肝癌組織miR-196b表達變化及其與患者臨床病理參數和預后的關系

溫萍，陳盛鐸

(湖北省中醫院花園山院區，武漢430000)

microRNA(miRNA)是一類由內源基因編碼、長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子。近年研究證實，miRNA通過調節癌基因或抑癌基因表達，調控細胞的增殖、分化、凋亡，從而促進腫瘤的發生、發展[1，2]。miR-196b是miRNA家族成員之一，在胃癌、結直腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤組織中高表達，并且其高表達與患者預后不良有關，具有促癌基因作用[3]。本研究分析肝癌組織miR-196b表達變化及其表達與患者臨床病理參數和預后的關系，探討miR-196b在肝癌發生發展中的作用。

1　臨床資料

1.1基本資料研究對象為2012年7月～2014年6月湖北省中醫院花園山院區收治的首診肝癌患者137例，男109例、女28例，年齡(57.98±10.33)歲。納入標準：①年齡18～80歲；②經過病理檢查、臨床評估和影像學檢查確診為原發性肝細胞癌；③擬行肝癌切除手術，術前未行任何抗腫瘤治療；④術后隨訪資料完整。排除標準：①繼發轉移性肝癌；②有肝移植史；③合并其他惡性腫瘤；④存在嚴重感染；⑤妊娠期或哺乳期婦女。肝功能Child-pugh分級：A級110例，B級27例；ECOG評分：0分90例，1分38例，2分5例，3分4例；相關病史：乙肝史109例，肝硬化史79例；腫瘤直徑：≥5 cm 68例，<5 cm 69例；病灶數量：單發79例，多發58例；BCLC分期：A期59例，B期29例，C期31例；有靜脈侵犯49例，無靜脈侵犯88例。術后采用門診或電話等方式隨訪，隨訪截止至2017年6月30日，隨訪時間30(1～60)個月，患者總體生存期(OS)為31(1～60)個月。本研究經湖北省中醫院花園山院區醫學倫理委員會批準，患者均知情同意。本研究統計學處理采用SPSS22.0統計軟件。計量資料以M(P25～P75)表示，結果比較采用Wilcoxon秩和檢驗或Kruskal-WallisH秩和檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log Rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

1.2癌組織及其癌旁組織miR-196b表達情況取手術切除的肝癌組織及其配對的癌旁正常組織(距腫瘤邊緣3～5 cm)，采用qRT-PCR法檢測miR-196b表達，以U6為內參，采用2-ΔΔCt法計算miR-196b相對表達量。本組患者肝癌組織miR-196b相對表達量為1.853(1.173～4.706)，癌旁正常組織為1.032(0.451～1.886)，二者比較P<0.01。肝癌組織miR-196b相對表達量的中位數為1.853，以此為截斷值，肝癌患者miR-196b高表達者69例、低表達者68例。

1.3肝癌組織miR-196b表達與患者臨床病理特征的關系見表1。

表1　　　　肝癌組織miR-196b表達與患者臨床病理參數的關系[M(P25～P75)]

1.4癌組織miR-196b表達與患者OS的關系69例miR-196b高表達者與68例低表達者OS分別為21(1～58)個月、40.5(4～60)個月，二者比較P<0.01。

2　討論

研究證實， miRNA能通過與靶基因3′端非翻譯序列結合促進靶基因降解或抑制目標mRNA翻譯過程，從而抑制靶基因表達[4]；能通過調控AKT/ERK通路、上皮間質轉化、促癌基因IGF-Ⅱ和IGF-IR表達以及神經白細胞素等調節腫瘤細胞的增殖、分化、調亡，影響腫瘤的發生、發展[5，6]。miR-196分為具有序列同源性的miR-196a和miR-196b，后者位于同源框蛋白(HOX)A9和HOXA10基因區間的一個高度進化的保守區域，定位于人類染色體7p15.2[7]。miR-196b在啟動子甲基化不足時，可導致miR-196b在胃癌組織或胃癌細胞中過表達[8]； miR-196b高表達還可增加胃癌MKN28細胞的侵襲能力，其機制可能與調控PI3K/Akt/mTOR信號通路有關[9]。Yu等[10]研究發現，miR-196b可通過HOXA9的異位表達誘導非小細胞肺癌細胞侵襲和遷移；miR-196b過表達可提高HOXA10基因的表達，從而促進胃癌細胞侵襲和遷移[11]。以上研究提示，miR-196b可通過調控多種通路或蛋白促進腫瘤細胞增殖并抑制其凋亡。本研究結果顯示，肝癌組織miR-196b相對表達量明顯高于癌旁正常組織；肝癌組織miR-196b相對表達量與腫瘤直徑、靜脈侵犯有關。提示miR-196b可能作為癌基因參與肝癌的發生、發展；miR-196b表達越高，肝癌細胞增殖、侵襲、轉移能力越強，與既往研究[8～11]結果類似。

有研究發現，多種惡性腫瘤組織miR-196b表達與患者預后相關，miR-196b表達越高，患者預后越差[12，13]。Kanno等[14]分析了248例胰腺癌患者miRNA基因表達矩陣發現，在胰腺癌組織中miR-196b是上調幅度最大的miRNA，且其高表達與患者預后差有關。本研究結果顯示，肝癌組織miR-196b高表達者中位OS明顯低于miR-196b低表達者，說明miR-196b高表達與肝癌患者預后有關。其原因可能為miR-196b能通過調節多個靶基因，促進腫瘤細胞分化、增殖、遷移，進而影響肝癌患者病情。有研究發現，miR-196b表達下調可提高患者對5-氟尿嘧啶的化療敏感性[15]。因此推測，miR-196高表達有可能降低肝癌化療藥物敏感性，繼而導致患者預后不良。

綜上所述， miRNA-196b可促進肝癌的發生及發展。本研究的不足為樣本量較小、隨訪時間較短。

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