急性腦出血患者血清TSP-1/2、MMP-2/9水平變化及其與腦血腫量、腦水腫量的關系

朱明建，陳禮剛，李祥龍，楊福兵

(西南醫科大學附屬醫院，四川瀘州646000)

急性腦出血(ACH)后血腫組織周圍常出現水腫，并可在ACH早期時形成，也是導致患者神經功能缺損不斷加重的一個重要因素[1]。腦水腫的形成及進展由多種分子機制共同參與，而基質金屬蛋白酶(MMP)可能也參與其中[2]。MMP成員MMP-2、MMP-9能夠降解機體中血管的基底膜，還可促使中性粒細胞不斷遷移，使局部的炎癥反應不斷加重，最終導致血腦屏障的結構受損而引起腦水腫。有報道指出，MMP表達還會受到血小板反應蛋白(TSP)的調控，提示血腦屏障被破壞的機制可能還與TSP調控有關[3,4]。TSP-1和TSP-2均為TSP家族成員[5]。本研究觀察了ACH患者血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平變化，并探討其與患者腦血腫量、腦水腫量的相關性。現報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2014年9月～2017年9月我院收治的ACH患者95例為觀察組。納入標準：①符合我國第四屆腦血管病學術會議上制定的關于ACH的診斷標準[5]；②經頭顱CT檢查確診；③幕上腦實質的出血未進入腦室；④在發病前無外傷史；⑤無抗凝藥物應用史。排除標準：①有腦部腫瘤或其他惡性腫瘤；②血液系統疾病；③存在血管畸形；④神經系統功能性缺陷；⑤其他全身性疾病。入組患者男41例、女54例，年齡32～75(54.67±2.34)歲，發病至入院時間1～10(4.94±0.33)h。合并高血壓74例、糖尿病12例。另選同期我院體檢健康者100例作為對照組，男49例、女51例，年齡30～72(54.59±2.28)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2相關指標觀察

1.2.1血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平分別在對照組體檢當日、觀察組入院當日抽取空腹靜脈血約4 mL注入抗凝管內，4 ℃下3 000 r/min離心15 min，分離血清。采用ELISA法檢測血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9，試劑盒均購自武漢博士德公司，嚴格按試劑盒說明書操作。

1.2.2ACH患者腦血腫量、腦水腫量在一塊10 cm×10 cm的透明塑料片中根據CT中比例尺長度，縱橫繪制成垂直交錯的檢測方格，方格邊長1 cm。根據體視學原理，方格直線交叉點表示面積為1 cm2。將檢測系統疊放于CT片上，統計落于血腫和四周水腫帶內的測點數目，累加每層血腫或者水腫中的測點數即為腦血腫量或腦水腫量(mL)。

1.2.3相關性分析采用Spearman法分析血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平與腦血腫量、腦水腫量的關系。

2　結果

觀察組血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平均高于對照組(P均<0.05)，見表1。觀察組腦血腫量、腦水腫量分別為(27.23±8.44)、(20.99±3.65)mL。Spearman相關性分析結果顯示，觀察組血清TSP-1與腦血腫量、腦水腫量均無相關性(P均>0.05)；TSP-2與腦血腫量呈負相關(r=-0.639，P<0.05)，與腦水腫量無相關性(P>0.05)；MMP-2與腦血腫量無相關性(P>0.05)，與腦水腫量呈正相關(r=0.582，P<0.05)；MMP-9與腦血腫量、腦水腫量均呈正相關(r分別為0.589、0.630，P均<0.05)。

表1　　　　兩組血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

3　討論

血管壁細胞外基質降解增強是ACH發生的重要病理生理基礎[6,7]。研究證實，MMP參與降解機體各類組織細胞外基質的過程， 能夠不斷降解細胞外基質中含有的層粘連蛋白、纖維連接類蛋白及Ⅳ型膠原，導致細胞外基質蛋白密度降低[8,9]。MMP-2及MMP-9均為MMP家族的重要成員。TSP屬于調節型基質糖蛋白家族，其是調控MMP表達的上游分子。

研究證實，正常的細胞既可分泌MMP，還可形成金屬蛋白酶有關的組織抑制劑。但發生ACH后機體的MMP與金屬蛋白酶有關組織抑制劑的動態平衡被打破，腦病變組織MMP-2及MMP-9水平明顯上升[10,11]。TSP-1和TSP-2是一組結構及功能均高度相關的一類調節型基質糖蛋白有關家族成員，二者通常是由被激活的血小板和內皮細胞以及神經元、膠質細胞所分泌[12]。ACH患者顱內由于受到病變區環境的刺激，TSP-1和TSP-2的分泌均明顯增加，但TSP-1還具有針對MMP的雙重調控作用。本研究結果顯示，觀察組入院當日血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平均高于對照組；觀察組血清TSP-1與腦血腫量、腦水腫量均無相關性；TSP-2與腦血腫量呈負相關，與腦水腫量無相關性；MMP-2與腦血腫量無相關性，與腦水腫量呈正相關；MMP-9與腦血腫量、腦水腫量均呈正相關。提示ACH患者血清TSP、MMP水平與腦血腫和腦水腫關系密切。可能原因是激活的MMP-2、MMP-9攻擊血腦屏障中的基底膜，降解細胞外基質中的各類蛋白成分，破壞細胞結構的完整性，增大血管的通透性，促使毛細血管中的水分及血漿蛋白不斷外滲，增加細胞間隙中的水分，最終促進腦血腫和腦水腫的產生[13，14]。

教師可從實驗動物、觀察指標和采取水樣等三方面進行一定創新改進。實驗動物可從金魚拓展為水蚤，用水蚤代替金魚有以下好處：成本更低；方便多次重復實驗；學生在上個學期已經接觸過水蚤，對水蚤已經有一定了解；通過觀察水蚤心率來了解水蚤活動情況，以量化數據代替表象觀察更具有說服力。采取水樣方面也可不僅限于附近河水和不同比例不同pH的氨水溶液，也可拓展為含有不同污染物（如殺蟲劑、洗滌劑等）的水樣，幫助學生更直接體會到水質污染對水生小動物的影響。

綜上所述，ACH患者血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平均升高，并與患者腦血腫量及腦水腫量密切相關。臨床上可將上述指標作為監測靶點用于輔助評估ACH患者的腦血腫量及腦水腫量。

參考文獻：

[1] 司賢峰.醒腦靜注射液對急性腦出血患者血液細胞因子水平的影響[J].中國實用神經疾病雜志,2017,20(1):112-113.

[2] 許登明.二丁酰環磷腺苷鈣聯合依達拉奉治療急性腦出血的療效[J].臨床醫藥文獻電子雜志,2017,4(26):5112-5113.

[3] 曾慶銀.超早期強化降壓治療對基底節區腦出血患者血漿MMP-9及神經功能的影響[J].醫學理論與實踐,2017,30(21):3173-3175.

[4] 何效平,江承平,王柏強,等.抑肽酶對腦出血大鼠凝血酶敏感蛋白的影響[J].中國藥業,2015,24(21):22-24.

[5] 鄭晨宏.靶向CD47及其配體TSP-1/SIRPα在免疫及損傷應答中的研究進展[J].醫學綜述,2015,21(22):4042-4044.

[7] 陳柏林,邢之華,唐濤,等.益氣活血法對腦出血大鼠腦內凝血酶敏感蛋白-1及其受體CD36表達的影響[J].南京中醫藥大學學報,2011,27(4):342-345.

[8] 郭清保,謝曼麗,楊彥龍,等.腦血疏口服液聯合依達拉奉對高血壓腦出血的治療效果及對血清IL-6、IL-1β、MMP-9的影響[J].現代生物醫學進展,2017,17(21):4071-4074.

[9] Gao JB, Tang WD, Wang HX, et al. Predictive value of thrombospondin-1 for outcomes in patients with acute ischemic stroke[J]. Clin Chim Acta, 2015,23(450):176-180.

[10] 盧俏麗,李晨,賈志榮,等.炎癥介質hs-CRP、IL-6和MMP-9水平與腦微出血的相關性研究[J].重慶醫學,2017,46(26):3629-3631.

[11] 張方,李文杰.基質金屬蛋白酶-9與急性腦出血后腦水腫的相關性研究[J].中國實用神經疾病雜志,2016,19(7):77-79.

[12] 彭形,羅超,肖剛,等.高血壓腦出血患者急性期血清TSP1/2、MMP2/9與腦血腫量及腦水腫量的關系研究[J].重慶醫科大學學報,2017,42(12):1649-1650.

[13] 楊洪清,羅飏.基質金屬蛋白酶在腦出血發生發展中的作用及腦出血治療預后分析[J].河北醫藥,2017,39(2):211-213.

[14] Dong XQ, Yu WH, Zhu Q, et al.Changes in plasma thrombospondin-1 concentrations following acute intracerebral hemorrhage[J]. Clin Chim Acta, 2015,23(450):349-355.