2012—2016年郴州市無償獻血人群HIV抗體不確定結果的分析

曾永會，黎俊宏

近年來，艾滋病的檢測技術和檢測策略不斷改進和更新，尤其是血站及血漿站已廣泛采用了第四代檢測試劑，同時檢測HIV抗體和p24抗原，其檢測敏感性大大提高，隨之而來的是HIV篩查假陽性率不斷上升。對于HIV抗體篩查（包括初篩和復檢）陽性的標本，須進行HIV確證實驗方能進行最后的艾滋病確診。本文旨在通過對不確定結果的帶型特點分析，并結合隨訪結果，探討獻血人群中HIV抗體不確定的血清學特點及不確定結果的診斷策略，便于及時準確篩查出HIV陽性獻血者，確保用血安全。

1 材料與方法

1.1 標本來源 樣本為2012年1月1日—2016年12月31日間斷收到的郴州市中心血站HIV抗體篩查（包括初篩和復檢）陽性的233例標本，接收后標本在-20 ℃條件下保存，5個工作日內完成確證檢測。

1.2 儀器與試劑 篩查實驗主要儀器為酶標儀伯樂680（美國BIO-RAD）；確證實驗主要儀器為AutoBlot System20全自動蛋白印跡儀（新加坡MP生物醫學亞太私人有限公司）。篩查實驗共用到3種試劑，分別為英科新創（廈門）科技有限公司的人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法），北京萬泰生物藥業有限公司的人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）和BIO-RAD公司的人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）。確證試劑為新加坡MP生物醫學亞太私人有限公司的人類免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗體檢測試劑盒[免疫印跡法（western blotting,WB）]。《全國艾滋病檢測技術規范（2015年修訂版）》[1]要求篩查和確證試劑必須經食品藥品監督總局注冊、批準，在有效期內使用，本研究涉及到的試劑均符合此要求。

1.3 結果判定 篩查實驗結果判定：英科新創試劑，臨界值（cut off,CO）=陰性對照平均值+0.10，樣本值＜CO為HIV抗體和HIV p24抗原陰性，樣本值≥CO為HIV抗體或HIV p24抗原陽性；北京萬泰試劑，CO=陰性對照平均值+0.12，樣本值＜CO為HIV抗體和HIV p24抗原陰性，樣本值≥CO為HIV抗體或HIV p24抗原陽性；BIO-RAD試劑檢驗結果判定，CO=陰性對照平均值+0.20，樣本值＜CO為HIV抗體和HIV p24抗原陰性，樣本值≥CO為HIV抗體或HIV p24抗原陽性。確證實驗結果判定：檢測出2條 ENV（gp160/gp41和 gp120） 及 GAG（p17、p24、p55）或 POL（p31、p51、p66）結果判定為陽性。例如①gp160+gp120+任意一條GAG或POL；②gp41+gp120+任意一條GAG或POL，出現①或者②中的任意一種情況，結果即可判定為陽性。若所有的檢測結果只出現任何1條特異性條帶，為HIV不確定標本。

1.4 隨訪 按照《全國艾滋病檢測技術規范（2015年修訂版）》[1]的要求，對不確定結果的標本結合流行病學資料，在4周后對該人員隨訪，再次進行初篩、復檢和確證實驗，如帶型沒有進展或呈陰性反應，則報告陰性；如帶型有進展且達到陽性判斷標準，則報告陽性。

1.5 統計學處理 采用SPSS 16.0軟件進行統計分析，用描述性統計方法描述相關的頻數和率。

2 結 果

2.1 確證結果 分析233例不同年份的初篩、復檢雙陽性并經WB檢測確證的獻血者標本（表1）。結果顯示，233例初篩、復檢雙陽性標本并經WB確證實驗后共檢出HIV抗體陽性標本43例（18.45%），陰性標本107例（45.92%），不確定標本83例（35.62%）。不確定標本共出現9種帶型，排前3位的帶型分別為：p24 53例（63.86%）；p17 11例（13.25%）；p24和p17 10例（12.05%），見表2、圖1。對其中11例完成了隨訪，結果2例p24，1例p24和gp160以及1例p24和p66發生了陽轉，其余7例條帶無進展。

表1 2012—2016年獻血者篩查陽性標本經WB確證實驗結果[例（%）]Table 1 The confirmed results of screening positive specimens in voluntary blood donors by WB confirmatory from 2012 to 2016 test [cases(%)]

表2 WB確證實驗不確定標本WB帶型[例（%）]Table 2 WB belt types of indeterminate specimens by WB confirmatory test [cases(%)]

圖1 不確定標本WB帶型由上之下條帶依次為：p17；p24；p17和p24；p66；p24和gp160；gp160；p24和gp120；p24和gp41；p24和p66Figure 1 WB belt types of indeterminate specimens

2.2 性別分布 83例HIV抗體不確定標本中，男54例，占65.06%；女29例，占34.94%。見表3。

2.3 年齡分布 將83例HIV抗體不確定標本的年齡分為＜20、20～39、40～59歲組，其中20～39歲組出現HIV抗體不確定結果最多，40～59歲組次之，＜20歲組最少；20～39歲組和40～59歲組均以p24帶型最為常見，見表4。

表3 不確定標本性別分布（例）Table 3 Gender distributions of indetermination specimens(cases)

表 4 WB帶型在不同年齡患者中的分布[例（%）]Table 4 The distributions of WB belt types in patients of different age groups[cases(%)]

3 討 論

我國實施無償獻血政策已近20年，隨著臨床用血需求越來越大，血液制品安全問題也成為大家關心的熱點話題。如何保證臨床用血需求，同時也保證用血安全，是整個社會急需解決的問題。隨著無償獻血政策的深入宣傳，獻血人群也在不斷的變化，出現了有人把無償獻血當成了免費體檢的情況，甚至有不少獻血者在有了高危性行為之后就去獻血，這給臨床安全用血留下了巨大的隱患[2-3]。目前，國內血站大部分是采用第四代檢測試劑同時檢測抗原、抗體，大大提高了實驗的敏感性。

本文分析了2012—2016年郴州市血站不同年份的獻血者篩查陽性并經WB確證實驗后結果不確定標本，標本均在收樣后5個工作日內完成WB確證實驗，排除了因凍存標本隨著時間的增加抗體蛋白會降解的問題。確證實驗結果顯示，篩查陽性標本確證陽性率較低，大多數為陰性，這與湖南省內的情況相符[4]；而不確定數較高，有83例，不確定率達35.62%，高于國內其他地區[5-6]，該結果可能與本市處于我國毒品交易的危險三角區，為保證用血安全將本市血站HIV抗體篩查檢測敏感性的提高有關；HIV抗體不確定標本以20～39歲年齡組為主，40～59歲年齡組次之，可能與該年齡組性活躍特征有關[7]。83例不確定標本共出現了9種帶型，排前3位的帶型分別是：p24共53例，占63.86%；p17共11例，占13.25%；p17和p24共10例，占12.05%。對其中11例在4周后完成了隨訪（因隨訪無法強制進行檢測，告之后有的獻血者不參加檢測，有的獻血者聯系方式不準確，無法告之，造成隨訪率低），7例p24有2例隨訪陽性；1例p24和p66隨訪陽性；1例p24和gp160隨訪陽性；1例p17和1例p66隨訪陰性。隨訪結果顯示，p24帶型是HIV陽轉的危險因素：p24出現組合帶型隨訪陽轉率較高，p24單一帶型則有陽轉的可能。

本市獻血人群HIV抗體不確定的原因可能為：血站未嚴格按照初篩檢測試劑說明書判斷結果，人為設計了實驗灰區，導致初篩應判為陰性的標本判作陽性；血站為了用血安全，初篩多采用高敏感試劑，而高敏感試劑會增加假陽性結果的概率；獻血人群復雜，存在高危行為獻血者把獻血當成免費體檢的情況，如其處于艾滋病感染窗口期，實驗室結果有可能為不確定。綜上所述，為及時準確的檢測出HIV陽性獻血者，建議采取以下措施：嚴格按照初篩檢測試劑說明書判斷結果，確保初篩結果準確可靠；有條件的血站開展核酸檢測，以核酸檢測結果為最終初篩結果；對獻血者做好宣傳，告之艾滋病感染者獻血對臨床用血的危害；對于HIV抗體不確定結果的獻血者，血站有義務在2～4周后對其進行隨訪，盡早確診。

【參考文獻】

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