微生物實驗室生物安全規范

吳鋒，王博，趙亮，蒲春文

為提高學校實驗室處理微生物（包括原生動物、真菌、浮游生物、細胞依賴性細菌和病毒）和轉基因生物的生物安全性，保障相關工作人員掌握開展工作必需的知識，避免實驗室感染，防止實驗室事故，特制定此規范。

1 學校管理者責任

學校管理者應向員工提供實驗室安全手冊，使其認識到學校微生物實驗室的特殊危害。在實施風險評估和明確所有的危險可控之前，不允許對相關的生物進行教學或操作。

學校應至少有一名工作人員作為生物安全委員會委員，主要職責有：①對實驗室安全設備的使用提出建議；②協調和制定實驗室安全計劃；③明確學校實驗室安全手冊中包含實驗室實施工作安全程序的章節；④調查實驗室生物安全事故；⑤確保新員工在入職時得到清晰的安全說明；⑥培訓和指導員工學習安全規程和消毒操作。

2 實驗室管理者責任

實驗室管理者必須確保安全程序的制定并付諸實施，具體如下：①完成員工初期和繼續教育培訓計劃；②告知全體員工微生物職業暴露的潛在風險；③確保為實驗室用戶提供個人防護裝備；④向基因技術管理辦公室（OGTR）報告涉及轉基因生物的重組 DNA 事件；⑤在清潔教學實驗室和準備區域時，應向清潔公司做出必要的說明。

3 個人責任

所有的實驗室工作必須在認為對實驗室人員安全的前提下進行，以下適用于所有實驗室人員：①須熟悉實驗室安全手冊中的建議和要求；②須熟悉安全設備的使用；③應掌握輕微割傷、擦傷以及接觸污染表面造成感染的處理；④在實驗室發生的所有傷害，應記錄并盡快向實驗室管理者報告；⑤有免疫抑制、免疫缺陷或為易感者（如孕婦或者糖尿病患者）應該告知實驗室管理者，以便采用適當的防范措施。

4 微生物危害等級

應將所有微生物當作潛在的病原體，處理與微生物有關的工作時，需應用一定的技術使其對員工、學生和環境的危害降至最低，同時這種技術也能保持實驗室菌株的純度。基于微生物對個體和群體的危害程度將其分為 4 級：危險等級 1（低個體危害，低群體危害）；危險等級 2（中等個人危害，有限群體危害）；危險等級 3（高個體危害，有限群體危害）；危險等級 4（高個體危害，高群體危害）。

學校實驗室只允許處理危害等級 1 的微生物，因種類太多，故目前沒有危害等級為 1 的微生物目錄。但生活在土壤中的微生物，如固氮菌屬、生產醋的醋酸桿菌、釀酒酵母菌、大腸桿菌（K12）、表皮葡萄球菌、藤黃八疊球菌（藤黃微球菌）、枯草芽孢桿菌、紅色毛癬菌和熒光假單胞菌對學校實驗室進行教學工作是安全的。但對于應用免疫抑制劑和免疫受損的人群，一些被認為對人類和動物正常的部分菌群仍然可能致病。值得注意的是許多寄生蟲在感染階段被認定為是危險等級 2，大多數植物致病源被認為是危險等級 1，但仍需依照轉基因生物監管部門的規章制度對其進行遺傳加工和處理。

5 一級生物安全實驗室

學校實驗室一般屬于一級生物安全實驗室，適合處理風險等級為 1 的微生物，實驗室人員可以通過標準的實驗室操作得到充分的保護。處理工作可以在開放的工作臺進行，沒有激活或者定植的樣本都可以在這樣的實驗室進行處理。

一級生物安全實驗室的要求如下：①工作室臺面必須由防水和隔熱材料制成；②座椅應有光滑的防水表面并便于清潔；③每個實驗室房間都應在出口處設置有冷熱水的洗臉池；④工作臺、柜子和設備之間和下面的空間須便于清潔；⑤防火設施須符合相關規定。

6 個人防護

1.在實驗室須穿戴工作服或罩衫等防護服；

2.長發應該束起；

3.所有緊急和安全設備需要按照生產商的說明進行保存和維護；

4.須保證實驗室人員能隨時使用所有的安全裝備；

5.應該識別所有的工作危害，預先評估其風險；

6.不論化學物濃度多大，皮膚接觸化學物后必須清洗；

7.嚴禁用口吹吸移液管；

8.所有的培養物都應標識日期；

9.培養物不能在工作臺上長時間保存，應轉移至專門的保存區域，比如冰箱和冷凍室；

10.最好使用不產生氣溶膠的接種環；

11.采取措施盡量避免氣溶膠的產生；

12.采取預防措施避免讀寫材料受到污染；

13.嚴禁粘貼標簽時用舌頭舔舐，應使用自粘標簽；

14.必須馬上清理泄漏的污染物，并對污染的區域進行消毒處理；

15.每次教學后或者每天對工作臺進行一次消毒；

16.專門的廢物應該被隔離存放在廢棄點，并按照當地監管部門的規定進行消毒和處理；

17.應提供防護衣物和裝備的儲存區域；

18.離開實驗室前應徹底清洗手和指甲。

7 實驗室工作區

工作區域的組成：培養基準備區、待滅菌物保存區、滅菌區、無菌物品貯存區、行政工作區。工作區域的清潔包括：①工作區域應保持整潔，非正在使用的物品和可能引起泄漏的有害物品不應出現在該區域；②工作臺應在教學結束后進行清潔和消毒，并將用于滅菌的物品收集起來；③使用含有清潔劑的拖布清潔地板；④生化實驗室嚴禁使用家用吸塵器，必須使用安裝排氣裝置的高效微粒空氣過濾器，以避免產生氣溶膠；⑤定期清理墻壁，對污染嚴重的墻壁，需要使用清潔劑清洗；⑥離心機、水浴器、孵化器、冰箱、冷藏柜和液氮罐等設備應定期清洗、消毒，送修理或處置之前應消毒。

8 廢物收集和處理

實驗室廢物應用特定容器收集，根據下列類別明確標識。非感染性材料如廢紙、塑料和紙制品應放于單層塑料袋中；而注射器針頭、碎玻璃和刀片，應放在不易刺破的容器中；感染性樣品殘余、用過的培養皿、培養瓶、一次性物品和用過的手套應收集在一個標有生化危害的大容器中。

廢物的處理原則有：①所有含有活體微生物的廢物均應使用壓力蒸汽滅菌或者化學消毒劑處理（最少浸泡 30 min，最好是過夜），經消毒處理或化學處理后的廢物，可在垃圾填埋場處置，但應符合當地規定；②所有涉及轉基因生物的處理應符合轉基因監督組織的要求；③未被污染的實驗室廢物處理原則可以和生活垃圾相同。

9 消毒方法

1.壓力蒸汽滅菌：壓力蒸汽滅菌（高壓）是消毒最可靠的手段。壓力蒸汽滅菌器需在高溫高壓下進行操作，所以應采取適當措施保護人員安全。達到溫度后的最小滅菌時間應為：121 ℃ 15 min；134 ℃ 4 min。

2.化學消毒劑：雖然壓力蒸汽滅菌是最可靠的消毒手段，但這種方法不適用于學校實驗室。化學消毒通常是學校對較大空間或表面區域和熱不穩定的材料或設備進行消毒的唯一可行的方法。常見的消毒方法見表 1。

表1 常見消毒方法

10 實驗室泄露的處理

對不產生氣溶膠的危害等級為 1 的微生物泄漏時，可使用浸潤有效化學消毒劑的紙巾進行擦拭，具體步驟如下：①穿戴適當的防護服和手套；②用釋放次氯酸鈉的專有吸收材料，進行大約 10 min 的消毒；使用鑷子移動尖銳的物品，并把其當成污染物丟棄；③使用相同的消毒劑溶液擦拭可能被污染的區域；④仔細清理溢液和消毒液，并將所有受污染物質轉移至處置點；⑤脫掉防護服并洗手。

11 危險材料運輸

根據材料的傳染性或是否含有轉基因微生物，選擇不同的包裝和運輸方式，寄件人負責確保遵守國家規定的包裝和運輸規則。不含有傳染性病原體的生物材料的運輸可以不受限制，含有危害等級為 1 的生物體和那些已知不具有危害等級 2、3 或 4 的微生物制品的運輸不受限制。所有經遺傳改良但對動物和人無傳染性的材料，應按照《國際航空運輸協會危險品條例》第913 號包裝說明進行包裝。