啶酮、各種芳醛均購于國藥集團化學試劑有限公司；阿霉素(DOX)購于濱州醫學院煙臺附屬醫院。Frontier FT-IR型傅立葉變換紅外光譜儀(美國Perkin Elmer公司，KBr壓片)；Bruker DPX-400型核磁共振儀(德國Bruker公司，以CDCl3或DMSO-d6作為溶劑)，SGW X-4 顯微熔點儀(上海精密科學儀器有限公司)。分子對接采用SYBYL-X 2.0軟件(美國Tripos公司)。

1.2 化合物3a-i的合成

于50 mL圓底燒瓶中，將N-甲基-3,5-二(3-氨基苯亞甲基)-4-哌啶酮(0.32 g,1.0 mmol)分別與2,4-二氟苯甲醛(0.29 g,2.0 mmol)、2,5-二氟苯甲醛(0.29 g,2.0 mmol)、3,5-二氟苯甲醛(0.29 g,2.0 mmol)、4-氯苯甲醛(0.28 g,2.0 mmol)、2,4-二氯苯甲醛(0.35 g,2.0 mmol)、3,4-二氯苯甲醛(0.35 g,2.0 mmol)、4-溴苯甲醛(0.37 g,2.0 mmol)、2-溴-4氟苯甲醛(0.41 g,2.0 mmol)、2-溴-3-羥基苯甲醛(0.40 g,2.0 mmol)溶于15 mL甲醇中，滴加兩滴甲酸，常溫下攪拌反應8 h (TLC跟蹤反應進程)，抽濾，水洗，干燥得黃色固體3a-i。

(3E,5E)-N-甲基-3,5-二[3-(2,4-二氟苯基亞甲基氨基)苯亞甲基]-4-哌啶酮(3a)，產率70%，熔點147～149 ℃,1H NMR(400 MHz,DMSO-d6,25 ℃,TMS,ppm):δ8.75(s,2H),8.18(dd,J=15.6,8.0 Hz,2H),7.66(s,2H),7.53(t,J=7.7 Hz,2H),7.46(d,J=9.4 Hz,2H),7.44-7.37(m,4H),7.35(d,J=7.8 Hz,2H),7.26(t,J=8.0 Hz,2H),3.77(s,4H),2.40(s,3H)。13C NMR(100 MHz,CDCl3):δ186.8,165.1(dd,J=255.1,12.4 Hz),163.2(dd,J=256.5,12.3 Hz),153.0,152.0,136.3,136.0,133.6,129.5(t,J=4.1 Hz),129.4,128.2,122.9,121.2,120.4(dd,J=9.3,3.7 Hz),112.4(dd,J=21.8,3.5 Hz),104.2(t,J=25.2 Hz),57.0,45.8。IR(cm-1):2 780(br),1 674(m),1 617(s),1 587(s),1 500(s),1 428(m),1 266(m),1 221(s),1 186(s),1 138(s),1 088(s),964(s),922(m),889(m),849(s),815(m),790(s),728(m),690(s)。元素分析(%):C34H25F4N3O,理論值:C 71.95,H 4.44,N 7.40;測量值:C 71.89,H 4.45,N 7.37。

(3E,5E)-N-甲基-3,5-二[3-(2,5-二氟苯基亞甲基氨基)苯亞甲基]-4-哌啶酮(3b),產率63%,熔點146～148 ℃,1H NMR(400 MHz,DMSO-d6,25 ℃,TMS,ppm):δ8.77(s,2H),7.82(s,2H),7.66(s,2H),7.58-7.33(m,12H),3.77(s,4H),2.39(s,3H)。13C NMR(100 MHz,DMSO-d6):δ186.8,156.0(dd,J=241.3,1.6 Hz),157.5(d,J=240.5,1.5 Hz),153.9,151.5,136.2,134.8,134.6,130.1,128.9,125.2(dd,J=12.0,7.6 Hz),123.4,122.5,120.8(dd,J=24.8,9.1 Hz),118.7(dd,J=23.9,8.5 Hz),113.7(dd,J=25.1,2.9 Hz),56.7,45.7。IR(cm-1):2 780(br),1 674(m),1 622(s),1 587(s),1 486(s),1 267(m),1 245(s),1 187(s),1 156(m),1 140(m),1 100(m),954(m),895(s),804(s),791(s),731(s),690(s)。元素分析(%):C34H25F4N3O,理論值:C 71.95,H 4.44,N 7.40;測量值:C 71.99,H 4.51,N 7.48。

(3E,5E)-N-甲基-3,5-二[3-(3,5-二氟苯基亞甲基氨基)苯基亞甲基]-4-哌啶酮(3c),產率69%,熔點143～145 ℃,1H NMR(400 MHz,DMSO-d6,25 ℃,TMS,ppm):δ8.77(s,2H),7.82(s,2H),7.66(s,2H),7.58-7.29(m,12H),3.77(s,4H),2.39(s,3H)。13C NMR(100 MHz,CDCl3):δ186.8,164.1(d,J=257.0 Hz),158.6,151.8,136.3,136.0,133.6,130.6(d,J=9.1 Hz),129.4,128.3,122.8,121.5,120.4(d,J=24.7 Hz),115.5(d,J=21.5 Hz),57.1,45.9。IR(cm-1):1 674(m),1 622(s),1 587(s),1 487(s),1 436(w),1 267(m),1 246(s),1 221(m),1 187(s),1 140(m),1 100(m),966(w),916(m),895(s),805(s),791(s),732(s),690(s)。元素分析(%):C34H25F4N3O,理論值:C 71.95,H 4.44,N 7.40;測量值:C 72.02,H 4.39,N 7.45。

(3E,5E)-N-甲基-3,5-二[3-(4-氯苯基亞甲基氨基)苯亞甲基]-4-哌啶酮(3d),產率64%,熔點149～151 ℃,1H NMR(400 MHz,CDCl3,25 ℃,TMS,ppm):δ8.45(s,2H),7.86(m,6H),7.49(m,6H),7.30(m,2H),7.21(m,2H),3.82(s,4H),2.49(s,3H)。13C NMR(100 MHz,CDCl3):δ186.4,159.2,151.6,137.7,135.9,135.7,134.0,133.1,129.7,129.0,128.7,127.6,122.4,120.8,56.6,45.5。IR(cm-1):2 780(br),1 674(m),1 632(s),1 586(s),1 490(s),1 283(s),1 245(m),1 184(s),1 155(m),1 088(s),974(s),953(m),913(m),860(m),826(s),795(s),691(s)。元素分析(%):C34H27Cl2N3O,理論值:C 72.34,H 4.82,N 7.44;測量值:C 72.30,H 4.77,N 7.49。

(3E,5E)-N-甲基-3,5-二[3-(2,4-二氯苯基亞甲基氨基)苯亞甲基]-4-哌啶酮(3e),產率68%,熔點164～166 ℃,1H NMR(400 MHz,CDCl3,25 ℃,TMS,ppm):δ8.88(s,2H),8.23(d,J=8.5 Hz,2H),7.89(s,2H),7.49(m,4H),7.38(d,J=8.4 Hz,2H),7.31(d,J=7.5 Hz,2H),7.25(m,4H),3.87(s,4H),2.51(s,3H)。13C NMR(100 MHz,CDCl3):δ186.3,156.0,151.4,137.5,136.3,135.9,135.6,133.2,131.2,129.4,129.1,129.1,128.0,127.3,122.5,121.1,56.7,45.5。IR(cm-1):1 671(m),1 616(s),1 584(s),1 471(m),1 287(m),1 189(s),1 134(m),1 098(s),972(m),957(w),921(m),890(w),866(s),821(m),792(m),690(s)。元素分析(%):C34H25Cl4N3O,理論值:C 64.47,H 3.98,N 6.63;測量值:C 64.49,H 3.90,N 6.59。

(3E,5E)-N-甲基-3,5-二[3-(3,4-二氯苯基亞甲基氨基)苯亞甲基]-4-哌啶酮(3f),產率72%,熔點107～109 ℃,1H NMR(400 MHz,DMSO-d6,25 ℃,TMS,ppm):δ8.70(s,2H),8.17(s,2H),7.94(d,J=8.1 Hz,2H),7.82(d,J=8.2 Hz,2H),7.66(s,2H),7.55(t,J=7.6 Hz,2H),7.41(d,J=12.2 Hz,4H),7.35(d,J=7.7 Hz,2H),3.78(s,4H),2.41(s,3H)。13C NMR(100 MHz,CDCl3):δ186.4,159.4,151.1,136.5,135.7,134.4,134.2,134.0,131.8,131.3,130.3,129.7,128.5,128.4,123.1,122.0,56.3,45.3。IR(KBr Pellet cm-1):1 671(m),1 613(s),1 583(s),1 470(s),1 279(s),1 206(m),1 183(s),1 127(m),1 058(m),975(w),909(w),821(m),788(m),699(s)。元素分析(%):C34H25Cl4N3O,理論值:C 64.47,H 3.98,N 6.63;測量值:C 64.43,H 4.05,N 6.67。

(3E,5E)-N-甲基-3,5-二[3-(4-溴苯基亞甲基氨基)苯亞甲基]-4-哌啶酮(3g),產率68%,熔點147～149 ℃,1H NMR(400 MHz,CDCl3,25 ℃,TMS,ppm):δ8.43(s,2H),7.86(s,2H),7.81(d,J=8.0 Hz,4H),7.65(d,J=8.0 Hz,4H),7.47(t,J=7.5 Hz,2H),7.29(d,J=10.4 Hz,2H),7.22(m,4H),3.82(s,4H),2.49(s,3H)。13C NMR(100 MHz,CDCl3):δ186.4,159.3,151.5,135.9,135.7,134.4,133.1,131.7,129.8,129.0,127.2,125.8,122.4,120.8,56.6,45.4。IR(cm-1):1 673(m),1 623(s),1 585(s),1 486(s),1 284(s),1 207(m),1 183(s),1 097(s),974(m),953(m),912(m),885(m),856(m),814(s),795(s),690(s)。元素分析(%):C34H27Br2N3O,理論值:C 62.50,H 4.17,N 6.43;測量值:C 62.46,H 4.15,N 6.38。

(3E,5E)-N-甲基-3,5-二[3-(2-溴-4-氟苯基亞甲基氨基)苯亞甲基]-4-哌啶酮(3h),產率67%,熔點134～136 ℃,1H NMR(400 MHz,CDCl3,25 ℃,TMS,ppm):δ8.82(s,2H),8.28(dd,J=8.5,6.5 Hz,2H),7.87(s,2H),7.49(t,J=8.0 Hz,2H),7.40(dd,J=8.0,1.9 Hz,2H),7.32(d,J=7.6 Hz,2H),7.26(s,4H),7.18(dd,J=11.7,4.6 Hz,2H),3.83(s,4H),2.50(s,3H)。13C NMR(100 MHz,CDCl3):δ186.8,164.1(d,J=257.1 Hz),158.7,151.8,136.3,136.0,133.6,130.8(d,J=3.4 Hz),130.6(d,J=9.0 Hz),129.4,128.3,126.5(d,J=9.8 Hz),122.8,121.6,120.4(d,J=24.7 Hz),115.5(d,J=21.5 Hz),57.1,45.9。IR(cm-1):1 671(m),1 616(m),1 586(s),1 484(s),1 282(m),1 217(s),1 189(s),1 061(m),975(m),956(m),920(m),889(m),855(s),823(m),787(s),690(s)。元素分析(%):C34H25Br2F2N3O,理論值:C 59.24,H 3.66,N 6.10;測量值:C 59.26,H 3.57,N 6.13。

(3E,5E)-N-甲基-3,5-二[3-(2-溴-3-羥基苯基亞甲基氨基)苯亞甲基]-4-哌啶酮(3i),產率為71%,熔點137～139 ℃,1H NMR(400 MHz,DMSO-d6,25 ℃,TMS,ppm):δ10.59(s,2H),8.86(s,2H),7.66(s,2H),7.61(d,J=7.5 Hz,2H),7.54(t,J=7.6 Hz,2H),7.42(d,J=7.5 Hz 2H),7.30(m,6H),7.14(d,J=7.8 Hz，2H),3.79(s,4H),2.41(s,3H)。13C NMR(100 MHz,DMSO-d6):δ192.2,160.6,154.6,151.7,135.8,135.1,134.4,134.2,129.8,128.7,128.3,122.7,121.9,119.1,118.8,113.7,56.4,45.3。IR(cm-1):3 085(br),1 666(w),1 602(s),1 565(s),1 460(m),1 425(m),1 298(s),1 218(s),1 182(s),1 026(m),940(m),918(m),889(m),826(m),785(m),687(s)。元素分析(%):C34H27Br2N3O3,理論值:C 59.58,H 3.97,N 6.13;測量值:C 59.63,H 3.94,N 6.15。

1.3 抗腫瘤活性測試

選用9種腫瘤細胞系：SGC-7901(胃癌細胞)、A549(肺癌細胞)、HCT116(結腸癌)、HeLa(宮頸癌細胞)、HePG2(肝癌細胞)、K562(人慢性骨髓性白血病細胞)、THP-1(人急性單核粒細胞白血病細胞)、U937(組織細胞淋巴瘤細胞)、MCF-7(乳腺癌細胞)。1種正常細胞株：LO2(人正常肝細胞)。采用MTT法進行活性測試：取1×104/100 μL的細胞，接種于96孔培養板中，于37 ℃、5%CO2下培養24 h，加入一定濃度梯度的合成化合物，繼續培養24 h。將96孔板中的溶液除去，加入已配制的MTT溶液200 μL (培養基∶MTT=9∶1，體積比)，37 ℃孵育4 h，棄上清液，加入150 μL DMSO 37 ℃搖床孵育10 min，用酶標儀測定其在570 nm處的吸光度，計算IC50。合成化合物及陽性對照DOX的濃度梯度為10、5、2.5、1.25、0.625、0.312 5、0.156 25、0.078、0.039、0.019 5 μg/mL。

1.4 分子對接模擬

3b、3i對接入Bcl-2(PDB:1YSW)蛋白結構。分子對接選用SYBYL-X 2.0軟件(Triops公司)的Surflex-Dock 模塊，所有對接操作在SYBYL-X 2.0藥物設計軟件中的Surflex-Dock程序下按默認值完成。配體小分子3b、3i均在Chem3D中形成3D構象，采用Tripos力場分子力學程序Minimize進行結構優化，負載Gasteiger-Hückel電荷，以Powl能量梯度法進行能量優化，優化后得到穩定構象[18]。通過PyMol和Ligplus分析兩者對接的結合方式和相互作用力。

圖2 3a-i的合成和結構Fig.2 Synthesis and structures of 3a-i

2 結果與討論

2.1 化學部分

本文以N-甲基-4-哌啶酮和3-硝基苯甲醛為原料，通過Claisen-Schmidt縮合反應得到N-甲基-3,5-二(3-硝基苯亞甲基)-4-哌啶酮中間體1；然后，用SnCl2/鹽酸還原得到N-甲基-3,5-二(3-氨基基苯亞甲基)-4-哌啶酮中間體2；最后，與一系列鹵代苯甲醛通過Schiff-Base縮合反應得到3a-i(圖2)，產率為64%～72%。中間體1和2的譜圖數據與文獻一致[16-17]。化合物3a-i利用NMR、IR、元素分析等手段進行結構表征，結果顯示其在DMSO、DMF、二氯甲烷、丙酮、甲醇、乙醇中有較好的溶解度，但幾乎不溶于水。

2.2 抗腫瘤活性分析

本文采用MTT法，評價藥物對SGC-7901、A549、HCT116、HeLa、HePG2、K562、THP-1、U937、MCF-7等細胞系的抗腫瘤活性及對LO2的細胞毒性。從表1得知，3a-i對上述9種腫瘤細胞均表現出顯著的抑制活性，部分化合物對某些細胞的IC50值小于1.0 μmol/L。3a-i對SGC-7901細胞的抑制活性明顯優于陽性對照藥DOX(阿霉素，IC50=7.37±0.59 μmol/L)，特別是具有雙F取代基的化合物3a和具有間Br取代基的化合物3g的IC50值僅為(2.25±0.37) μmol/L和(2.03±0.12) μmol/L，更有意義的是，3a對LO2的IC50值可達(12.53±0.94) μmol/L，比DOX的IC50值(10.32±0.92 μmol/L)略大。對于A549細胞，具有雙F取代基的化合物3a(1.33±0.05 μmol/L)和3b(1.46±0.30 μmol/L)的活性明顯優于其他化合物，且比DOX(3.83±0.16 μmol/L)的活性更好。對于HCT116細胞，化合物3b和3f的活性在這一系列化合物中最好，且活性優于DOX(10.87±2.53 μmol/L)；對于HeLa細胞，化合物的活性幾乎與DOX相當，其中具有雙F取代基的化合物3a-c活性優于其他化合物，特別是3c(1.75±0.16 μmol/L)的活性最好；對于HePG2細胞，除了3e的抑制活性較差外，IC50值達(7.14±0.46) μmol/L，其他化合物的抑制活性明顯優于DOX，并且化合物3i的活性最佳，IC50值僅為(1.09±0.18) μmol/L。對K562細胞，3a、3d、3f、3i的IC50值小于1.0 μmol/L，表現出較強的抑制活性。對THP-1細胞，3a、3b、3f、3i化合物表現出較強的抑制活性，其IC50值均小于1.0 μmol/L。其中具有雙F取代基的化合物3b的IC50值為(0.31±0.01) μmol/L，低于DOX。其它化合物對THP-1的抑制活性劣于DOX。對U937細胞，鄰-Br取代的化合物3h和3i的抑制活性較好，優于DOX；對MCF-7細胞，該類化合物的IC50值較大，抑制活性明顯次于DOX。對LO2的細胞毒性分析顯示，化合物3a，d-f的細胞毒性較小，它們的IC50值比DOX更大，并且細胞毒性明顯低于文獻報道的結構相似的化合物[16-17]。另外，對于化合物3g-i，化合物3i抑制腫瘤細胞的活性較好，這可能與化合物3i中的酚羥基具有潛在的抗氧化、清除活性自由基的作用密不可分。結構分析顯示，具有雙F取代基的化合物3a-c的抑制活性相對其他化合物好，說明氟取代對于雙Schiff-Base取代的3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮衍生物的抗腫瘤活性有利。

表1 抗腫瘤活性和細胞毒性Table 1 Antitumor activity and cytotoxicity

(續表1)

2.3 對Bcl-2及BAX表達的影響

抗凋亡因子Bcl-2和促凋亡因子BAX是引起細胞凋亡的重要基因，Bcl-2能夠阻止細胞色素c從線粒體釋放到細胞質，從而抑制細胞凋亡而導致腫瘤的產生，而BAX的過度表達可拮抗Bcl-2的保護效應而使細胞趨于死亡[19-20]。Anant等[21]研究發現，低劑量的EF24能有效抑制抗凋亡基因Bcl-xL和Bcl-2的表達，但不影響促進腫瘤細胞凋亡基因BAX的表達，從而導致Bcl-xL/BAX和Bcl-2/BAX的蛋白比例呈下降趨勢。如圖3所示，化合物3a-c和3i能有效降低Bcl-2的表達和升高BAX的表達。

圖3 qPCR檢測化合物3a-i對THP-1細胞中Bcl-2(A)和BAX(B)蛋白基因表達的影響，以及Western Blot驗證3a-c和3i對Bcl-2和BAX蛋白表達的影響Fig.3 Effect of compounds 3a-i on the expression level of resistance gene Bcl-2 (A) and BAX (B) detected by qPCR and Western Blot (C)the control is THP-1 untreated with any compounds(未用藥物處理的THP-1作為空白對照)

2.4 分子對接

Bcl-2蛋白是重要的抗腫瘤藥物作用靶點[19-20]，抑制劑與Bcl-2結合的重要驅動力分別是疏水作用力和氫鍵相互作用力(圖4中虛線所示)。P1、P2口袋是Bcl-2(PDB:1YSW)蛋白中活性腔內較大的兩個口袋，P3、P4是活性腔兩端較小的兩個口袋，而L1是一個相對較窄的P1和P2連接部位。如圖4A所示，化合物3b的兩個2,5-二氟苯亞氨基能與P1和P2口袋相吻合，而中心的3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮基團穿越L1連接部位，與Bcl-2蛋白上的ARG-143片段形成強的氫鍵(圖4B中虛線所示)，Pro-43等氨基酸殘基與化合物3b形成12個疏水鍵[22](圖4C中弧形鋸齒線所示)。而化合物3i因末端有酚羥基，與GLY-142形成穩定的氫鍵(圖4D和圖4E中虛線所示)，與Pro-42等氨基酸殘基形成10個疏水鍵(圖4F中弧形鋸齒線所示)，分子中心的3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮基團則與P1口袋結合，另一側的端基2-溴-3-羥基苯亞氨基基團則與P4口袋結合，從而表現出較好的抑制活性。

圖4 化合物3b (A、B、C)和3i (D、E、F)與Bcl-2(PDB:1YSW)蛋白的對接模型Fig.4 Molecular docking mode of compound 3b (A，B，C) and 3i (D，E，F) in the active site of Bcl-2 protein

3 結 論

本文合成了一系列雙Schiff-Base取代的3,5-二(芳亞甲基)-4-哌啶酮衍生物3a-i。此類化合物對SGC-7901、A549、HCT116、HeLa、HePG2、K562、THP-1、U937、MCF-7等腫瘤細胞顯示出顯著的抑制活性。部分化合物對某些細胞的IC50值小于1.0 μmol/L。另外，化合物3a、d-f對LO2的細胞毒性比DOX小。構效關系顯示，F取代的化合物3a-c活性優于Br和Cl取代的化合物3d-i。分子對接模型證實化合物3b和3i對Bcl-2蛋白有顯著的抑制作用。

參考文獻：

[1] Sun A，Lu Y J，Hu H，Shoji M，Liotta D C，Snyder J P.Bioorg.Med.Chem.Lett.，2009,19：6627-6631.

[2] Tan X，Sidell N，Mancini A，Huang R P，Wang S M，Horowitz I R，Liotta D C，Taylor R N，Wieser F.Reprod.Sci.，2010,17：931-940.

[3] Liu W S，Chen Q，Sun J F，Wang C H，Zhao F，Hou G G.J.Instrum.Anal.(劉文帥，陳琴，孫居鋒，王春華，趙峰，侯桂革.分析測試學報)，2015,34(8)：900-904.

[4] Wu J，Weng B，Qiu P，Cai Z，Fan L，Ying S，Zhang X，Wu X，Liang G.Chin.J.Org.Chem.，2014,34：1573-1581.

[5] Thomas S L，Zhong D，Zhou W，Malik S，Liotta D，Snyder J P，Hamel E，Giannakakou P.CellCycle.，2008,7：2409-2417.

[6] Kasinski A L，Du Y，Thomas S L，Zhao J，Sun S Y，Khuri F R，Wang C Y，Shoji M，Sun A，Snyder J P，Liotta D，Fu H.Mol.Pharmacol.,2008,74：654-661.

[7] Sun J F，Zhang S，Yu C，Hou G G，Zhang X F，Li K K，Zhao F.Chem.Biol.Drug.Des.，2014,83：392-400.

[8] Adams B K，Ferstl E M，Davis M C，Herold M，Kurtkaya S，Camalier R F，Hollingshead M G，Kaur G，Sausville E A，Rickles F R，Snyder J P，Liotta D C，Shoji M.Bioorg.Med.Chem.，2004,12：3871-3883.

[9] Yadva V，Vilekar P，Awasthi S，Awasthi V.ArtificialOrgans.，2014,38：675-683.

[10] Das U，Sakagami H，Chu Q，Wang Q，Kawase M，Selvakumar P，Sharma R K，Dimmock J R.Bioorg.Med.Chem.Lett.，2010,20：912-917.

[11] Lagisetty P，Vilekar P，Sahoo K，Anant S，Awasthi V.Bioorg.Med.Chem.，2010,18：6109-6120.

[12] Zhu H P，Xu T T，Qiu C Y，Wu B B，Zhang Y L，Chen L F，Xia Q Q，Li C L，Zhou B，Liu Z G，Liang G.Eur.J.Med.Chem.，2016,121：181-193.

[13] Liu L D，Liu S L，Liu Z X，Hou G G.J.Mol.Struct.，2016,1112:1-8.

[14] Sun J F，Hou G G，Zhao F，Cong W，Li H J，Liu W S，Wang C H.Chem.Biol.Drug.Des.，2016,88：534-541.

[15] Sun J F，Wang S W，Li H J，Jiang W G，Hou G G，Zhao F，Cong W.J.EnzymeInhib.Med.Chem.，2016,31：495-502.

[16] Chen Q，Hou Y，Hou G G，Li N，Cong W，Zhao F，Li H J，Wang C H，Sun J F.J.Chem.Res.，2016,40：400-403.

[17] Chen Q，Hou Y，Hou G G，Sun J F，Li N，Cong W，Zhao F，Li H J，Wang C H.Res.Chem.Intermediat.，2016,42：8119-8130.

[18] Jain A N.J.Med.Chem.,2003，46(4)：499-511.

[19] Wan Y，Wu S，Xiao G，Liu T，Hou X，Chen C，Guan P，Yang X，Fang H.Bioorg.Med.Chem.，2015,23：1994-2003.

[20] Adams J M，Cory S.Science，1998，281：1322-1326.

[21] Subramaniam D，May R，Sureban S M，Lee K B，George R，Kuppusamy P，Ramanujam R P，Hideg K，Dieckgraefe B K，Houchen C W，Anant S.CancerRes.，2008,68：1962-1969.

[22] Cheng G，Zhang G C，Ma L，Tian S X，Zhang X Y.J.HunanAgric.Univ.(程功，張國財，馬玲，田樹新，張星耀.湖南農業大學學報)，2016,42(3)：262-267.