宮頸菌群結(jié)構(gòu)、免疫微環(huán)境在宮頸癌篩選中的臨床價(jià)值研究

楊 凡 鄭飛云

(溫州醫(yī)科大學(xué) 溫州 325035)

目前臨床上發(fā)病率排名第二的婦科惡性腫瘤是宮頸癌，它對女性的健康和生活造成了嚴(yán)重的威脅[1～2]。由于很多因素的持續(xù)不良刺激，引發(fā)了宮頸癌的產(chǎn)生，但目前宮頸癌的發(fā)病機(jī)制還沒有確切的研究[3]。流行病學(xué)調(diào)查研究表明女性的不健康行為、早育早婚、早產(chǎn)多產(chǎn)、人乳頭瘤病毒感染以及吸煙等因素都有可能是引發(fā)女性患宮頸癌的因素[4]。另外，陰道的微環(huán)境失調(diào)、激活的細(xì)胞癌基因、異常的細(xì)胞因子及被抑制的抑癌基因功能等和宮頸癌的發(fā)病具有直接的關(guān)系。目前有研究人員的研究結(jié)果已經(jīng)證實(shí)宮頸腸道菌群結(jié)構(gòu)以及免疫微環(huán)境改變與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展具有密切的關(guān)系[5]。隨著研究人員對宮頸癌的進(jìn)一步研究，腸道菌群結(jié)構(gòu)以及免疫微環(huán)境改變對宮頸癌的病情評估、診治以及預(yù)后等方面的探索將會出現(xiàn)很大的進(jìn)展[6]。本研究通過對宮頸微環(huán)境、腸道菌群結(jié)構(gòu)變化及CD4水平進(jìn)行檢測，從宮頸微環(huán)境及免疫方向?qū)ζ渑c宮頸癌之間的關(guān)系進(jìn)行聯(lián)合分析，為宮頸癌的診斷、評估及預(yù)后進(jìn)行進(jìn)一步探索，為探尋宮頸癌分子靶向治療提供可靠的理論依據(jù)。

1 研究對象

選取2013年5月～2017年5月在我院婦科門診進(jìn)行診治的50例宮頸癌患者為試驗(yàn)組,另外對照組選取50例正常婦女,都進(jìn)行問卷調(diào)查并進(jìn)行標(biāo)本的采集。檢測標(biāo)本選取病人的陰道分泌物、宮頸脫落細(xì)胞及陰道灌洗液。在檢測前 2d內(nèi),病人不能進(jìn)行陰道放藥或者灌洗，也不可以有性生活,檢查時(shí)陰道沒有出血,沒有懷孕、內(nèi)外科或者其他免疫疾病，最近一個(gè)月也沒有進(jìn)行過特殊藥物或者食物的服用。

2 方法

2.1 問卷調(diào)查

按照研究課題對調(diào)查表進(jìn)行合理的設(shè)計(jì)，采取面對面問卷的方法，并對病人進(jìn)行查體。

2.2 標(biāo)本采集

所有病人在取材前都進(jìn)行了知情同意書的簽署。病人取膀胱截石位,并采取窺陰器使宮頸口暴露,采取無菌棉拭子擦拭后，取得少量分泌物。然后采用專用宮頸刷在宮頸鱗-柱狀上皮移行處以及后穹窿處對細(xì)胞和分泌物進(jìn)行刷取,盡快保存，然后立即到病理科和檢驗(yàn)科進(jìn)行檢測。

2.3 宮頸菌群檢測

將安圖生物陰道炎五聯(lián)檢試劑盒取出，在試管中加入適量聯(lián)檢稀釋液,然后在試管中進(jìn)行充分浸泡，對陰道分泌物進(jìn)行刷洗,然后對液體擠干,使分泌物完全在稀釋液中溶解,將拭子棄去不用,最終得到樣本液。 將已去掉板貼的聯(lián)檢卡準(zhǔn)備好,在每個(gè)孔中添加一滴樣本液,然后在“第3孔”中再滴入1滴“聯(lián)檢顯色液”，輕輕振蕩聯(lián)檢卡,然后進(jìn)行分析。

2.4 CD4測定

所有病人進(jìn)行宮頸錐切術(shù)前抽靜脈血2mL，EDTA抗凝。正常對照者在體檢時(shí)抽血。將樣品測定管中添加抗凝血，F(xiàn)ITC.抗CD4抗體，10gL、APC，抗CD25抗體、PE一抗CDl27抗體,將其振蕩混勻,避光反應(yīng)20min，添加1mL溶血素振蕩混勻，避光反應(yīng)10min,離心后舍棄上清液，添加PBS進(jìn)行離心洗滌，所得細(xì)胞添加PBS混勻后進(jìn)行流式細(xì)胞儀測定。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 兩組患者宮頸微環(huán)境比較

對兩組患者的宮頸微環(huán)境中的pH值以及白細(xì)胞分度進(jìn)行比較，結(jié)果表明試驗(yàn)組pH值以及白細(xì)胞分度均與對照比相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者宮頸微環(huán)境比較

陰道微環(huán)境狀況試驗(yàn)組對照組χ2值P值pH>4．63315≤4．627358．3270．0006白細(xì)胞3～4度3571～2度154311．4820．0004

3.2 兩組患者宮頸菌群結(jié)構(gòu)比較

對兩組患者宮頸菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較，試驗(yàn)組患者與對照組相比，陰道乳桿菌數(shù)量明顯增加,其余各菌數(shù)量都呈現(xiàn)出下降趨勢，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組患者宮頸菌群結(jié)構(gòu)比較

3.3 兩組患者Treg細(xì)胞占外周血CD4+T細(xì)胞的比例比較

對兩組患者Treg細(xì)胞占外周血CD4+T細(xì)胞的比例進(jìn)行比較，試驗(yàn)組患者和正常對照者中Treg細(xì)胞占外周血CD4+T細(xì)胞的比例分別為(11.79±2.81)和(7.72±1.17)，試驗(yàn)組患者Treg細(xì)胞占外周血CD4+T細(xì)胞的比例明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患者Treg細(xì)胞占外周血CD4+T細(xì)胞的比例比較

指標(biāo)例數(shù)(n)Treg(%)試驗(yàn)組5011．79±2．81對照組507．72±1．17χ2值-9．455P值-0．0009

4 討論

宮頸癌在關(guān)于女性惡性腫瘤疾病中發(fā)病率為第二位，且關(guān)于宮頸癌死亡率較高，對女性身體健康造成嚴(yán)重威脅[7]。宮頸癌的發(fā)生主要由許多不良原因以及很多致病機(jī)制一同引發(fā)。有研究結(jié)果表明人群高易感性、不良行為以及生物學(xué)因素等均會提高患宮頸癌的概率[8]。宮頸微生態(tài)體系的組成部分是陰道菌群、陰道解剖結(jié)構(gòu)、局部免疫以及機(jī)體的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)[9]。在正常情況下主要優(yōu)勢菌為乳酸桿菌，很多不良因素對菌群的動(dòng)態(tài)平衡造成了破壞，引發(fā)宮頸菌群失去平衡，乳桿菌作為優(yōu)勢菌被大量抑制，對其余的微生物產(chǎn)生的抑制力也會降低，從而導(dǎo)致病原微生物出現(xiàn)大量增殖，變?yōu)楫惓５膬?yōu)勢菌，從而引發(fā)宮頸微生態(tài)失去平衡。宮頸癌婦女宮頸菌群的主要特征是較正常婦女的宮頸菌群的菌種及數(shù)量都大量變少，尤其是優(yōu)勢菌乳酸桿菌數(shù)目出現(xiàn)降低或缺失[10]。本試驗(yàn)測得宮頸癌患者部分陰道菌群的結(jié)果與上述報(bào)道相一致。本研究發(fā)現(xiàn) pH值升高、乳酸桿菌量減少、白細(xì)胞增多與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展具有直接的關(guān)系。最近幾年越來越多的研究人員的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)自身免疫性疾病、腫瘤、感染性疾病的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后與Th1向Th2的漂移具有密切關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者Treg細(xì)胞占外周血CD4+T細(xì)胞的比例明顯高于正常婦女，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與文獻(xiàn)報(bào)道相一致。

綜上所述，宮頸菌群紊亂使宮頸局部免疫功能受到抑制，從而使Treg細(xì)胞占外周血CD4+T細(xì)胞的比例升高，導(dǎo)致宮頸局部免疫功能降低，但其在宮頸癌形成后的進(jìn)展過程中的作用及與預(yù)后的相關(guān)性還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

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