非小細(xì)胞肺癌患者血清IL-17、VEGF水平與臨床分期和預(yù)后的相關(guān)性研究

葉颯 王飛燕 周宏斌 喻颯 林帆

肺癌是世界上發(fā)病率最高的的惡性腫瘤，其發(fā)病率 約占所有癌癥的13%，世界范圍內(nèi)每年有超過140萬人死于肺癌，它在所有癌癥中的病死率高居榜首[1]。非小細(xì)胞肺癌（non－small cell lung cancer,NSCLC）約占肺癌80%～85%，通過目前的手術(shù)，化療，放療等治療手段，預(yù)后仍較差，5年生存率＜15%。即使是相同的TNM分期患者，其生存率也不盡相同，這表明存在影響NSCLC預(yù)后的其他因素。

肺癌的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，其中腫瘤和炎癥的關(guān)系一直倍受關(guān)注，炎癥與腫瘤的轉(zhuǎn)移、新生血管的形成及腫瘤免疫均密切相關(guān)[2]。IL－17是Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)因子，其可以選擇性上調(diào)一些血管源性因子的產(chǎn)生，從而促進(jìn)肺癌新生血管的生成，從而有利于腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和侵襲[3]。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在新生血管的形成過程中發(fā)揮了最主要的作用，在許多腫瘤研究中均發(fā)現(xiàn)VEGF與腫瘤的預(yù)后相關(guān)[4]。近來有研究表明，腫瘤的轉(zhuǎn)移與IL－17增加導(dǎo)致VEGF通路激活相關(guān)，并且已證實(shí)IL－17導(dǎo)致的VEGF通路激活參與了腫瘤對抗VEGF治療產(chǎn)生耐藥的過程[5－6]。本研究通過對NSCLC患者血清中IL－17和VEGF水平進(jìn)行檢測，探討兩者的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 收集2009年1月至2013年1月我院收治的NSCLC患者103例（NSCLC組），其中男53例，女50例，年齡 37～82（59.87±10.42）歲；吸煙 62 例，不吸煙 41例。所有患者通過組織病理學(xué)檢查證實(shí)為NSCLC，其中鱗癌45例，腺癌58例；臨床TNM分期，根據(jù)2009年國際抗癌聯(lián)盟（UICC）第7版肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)：I期24例，Ⅱ期36例，Ⅲ期30例，Ⅳ期13例；高分化18例，中分化38例，低分化47例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）確診前未接受放、化治療或其他腫瘤相關(guān)治療；（2）均同意參加本次研究并簽署知情同意書（獲浙江省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)）；（3）定期門診隨訪或能電話隨訪獲得生存時(shí)間；（4）患者無慢性感染性疾病、哮喘、免疫性疾病等全身系統(tǒng)性疾病。另選取同期我院健康體檢者50例作為正常對照組，男 25 例，女 25 例，年齡 35～80（58.00±10.65）歲；吸煙29例，不吸煙21例。兩組對象性別、年齡、吸煙比例等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本收集 收集所有受試者外周抗凝靜脈血2ml，標(biāo)本離心1500r/min，10min，分離上清液后－80°C保存。

1.2.2 血清IL－17和VEGF水平測定 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）對NSCLC患者及正常對照組血清IL－17和VEGF的水平進(jìn)行檢測。試劑盒購自美國R&D生物技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，采用美國Bio.Rad公司MD550酶標(biāo)儀檢測吸光度（A值）的變化，于酶標(biāo)儀450nm讀取結(jié)果，570nm進(jìn)行矯正。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，兩組之間比較采用t檢驗(yàn)；多組之間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗(yàn)。不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)M表示，采用Manne－Whitney U非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)，單因素生存分析采用Kaplan－Meier生存曲線和log－rank檢驗(yàn)，獨(dú)立預(yù)后因素采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清VEGF和IL－17水平比較 NSCLC組血清 VEGF 為（250.22±120.91）pg/ml，IL－17 為（21.31±9.47）pg/ml；正常對照組血清 VEGF水平為（98.41±34.71）pg/ml，IL－17 為（10.27±2.74）pg/ml。NSCLC 組血清VEGF和L－17均高于正常對照組（均P＜0.01）。

2.2 NSCLC組不同臨床特征患者血清VEGF和IL－17水平比較 見表1。

表1 NSCLC組不同臨床特征患者血清VEGF和IL-17水平比較

由表1可見，不同TNM分期患者血清VEGF水平兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ、Ⅳ期比較，血清IL－17水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），而Ⅲ、Ⅳ期比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。以年齡、性別、吸煙、腫瘤類型、惡性程度等進(jìn)行分組時(shí)，患者血清VEGF和IL－17水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

經(jīng)相關(guān)性檢驗(yàn)，患者血清VEGF、IL-17水平與年齡（P=0.162、0.263），性別（P=0.058、0.463），吸煙（P=0.892、0.353），腫瘤類型（P=0.423、0.413），惡性程度（P=0.806、0.809）均無顯著相關(guān)性，和腫瘤TNM分期均有明顯相關(guān)性（均P＜0.01）。

2.3 NSCLC患者血清VEGF和IL-17水平的相關(guān)性見圖1。

圖1 NSCLC患者血清VEGF和IL-17水平的散點(diǎn)圖

由圖1可見，NSCLC患者血清VEGF和IL-17水平呈正相關(guān)（r2=0.745，P＜0.01）。

2.4 NSCLC患者血清VEGF、IL-17水平與生存時(shí)間的關(guān)系 根據(jù)血清IL-17和VEGF水平的中位數(shù)（225.36、17.85pg/ml），將NSCLC患者依次分為兩組。VEGF水平≤225.36pg/ml組 52例，VEGF＞225.36pg/ml組 51例；IL-17≤17.85pg/ml組 52 人，IL-17＞17.85pg/ml組 51例。以生存時(shí)間為橫軸、生存率為縱軸繪制生存曲線。見圖2-3。

圖2 不同血清VEGF水平NSCLC患者的生存曲線

由圖2-3可見，VEGF≤225.36pg/ml組中位生存時(shí)間為24個(gè)月，VEGF＞225.36pg/ml組中位生存時(shí)間為15個(gè)月，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。IL-17≤17.85pg/ml組中位生存時(shí)間為21個(gè)月，IL-17＞17.85pg/ml組中位生存時(shí)間為15個(gè)月，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

圖3 不同血清IL-17水平NSCLC患者的生存曲線

2.5 影響NSCLC患者預(yù)后的Cox回歸多因素分析 見表2。

表2 影響NSCLC患者預(yù)后的Cox回歸多因素分析

由表2可見，多因素分析顯示，血清VEGF、IL-17水平及TNM分期是獨(dú)立的預(yù)后影響因素（均P＜0.05）。

3 討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)，其中T淋巴細(xì)胞在腫瘤免疫中起著中心調(diào)控作用。Th17細(xì)胞是近年來發(fā)現(xiàn)的CD4陽性T淋巴細(xì)胞亞群，Th17細(xì)胞在腫瘤的微環(huán)境中具有強(qiáng)烈的促炎癥作用，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。IL-17是由Th17細(xì)胞產(chǎn)生的促炎癥因子,能介導(dǎo)炎性反應(yīng)，促進(jìn)新生血管生成和腫瘤生長，決定著腫瘤的轉(zhuǎn)歸和預(yù)后[7]。有報(bào)道通過檢測人NSCLC腫瘤組織發(fā)現(xiàn)，IL-17與腫瘤血管生成呈正相關(guān)性，主要表現(xiàn)在對血管內(nèi)皮細(xì)胞的趨化作用、上調(diào)促血管生成因子的表達(dá)和協(xié)同其他血管生成因子上。腫瘤新生血管形成和轉(zhuǎn)移是影響NSCLC預(yù)后的最主要因素，一旦發(fā)生，常常會(huì)導(dǎo)致治療的失敗和較差的預(yù)后[8]。VEGF在腫瘤組織中被認(rèn)定是最主要的促新生血管形成的細(xì)胞因子之一，它是一種多功能糖蛋白，是刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和移行的重要因子，通過增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂和促使血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，重塑細(xì)胞外基質(zhì)并增加血管的通透性，從而促使病理性血管的生成，而腫瘤血管的生成有利于腫瘤細(xì)胞浸潤淋巴管，促進(jìn)腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在NSCLC患者中，血清IL-17和VEGF水平與腫瘤血管密度之間存在顯著的相關(guān)性[4]。

在本研究中，我們證實(shí)了NSCLC患者血清的IL-17和VEGF的水平顯著高于正常對照組，此研究結(jié)果和Xu等[9]的研究結(jié)果一致。一些研究揭示了腫瘤組織內(nèi)浸潤的Th17細(xì)胞分泌的IL-17能驅(qū)動(dòng)一個(gè)旁分泌信號網(wǎng)絡(luò)，它通過增高的IL-17刺激糖酵解和生長因子的產(chǎn)生，同時(shí)會(huì)伴隨VEGF表達(dá)途徑的激活[6，10]。我們的研究也發(fā)現(xiàn)了IL-17和VEGF水平呈正相關(guān)，與上述研究都說明NSCLC患者體內(nèi)IL-17和VEGF密切相關(guān)，兩者水平同時(shí)升高可能是NSCLC的一個(gè)危險(xiǎn)因素，同時(shí)強(qiáng)調(diào)了抑制IL-17和VEGF對治療NSCLC的必要性。以往很多研究報(bào)道IL-17在許多腫瘤模型中能促進(jìn)新生血管的形成，且IL-17的表達(dá)和腫瘤血管的密度高度相關(guān)[11-12]，我們的研究則進(jìn)一步地分析了IL-17和VEGF水平與NSCLC患者臨床特征之間的關(guān)系，結(jié)果顯示IL-17和VEGF水平和肺癌的分期呈正相關(guān)，分期越早，IL-17和VEGF水平越低，除了在NSCLC患者Ⅲ期和Ⅳ期的IL-17水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余各分期兩兩之間IL-17和VEGF的水平均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，代表腫瘤新生血管加速生長的指標(biāo)（IL-17和VEGF）與NSCLC的疾病分期密切相關(guān)，這說明新生血管可以幫助腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，表明IL-17和VEGF在NSCLC的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用。為了探索IL-17和VEGF水平和NSCLC的預(yù)后關(guān)系，我們首先研究了IL-17和VEGF水平與中位生存期之間的關(guān)系，Kaplan-Meier生存分析顯示，血清IL-17和VEGF水平高的NSCLC患者中位生存期明顯低于IL-17和VEGF水平低的患者，說明IL-17和VEGF水平高的患者預(yù)后更差，這和Tas等[13]研究具有相似結(jié)果。其次我們采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素預(yù)后分析，結(jié)果顯示血清IL-17和VEGF水平和TNM分期是獨(dú)立的預(yù)后影響因素。

我們的研究證明NSCLC患者血清IL-17和VEGF水平明顯增高，且IL-17和VEGF水平呈正相關(guān)；NSCLC患者血清IL-17和VEGF水平和NSCLC的分期密切相關(guān)；血清IL-17和VEGF水平增高的NSCLC患者中位生存期較短。因此我們推測血清IL-17和VEGF水平可作為NSCLC患者預(yù)后預(yù)測的重要指標(biāo)。

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