正交實驗優選中藥復方養陰生肌婦炎栓的提取工藝*

郭 敏 ，徐思雨，顧萬紅，古秋莉△

1甘肅省中醫藥研究院，甘肅 蘭州 730050；2甘肅省中醫院

中藥復方養陰生肌婦炎栓以甘肅省中醫院院內制劑養陰生肌散(甘藥制字Z04000835)處方為依據，通過提取工藝研究，溶媒篩選，基質配比研究及制劑工藝考察，研制出便利、高效的用于治療宮頸炎、陰道炎等婦科疾病的養陰生肌婦炎栓劑[1]。

養陰生肌婦炎栓主要由黃柏、龍膽草、雄黃、青黛等藥物組成，龍膽草作為處方中不可缺少的組成部分，具有清熱燥濕，瀉肝膽火的功效，龍膽苦苷性質穩定，為其中的指標成分，故選擇龍膽苦苷在混合提取物中的含量為考察指標，采用正交實驗法，優選中藥復方養陰生肌婦炎栓的最佳提取工藝[2-4]。

1 材料

1.1 儀器 美國Waters高效液相色譜儀(包括：Waters 2487紫外檢測器；Waters 1525自動進樣器)；旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；電子分析天平(上海天平儀器廠)；超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(上海醫療器械五廠)。

1.2 試藥 龍膽苦苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號：11070-200510)；甲醇、乙腈為色譜純；水為重蒸水；所用其他試劑均為分析醇。實驗所用藥材由甘肅省中醫院藥學部提供。

2 方法與結果

2.1 龍膽苦苷的含量測定[5-8]

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6 mm)；流動相：水 - 乙腈(80∶20)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；進樣量：10 μL；柱溫：25.0℃；外標法。理論塔板數按龍膽苦苷標準品計算不得低于3 500。

2.1.2 溶液的制備

2.1.2.1 對照品溶液的制備 取在五氧化二磷減壓干燥器中放置24小時的龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，用甲醇配制成濃度為0.8 μg/mL的對照品溶液。

2.1.2.2 供試品溶液的制備 取約1.0g提取所得浸膏，精密稱定，置50 mL燒杯中，加甲醇適量，超聲10分鐘，放冷至室溫，過濾至25 mL的容量瓶中，再用甲醇定容至刻度，搖勻。取8 mL移至25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.1.3 測定方法 精密吸取對照品與供試品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，得到色譜峰面積，根據外標一點法，計算樣品中龍膽苦苷的含量，色譜圖見圖1。

圖1 龍膽苦苷含量測定HPLC色譜圖

2.2 正交實驗設計

2.2.1 因素水平確定 采用正交實驗法對提取工藝進行優選，根據文獻報道[2-4]，以提取時間(A)、乙醇濃度(B)、溶劑容量(C)為試驗因素，每個因素設計3個水平，應用L9(34)正交表安排實驗，見表1。

表1 提取方法因素水平

2.2.2 正交實驗 正交實驗結果見表2。

表2 正交實驗結果

2.2.3 方差分析 方差分析結果見表3。

表3 方差分析結果

由表2—3可知，以浸膏得率為考察指標，最佳提取條件為A3B3C1；以龍膽苦苷含量為考察指標，最佳提取條件為A3B2C2。綜合各提取條件，同時考慮到實際操作的簡單易行，確定最佳提取工藝為乙醇濃度為80%，提取時間為5小時，溶劑量為8倍量。

2.3 正交實驗結果驗證 根據處方配比，取3批組方藥材，按上述所選最佳提取工藝，分別測定出膏率及龍膽苦苷的含量，結果表明該工藝達到了提取條件優化的目的，見表4。

表4 正交實驗結果驗證

3 討論

養陰生肌散由我院中醫專家根據古方和臨床實踐配伍而成，在臨床使用20余年，療效確切。由于劑型上的缺陷限制了臨床需要，而其制備工藝簡單又無質量標準，因此不符合相關法律法規的要求，需要按國家新藥申報的要求對其進行科學系統地二次開發。

索氏提取時溶劑的量對提取效果影響不大，考慮到實際生產成本，我們選擇溶劑量以8倍量代替10倍量，而且各味藥的提取效果均無明顯改變。

[1]李喜香，劉效栓，張小華，等.養陰生肌散急性毒性及全身過敏性實驗研究[J].西部中醫藥，2014，27(1)：29-31.

[2]陳長勛，劉占文，孫崢嶸，等.龍膽苦苷抗炎藥理作用研究[J].中草藥，2003，34(9)：814-816.

[3]王北嬰，李儀奎.中藥新藥研制開發技術與方法[M].上海：上海科學技術出版社，2001：788-808.

[4]趙瑞芝，梁偉杰，丘小惠.龍膽藥材中龍膽苦苷的提取工藝研究[J].中國藥房，2005，16(12)：956-957.

[5]趙冰璐，姜連閣，趙亞芹.薄層掃描法測定龍膽中龍膽苦苷的含量[J].中醫藥信息，2000，17(3)：69.

[6]陳二林，黃艷輝，劉效栓，等.養陰生肌散中龍膽苦苷的HPLC測定[J].西部中醫藥，2013，26(10)：24-26.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：96.

[8]趙昱瑋，于淼，司學玲，等.炎熱清片中龍膽苦苷的薄層鑒別及含量測定[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19(3)：118-120.