基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間譜檢測(cè)在臨床致病真菌鑒定中的應(yīng)用

劉 威

（營(yíng)口市老邊區(qū)疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗(yàn)，遼寧 營(yíng)口 115005）

真菌是臨床常見(jiàn)的致病菌之一，隨著廣譜抗生素的不斷更新?lián)Q代和免疫抑制劑藥物的不斷應(yīng)用及支持治療手段的不斷進(jìn)步，臨床真菌感染的患者越發(fā)增多，目前實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)的真菌鏡檢和培養(yǎng)是鑒定真菌常用的方法，但是由于其培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、操作過(guò)于繁瑣、檢驗(yàn)人員的水平參差不齊對(duì)真菌的鑒定工作造成了一定的影響，延誤了臨床醫(yī)師對(duì)疾病的治療錯(cuò)過(guò)了疾病的最佳監(jiān)控時(shí)間[1]。基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間譜檢測(cè)（matrix assisted laser desorption ionization time of flight spectrum，MALDI-TOF），是一類(lèi)新興的真菌檢測(cè)技術(shù)，近年來(lái)該技術(shù)被不斷地證實(shí)在細(xì)菌鑒定領(lǐng)域有著準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟(jì)的優(yōu)勢(shì)，被越來(lái)越多的醫(yī)院和防控中心所應(yīng)用，從一定程度上避免了病情的延誤，減輕了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2]。我疾控中心應(yīng)用不同的真菌檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)真菌類(lèi)型，旨在找出簡(jiǎn)便易行、檢測(cè)率高的檢測(cè)方法，指導(dǎo)臨床治療和疾病的防控，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源：選自2015年4月至2016年4月于營(yíng)口市疾控中心分離的真菌菌株100珠，采用信封法隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，試驗(yàn)組50例，對(duì)照組50例。

1.2 Vitek2全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)鑒定：取真菌菌液轉(zhuǎn)移種植到沙堡弱培養(yǎng)基，將做好標(biāo)記，置于37 ℃的培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)2天后取出，將真菌于試管中調(diào)節(jié)濁度至2，應(yīng)用VITEK2全自動(dòng)細(xì)菌鑒定設(shè)備對(duì)培養(yǎng)板的細(xì)菌進(jìn)行鑒定。

1.3 基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間譜檢測(cè)：取真菌菌液轉(zhuǎn)移種植到沙堡弱培養(yǎng)基，將做好標(biāo)記，置于37 ℃的培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)2 d后取出，將真菌于試管中調(diào)節(jié)濁度至2，后將菌液涂抹靶點(diǎn)中心，加入VITEK MS-FA和VITEK MS-CHCA 基質(zhì)液待試劑干燥后應(yīng)用VITEKMS 儀器進(jìn)行鑒定。當(dāng)試驗(yàn)組和對(duì)照對(duì)真菌檢驗(yàn)結(jié)果不一致時(shí)，將對(duì)真菌菌落應(yīng)用DNA序列分析：應(yīng)用真菌ITS2序列擴(kuò)增和PCR產(chǎn)物測(cè)序的方法進(jìn)一步分析真菌的種類(lèi)[3]。

1.4 觀(guān)察指標(biāo)：觀(guān)察試驗(yàn)組的真菌鑒定結(jié)果、對(duì)照組的真菌鑒定結(jié)果，計(jì)算兩種鑒定方法的準(zhǔn)確性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用（±s）表示，兩組間比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

試驗(yàn)組（VTITEK MS檢測(cè)）發(fā)生鑒別錯(cuò)誤的例數(shù)為4例，準(zhǔn)確率為92%，對(duì)照組（VITEK- 2機(jī)器檢測(cè)）發(fā)生鑒別錯(cuò)誤的例數(shù)為5例，準(zhǔn)確率為90%，試驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)室的真菌檢測(cè)準(zhǔn)確率比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），說(shuō)明兩組的真菌檢測(cè)準(zhǔn)確率相當(dāng)，見(jiàn)表1。

表1 兩組實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間譜檢測(cè)（matrix assisted laser desorption ionization time of flight spectrum，MALDI-TOF）可以對(duì)真菌做出迅速的檢測(cè)，具有操作容易、價(jià)格低廉、準(zhǔn)確率高、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn)。一般的真菌培養(yǎng)需要多種培養(yǎng)基和要求鑒定人員具有一定的工作經(jīng)驗(yàn)才能做出準(zhǔn)確的判斷，并且一般培養(yǎng)干預(yù)鑒定結(jié)果的因素較多，并且耗時(shí)較長(zhǎng)，對(duì)于少見(jiàn)的真菌檢定率極低[4]。近年來(lái)基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間譜檢測(cè)迅速發(fā)展，給臨床和疾病防控工作帶來(lái)了許多便捷。本文觀(guān)察了基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間譜檢測(cè)和VITEK 2機(jī)器檢測(cè)在真菌鑒定中的準(zhǔn)確性，結(jié)果表明試驗(yàn)組（VTITEK MS檢測(cè)）發(fā)生鑒別錯(cuò)誤的例數(shù)為4例，準(zhǔn)確率為92%，對(duì)照組（VITEK 2機(jī)器檢測(cè)）發(fā)生鑒別錯(cuò)誤的例數(shù)為5例，準(zhǔn)確率為90%，兩組真菌檢測(cè)準(zhǔn)確率比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），說(shuō)明兩組的真菌檢測(cè)真確率相當(dāng)。

[1] 張超,廖萬(wàn)清.基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)在病原真菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)真菌學(xué)雜志,2012 ,7(5):312-313.

[2] 何英,陸學(xué)東.基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)及其在臨床微生物鑒定中的應(yīng)用[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,34(10):881-888.

[3] 張明新,朱敏,王玫,等.應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定常見(jiàn)細(xì)菌和酵母菌[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,34(11):988- 992.

[4] 姜長(zhǎng)宏,龍軍,華夏.基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀在侵襲性真菌感染病原真菌鑒定中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2015,31(17):2902.