肺腺癌組織FoxP3表達(dá)變化及臨床意義

李俊，陶兆武，喻正浩，黃卉

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢市中心醫(yī)院，武漢430000)

叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子3(FoxP3)是CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)特異性標(biāo)記物，也是Treg分化和發(fā)揮免疫抑制功能的關(guān)鍵驅(qū)動因子[1～3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxP3不僅在Treg中表達(dá)，在多種腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞中也有表達(dá)，且FoxP3表達(dá)量越高，肝癌、胰腺癌患者的預(yù)后越差[4,5]。本研究探討FoxP3在肺腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1　臨床資料

1.1基本資料選擇2009年9月～2012年8月我院收治的肺腺癌患者159例，男89例、女70例，年齡(62.28±10.04)歲。患者均接受腫瘤切除手術(shù)，術(shù)前未接受過化療、放療等新輔助治療。病理檢查確診為肺腺癌，其中高分化24例、中分化98例、低分化37例，TNM分期Ⅰ期51例、Ⅱ期54例、Ⅲ期53例、Ⅳ期1例，腫瘤直徑<5 cm 90例、≥5 cm 69例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移63例、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移1例。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重感染、中重度肝功能異常或中重度腎功能異常；有其他系統(tǒng)腫瘤史；預(yù)期生存期不足12個月；妊娠期或哺乳期婦女。術(shù)后隨訪截止日期為2017年8月，中位隨訪期44(1～94)個月，中位無病生存期(DFS)為31(1～91)個月，中位總體生存期(OS)為44(1～94)個月。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Kaplan-Meier(K-M)曲線和Log-rank檢驗(yàn)分析肺腺癌組織FoxP3表達(dá)與DFS、OS的關(guān)系；采用單因素和多因素Cox風(fēng)險比回歸模型進(jìn)行基線期因素對于DFS及OS的預(yù)測作用分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2癌組織及癌旁組織FoxP3表達(dá)檢測采用免疫組化法。患者均在術(shù)中留取癌組織及癌旁正常組織(距離癌組織邊緣>5 cm)，檢測癌組織FoxP3表達(dá)。以胞質(zhì)出現(xiàn)淺黃色至棕褐色為FoxP3陽性細(xì)胞。由兩位病理科醫(yī)師采用雙盲法計(jì)數(shù)FoxP3陽性細(xì)胞。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：基本不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞所占比例評分標(biāo)準(zhǔn)：<1%為0分，1%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%～100%為4分。以染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)與染色面積分?jǐn)?shù)的乘積判斷結(jié)果，0～3分為低表達(dá)，>3分為高表達(dá)。癌組織及癌旁組織FoxP3高表達(dá)分別為82例(51.6%)、50例(31.4%)，二者比較P<0.01。

1.3癌組織FoxP3表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系肺腺癌組織中FoxP3表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)(P均<0.05)。見表1。

表1　　　　肺腺癌組織FoxP3表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[例(%)]

1.4癌組織FoxP3表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系FoxP3高表達(dá)與低表達(dá)者中位DFS分別為20個月(95%CI：13～27)、41個月(95%CI：36～46)；中位OS分別為34個月(95%CI：28～40)、57個月(95%CI：50～64)，兩者比較P均<0.01。多元Cox風(fēng)險比回歸模型分析顯示，癌組織FoxP3高表達(dá)是DFS(HR=1.908，95%CI：1.329～2.741)及OS(HR=1.872，95%CI：1.258～2.785)的獨(dú)立預(yù)測因素(P均<0.01)。

2　討論

研究發(fā)現(xiàn)，免疫功能紊亂引起的多分子異常活動在惡性腫瘤的發(fā)生中起重要作用[6～8]，特別是T淋巴細(xì)胞亞群功能的紊亂[9,10]。FoxP3位于人類X染色體p11.23，屬于叉頭狀/翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子家族，參與Treg的發(fā)育及生物學(xué)功能發(fā)揮，具有下調(diào)免疫應(yīng)答的功能[11]。人類FoxP3基因突變可導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)紊亂的X連鎖綜合征(IPEX)，即X連鎖自身免疫及過敏調(diào)節(jié)紊亂綜合征(XLAAD)[3]。目前FoxP3的功能及其在免疫系統(tǒng)中的作用機(jī)制尚未完全闡明。FoxP3最初被發(fā)現(xiàn)特異性表達(dá)于Treg。FoxP3+Treg是一類具有免疫抑制功能的T細(xì)胞亞群，能夠分泌轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)、IL-10和IL-4等細(xì)胞因子，對效應(yīng)T細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，參與免疫反應(yīng)[12]。研究表明，F(xiàn)oxP3不僅在維持機(jī)體自身的免疫耐受、預(yù)防自身免疫疾病及阻斷排斥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，還可能參與腫瘤逃逸[13]。近年來大量研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxP3在許多實(shí)體腫瘤組織和細(xì)胞系中高表達(dá)，例如，Zhang等[14]觀察到在胃癌組織中FoxP3表達(dá)量高于癌旁組織；Li等[15]在結(jié)直腸癌患者中同樣觀察到癌組織中FoxP3表達(dá)量高于癌旁組織，并且FoxP3表達(dá)與癌組織病理分化程度呈正相關(guān)；與正常宮頸組織樣本相比，宮頸癌組織和宮頸上皮樣病變組織FoxP3表達(dá)顯著升高，且其表達(dá)量與國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(FIGO)分期和腫瘤直徑相關(guān)[16]。提示FoxP3可能是一種促癌因子，其高表達(dá)促進(jìn)癌癥的發(fā)生、發(fā)展。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，下調(diào)肺腺癌A549細(xì)胞中FoxP3表達(dá)可以抑制細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，減少TGF-β1、IL-35和血紅素加氧酶1(HMOX1)分泌可能是其作用機(jī)制[17,18]。FoxP3通過上調(diào)細(xì)胞周期G1/S關(guān)卡基因CCND1表達(dá)促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，亦可通過上調(diào)免疫抑制性細(xì)胞因子表達(dá)以抑制T淋巴細(xì)胞增殖等方式參與肺腺癌細(xì)胞的免疫逃逸[19,20]。本研究結(jié)果顯示，肺腺癌組織FoxP3表達(dá)高于癌旁正常組織，且FoxP3表達(dá)量與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)、與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期呈正相關(guān)；提示在肺腺癌中FoxP3發(fā)揮促癌基因的作用。

高腫瘤浸潤性FoxP3+T細(xì)胞與雌激素受體陽性乳腺癌患者預(yù)后相關(guān)。外圍基質(zhì)FoxP3評分較低的胰腺癌患者的PFS和OS更好。提示FoxP3+Treg細(xì)胞可能聚集在腫瘤局部，抑制機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，影響患者預(yù)后。一項(xiàng)回顧性研究顯示，腫瘤相關(guān)基質(zhì)FoxP3陽性細(xì)胞密度較高與肺腺癌Ⅰ期患者較短的無復(fù)發(fā)生存期(RFP)相關(guān)，且FoxP3與分化簇3(CD3)的比率是肺腺癌復(fù)發(fā)的獨(dú)立預(yù)測因素。FoxP3過表達(dá)可以促進(jìn)Treg形成，導(dǎo)致發(fā)揮殺傷效應(yīng)的T細(xì)胞被Treg抑制，無法發(fā)揮有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答，導(dǎo)致機(jī)體對腫瘤免疫耐受，使腫瘤進(jìn)行性生長；FoxP3過表達(dá)可降低患者對順鉑化學(xué)反應(yīng)的敏感性，從而影響患者預(yù)后[17]。本研究結(jié)果顯示，肺腺癌組織FoxP3高表達(dá)患者(主要為TNM Ⅰ～Ⅲ期患者)DFS和OS明顯短于低表達(dá)者，且癌組織FoxP3表達(dá)是預(yù)測患者DFS和OS的獨(dú)立影響因素。進(jìn)一步證實(shí)FoxP3過表達(dá)可促進(jìn)肺腺癌的發(fā)生及發(fā)展。

綜上所述，肺腺癌組織中FoxP3表達(dá)升高，F(xiàn)oxP3高表達(dá)促進(jìn)肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展，并與患者預(yù)后相關(guān)。本研究的不足為樣本量相對較小；納入患者基本為肺腺癌TNM Ⅰ～Ⅲ期，Ⅳ期僅有1例。FoxP3表達(dá)對TNM Ⅳ期患者預(yù)后的影響尚待驗(yàn)證。

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