卡托普利-地高辛緩速釋雙層片的初步藥動學研究

馬曉星，徐 濤

(齊齊哈爾醫學院 藥學院, 黑龍江 齊齊哈爾 161006)

卡托普利(captopril，CAP)是血管緊張素轉換酶抑制劑, 通過阻斷血管緊張素I轉變成具有高活性的血管緊張素Ⅱ，從而使血管緊張素Ⅱ的水平降低,起到擴張周圍血管、減輕鈉水儲留、保鉀保鎂作用,減輕心臟后負荷,增加心臟排出量,營養心肌。地高辛(digoxin，DIG)是治療心衰的正性肌力藥,通過增加心肌細胞內Ca2+，增強心肌收縮力，興奮迷走神經，減慢房室結的傳導，減慢心率。文獻報道，臨床上使用卡托普利與地高辛聯合治療充血性心力衰竭，口服地高辛達后，加服卡托普利，地高辛可使心室容積及張力下降，不增加或降低總耗氧量，但地高辛不減輕前后負荷。而卡托普利能改善充血性心力衰竭患者的心臟功能，通過降低血漿血管緊張素Ⅱ和醛固酮水平而使心臟前后負荷減輕，二者聯合用藥比單用一種療效更佳，作用加強，病程減短，是治療心衰的首選藥物[1-3]。卡托普利半衰期短，給藥頻繁，從而帶來臨床用藥的不方便性。國外已有CAP緩釋膠囊上市，國內上市的有卡托普利緩釋片。地高辛起效慢，為提高地高辛在其安全范圍內的釋藥速度，快速達到有效血藥濃度，有報道將其制成分散片[4-5]。為此，根據臨床用藥特點及藥物性質，本項目研制卡托普利-地高辛緩速釋雙層片，既能體現聯合用藥的優勢，提高療效，又能減少患者服藥次數，提高其順應性。

1 材料

1.1 藥品與試劑

地高辛(武漢拉那白醫藥化工有限公司，批號：130405)；卡托普利(武漢拉那白醫藥化工有限公司，批號：130513)；卡托普利緩釋片(上海凱寶藥業股份有限公司，批號：111003)；地高辛(上海信誼藥廠有限公司生產,批號：20140206)；甲醇(色譜純，天津市福晨化學試劑廠)；乙腈(色譜純，天津市光復精細化工研究所)。

1.2 實驗動物

10只家兔(雄性)，體重平均 2.5 kg，購于遼寧醫學院實驗研究中心，動物實驗許可證號：SYXK(遼)2014-0005。

1.3 儀器

集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(DF-101S，河南省于華儀器有限公司)；真空干燥箱(DZF6050，上海博遠實業有限公司)；溶出度測定儀(RC-6，天津市光學儀器廠)；單沖壓片機(TDP，上海第一制藥機械廠)；高效液相色譜儀(D-1200，廣州菲羅門科學儀器有限公司)；臺式高速離心機(TG22-WS，上海趙迪生物科技有限公司)；超聲清洗儀(KQ-250DE，昆山市超聲儀器有限公司)

2 方法與結果

2.1 卡托普利-地高辛緩速釋雙層片的制備

根據國內外文獻報道，臨床觀察顯示[2-3，6]：口服地高辛，每日1次，加服卡托普利，每日3次，每次12.5mg，確定雙層片劑量:每片含卡托普利37.5mg，地高辛0.25mg。

卡托普利緩釋層處方：卡托普利3.75g，HPMC 14g，MCC 7.3g，硬脂酸鎂0.2g，7%淀粉漿適量，制成100片。緩釋層制備工藝：稱取上述處方量原料藥和輔料混勻，加淀粉漿制軟材，過16目篩制粒，50℃干燥，18目篩整粒，加硬脂酸鎂0.2g混勻。

地高辛速釋層處方：載藥顆粒9.6g，L-HPC4.5g，硬脂酸鎂0.15g，制成100片。速釋層制備工藝：稱取地高辛0.3g，溶于400ml75%乙醇中，噴于100g空白顆粒，得載藥顆粒，取載藥顆粒10g與L-HPC、硬脂酸鎂混勻。壓制過程：先預壓卡托普利緩釋層，再填加速釋層。

2.2 家兔體內初步藥動學研究

2.2.1 色譜條件[7-8]

卡托普利：色譜柱：Agilent C18(250mm×4.6mm，5μm)。流動相：乙腈-1%醋酸(45：55)，流速1.0ml·min-1。檢測波長：257nm。柱溫：38℃。

地高辛：Agilent C18(250mm×4.6mm，5μm)。流動相：甲醇-水( 60：40)。流速：1.0ml·min-1。檢測波長：220nm。柱溫：室溫。

2.2.2 血漿樣品的處理

卡托普利：取500ul血漿, 加30ul呋塞米，加50 ulNaOH (0.1mol·L-1)旋渦混合30s, 室溫避光放置30min后, 加100μl1mol·L-1HCl溶液, 再加pH4.0緩沖液150μl混合15s, 加2.5ml萃取液(乙酸乙酯-苯=1:1), 旋渦2min,離心(2000r·min-1，10min)，取有機相，40℃氮氣吹干, 殘渣用50μl流動相溶解后進樣20μl。

地高辛：取血漿500μl，加呋塞米50μl，混合均勻，加1 mol·L-1硫酸溶液100μl，然后加提取液2ml(丙醇：氯仿=1：5)，旋渦振蕩5min，置離心機中，3000r·min-1離心，待分層后，吸取下清液，移至試管中；樣品再加提取液2ml，重復萃取一次，合并萃取液，置37℃水浴氮氣吹干，殘渣用100μl流動相溶解，取20μl進樣。

2.2.3 方法學研究

2.2.3.1 標準曲線的制備

卡托普利標準曲線：取空白血漿500 ul，加入30 μl濃度為6.25，12.5，25，50，100，200，400ug·ml-1的標準溶液，進行血樣處理，以卡托普利濃度(C)為橫坐標，卡托普利峰面積與內標物峰面積比值為縱坐標，加權最小二乘法(W=1/X2)進行回歸，得回歸方程A=0.00099C+0.00658(r=0.9990)。結果表明，血漿中卡托普利濃度在5～400ng·ml-1范圍內線性良好。

地高辛標準曲線：取空白血漿500ul，加入10μl濃度為0.49，0.97，1.23，2.43，3.64，4.7，9.1ng·ml-1的標準溶液，進行血樣處理，以地高辛濃度(C)為橫坐標，地高辛峰面積與內標物峰面積比值為縱坐標，加權最小二乘法進行回歸，得回歸方程A=0.0462C-0.00556(r=0.9990)。結果表明，血漿中地高辛濃度在0.4～10ng·ml-1范圍內線性良好。

2.2.3.2 方法專屬性考察

對空白血漿、空白血漿加內標和對照品、給藥后血漿進行專屬性試驗，結果見圖2、圖3，表明血漿中雜質不影響藥物和內標物的測定。

圖2 空白血漿(A)，空白血漿加卡托普利和呋塞米(B)，給藥后含藥血漿(C)的HPLC色譜圖

圖3 空白血漿(A)，空白血漿加地高辛和呋塞米(B)，給藥后含藥血漿(C)的HPLC色譜圖

2.2.3.3 精密度試驗

分別配制4，100，400ug/ml的卡托普利標準血樣和0.5，2，10ng/ml的地高辛標準血樣，每個濃度制備并測定5個樣品，3d連續制備并測定3批。計算卡托普利批內及批間精密度RSD分別為0.71%，0.93%，0.35%和1.05%，1.14%，0.81%；地高辛批內及批間精密度RSD分別為1.18%，0.58%，0.39%和1.13%，0.99%，1.01%，符合測定要求。

2.2.3.4 回收率

分別配制4、100、400ug/ml卡托普利標準血樣和0.5、2、10 ng/ml地高辛標準血樣，每個濃度制備并測定5個樣品，3d連續制備并測定3批。同時，另取空白血500μl，不加內標溶液，處理血樣分析。考察樣品及其內標的回收率。卡托普利3個濃度的回收率分別為93.72%，95.01%，94.76%；地高辛3個濃度的回收率分別為90.26%，95.19%，92.88%，符合測定要求。

2.2.3.5 樣品穩定性

配制 4，100，400ug/ml卡托普利標準血樣和0.5，2，10 ng/ml地高辛標準血樣，分別室溫放置1，3，5d，處理血樣，進樣測定。結果卡托普利和地高辛RSD均小于2%(n=3)，表明血漿樣品在上述條件下均穩定。

2.2.4 給藥方案與血樣采集

取10只家兔，體重平均2.5 kg，給藥前禁食，4h后可進食，自由飲水。隨機分成兩組，每組5只，一組給卡托普利和地高辛市售片，一組給卡托普利-地高辛緩速釋雙層片。

給藥后于20、45、60、120、240、360、480、600、720、1440、2160、2880min耳緣靜脈取血2ml，置于含有肝素的離心管中。離心(3000r·min-1,8 min)，取血漿于-20℃冰箱中保存待測。將待測血樣按照“2.2.1”項下HPLC法計算血漿中地高辛及卡托普利含量，繪制血藥濃度-時間曲線，見圖4、圖5，同時利用PKSolver 2.0軟件計算出藥動學參數，見表1、表2。

圖4 卡托普利血藥濃度-時間曲線圖

圖5 地高辛血藥濃度-時間曲線圖

ParameterUnit地高辛市售地高辛自制t1/2min1828.80±0.56344.43±0.94Tmaxmin60.00±1.9160.00±0.42Cmaxng/ml635.39±0.341285.60±9.26AUC0-tng/ml?min111143.67±9.62417024.70±4.19AUC0-inf＿obsng/ml?min114634.89±23.25418284.22±44.89

表2 自制制劑與市售制劑中卡托普利在家兔體內的部分藥動學參數

結果顯示，自制片中卡托普利和地高辛的AUC(0-∞)、Tmax、Cmax與市售片比較均有一定程度的增加；計算得相對生物利用度分別為(152.45±9.11) %和(375.21±13.11)% (相對生物利用度=AUC自制/AUC市售×100%)；相對于市售片，自制片顯著提高了藥物口服生物利用度，二者具有一定的協同作用。

3 討論

緩速釋雙層片的制備，采用濕法制粒壓片制備卡托普利緩釋層，釋放度測定具有一定的緩釋作用；空白顆粒法制備地高辛速釋層，地高辛快速溶出；壓制過程中，先預壓卡托普利緩釋層，再填加速釋層，最后加入少量乳糖，制得的雙層片完整，光澤度好，兩層不宜裂開，且硬度符合要求。

本實驗建立了HPLC法測定家兔血漿中地高辛和卡托普利濃度，方法學研究結果表明，該方法準確、可靠、簡便，能夠滿足藥動學研究要求。

通過家兔體內的藥動學初步研究證實卡托普利-地高辛緩速釋雙層片中兩種藥物的AUC(0-∞)、Tmax、Cmax均呈現一定程度的增加，且卡托普利具有緩釋作用；相對生物利用度與市售制劑比較也都有所提高，二者產生了一定的協同作用，這種協同作用的產生與臨床上對于二者聯合應用的文獻報道相一致[9-11]，因此，考慮復方制劑可適當減少用藥劑量，具體應再進一步進行組方篩選，但產生這種協同作用的機制有待進一步研究，以更好地為臨床合理用藥提供理論依據。

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