復(fù)方甘草酸苷對(duì)趨化因子受體CCR3、CCR5在過敏性紫癜患兒中的表達(dá)

張小霞 ，任妹，吳儉

(1、江西省萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院，萍鄉(xiāng) 337000；2、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科，南昌 330006)

過敏性紫癜（anaphlactoid purpumra）是以小血管炎為主要病變的系統(tǒng)性血管炎[1]，其發(fā)病與T細(xì)胞免疫功能紊亂有關(guān)[2]，表現(xiàn)為 Th1/Th2 失衡[3，4]，Th2優(yōu)勢(shì)表達(dá)。已有研究報(bào)道，復(fù)方甘草酸苷對(duì)HSP有免疫調(diào)節(jié)作用。本文通過復(fù)方甘草酸苷治療HSP，并檢測(cè)HSP患兒治療前后的趨化因子受體CCR3、CCR5的水平，來探討復(fù)方甘草酸苷對(duì)HSP的療效。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象2016年5月-2017年3月我院收治的HSP患兒40例，年齡4-12歲，根據(jù)就治順序編號(hào)，采取隨機(jī)數(shù)字表法分為治療組和對(duì)照組2組，每組各20例。其中對(duì)照組男10例，女10例，治療組男10例，女10例，對(duì)照組單純型8例，腹型5例，關(guān)節(jié)型5例，混合型2例；治療組單純型7例，腹型6例，關(guān)節(jié)型4例，混合型3例。兩組在年齡、性別、等一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，采用癥狀評(píng)分法評(píng)定病情嚴(yán)重程度。入選標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合第7版《兒科學(xué)》HSP診斷標(biāo)準(zhǔn)；⑵首次發(fā)病；⑶無自身免疫性疾病；⑷無嚴(yán)重感染；⑸治療前均無免疫抑制劑應(yīng)用；⑹對(duì)所用藥物成分既往無過敏史；⑺出血時(shí)間、凝血時(shí)間及血小板計(jì)數(shù)均為正常；⑻排除紫癜性腎炎或腎型。各組患兒的年齡、性別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：參考Fessatou及有關(guān)報(bào)道[5]，予以修改，按下述3項(xiàng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)分相加即為總積分。⑴紫癜分布：將紫癜分為5個(gè)部位，即雙足和雙小腿、雙上肢、雙大腿、腰臀及其他部位；無皮損為0分，1個(gè)部位受累為1分，2個(gè)部位受累為2分，3個(gè)及其以上部位受累為3分。⑵腹部癥狀和（或）大便常規(guī)隱血：無腹痛為0分；輕微腹痛和（或）大便常規(guī)（+）為1分；中度腹痛和（或）大便常規(guī)（++）為 2分；重度腹痛和（或）大便常規(guī)（+++）為3分。⑶關(guān)節(jié)癥狀、體征：無關(guān)節(jié)痛為0分；關(guān)節(jié)痛和（或）輕微腫脹（正常行走）為1分；關(guān)節(jié)痛和（或）輕微中度腫脹（跛行）為2分；關(guān)節(jié)痛和（或）重度腫脹（抗拒行走）為3分。療效判定標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床痊愈：癥狀和皮損完全消失；⑵顯效：癥狀消失，皮損消退≥80%；⑶有效：癥狀明顯減輕，皮損消退≥30%；⑷無效：癥狀改善不明顯，皮損消退＜30%。總有效率為痊愈加顯效。治療8d后進(jìn)行療效判定。臨床觀察指標(biāo)：臨床癥狀消失時(shí)間、不良反應(yīng)。

1.2方法對(duì)照組患兒予以常規(guī)治療，包括臥床休息，避免可疑過敏原，清除感染，鈣劑、維生素C、西咪替丁靜滴等。治療組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上靜滴復(fù)方甘草酸苷 1-2mg/(kg·d)，1 次/d，最大量為 2mg/(kg·d)，治療 8d。

1.3趨化因子受體CCR3、CCR5的測(cè)定 分別采集HSP患兒入院當(dāng)天及治療8d后 （試劑均購自深圳晶美生物工程有限公司上海分公司）清晨抽取靜脈血2ml，用肝素抗凝后立即送檢，4個(gè)試管中各加入100μl全血，均加入抗人CD4單克隆抗體 （美國Phar Minger公司出品）20μl；之后分別加入抗人FITC-CCR3單克隆抗體、同型陰性對(duì)照鼠IgG2a、抗人FITC-CCR5單克隆抗體、同型陰性對(duì)照鼠IgG2b各20μl（均為美國R&D System公司出品）。室溫避光孵育20min，每管加入溶血?jiǎng)–altag公司）100ul，室溫避光孵育15min。加入1ml蒸餾水室溫避光放置15min，待溶血完全后離心（1500r/min，5min）；棄去上清，用PBS液混勻后上機(jī)檢測(cè)（美國B.B公司的FACSCalibur流式細(xì)胞儀）。

1.4統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （x±s）表示。用SPSS 18.0軟件分析，兩組間差異比較使用單因素方差分析，對(duì)療效的分析采用重復(fù)測(cè)量的方差分析；計(jì)數(shù)資料用相對(duì)量進(jìn)行描述，差異比較使用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組過敏性紫癜比較，治療組療效顯著高于對(duì)照組，治療時(shí)間短于對(duì)照組，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 1，表 2。

表1　治療組和對(duì)照組臨床效果的比較

表2　治療組和對(duì)照組的癥狀、體征消失時(shí)間比較（d，x±s）

2.2治療前，兩組CCR3、CCR5水平 無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

治療后，兩組CCR3水平均下降，CCR5水平均升高，對(duì)比治療前，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3　治療前后治療組和對(duì)照組CCR3、CCR5的比較

對(duì)治療組和對(duì)照進(jìn)行重復(fù)測(cè)量的方差分析，結(jié)果顯示，P＜0.05，說明治療組與對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，治療組的治療療效優(yōu)于對(duì)照組。見表4。2.3兩組均未見不良反應(yīng)。

表4　療效的重復(fù)測(cè)量的方差分析結(jié)果

3　討論

CCR是近年來提出的新概念，是趨化因子或稱趨化蛋白的受體，與趨化因子（一種具有趨化作用的細(xì)胞因子，在調(diào)控免疫細(xì)胞定向遷移中有著重要作用）結(jié)合后能激活各類白細(xì)胞，促進(jìn)它們游走、聚集引起炎癥反應(yīng)。T細(xì)胞在特定組織中浸潤，發(fā)揮特異性免疫效應(yīng)的一個(gè)重要原因在于T細(xì)胞其表面趨化因子受體的表達(dá)。趨化因子受體與相應(yīng)的趨化因子結(jié)合后介導(dǎo)Th細(xì)胞在不同的組織中遷移浸潤，也是調(diào)節(jié)Thl/Th2優(yōu)勢(shì)性反應(yīng)的重要因素。不同的趨化因子受體差異性地表達(dá)于Th1和Th2細(xì)胞表面，CCR5、CCR3分別特定性表達(dá)于Th1、Th2 細(xì)胞[6，7]。 本文采用 CCR5/CCR3 作為 Th1細(xì)胞/Th2細(xì)胞特異性的表面標(biāo)志來測(cè)定Th1細(xì)胞及Th2細(xì)胞的數(shù)量，比較治療前后的變化。

復(fù)方甘草酸苷是由0.2%甘草酸苷、0.1%半胱氨酸和2%的甘氨酸配制的復(fù)方制劑，具有較強(qiáng)的抗炎、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)及對(duì)肝細(xì)胞膜的直接保護(hù)作用，其中甘草酸苷具有較強(qiáng)的穩(wěn)定細(xì)胞膜、抑制肥大細(xì)胞、釋放組織胺抑制局部反應(yīng)、抑制花生四烯酸誘導(dǎo)的皮膚炎性反應(yīng)等作用。同時(shí)還具有活化T細(xì)胞誘發(fā)干擾素Y，活化NK細(xì)胞增強(qiáng)胸腺外周血T細(xì)胞的分泌功能，發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用。本研究顯示，治療組臨床癥狀、體征消失的時(shí)間明顯縮短，且療效顯著優(yōu)于對(duì)照組；治療后CCR3水平降低，CCR5水平升高，對(duì)比治療前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），其中治療組的差別顯著大于對(duì)照組，證實(shí)了復(fù)方甘草酸苷治療HSP療效確切，作用機(jī)制可能是通過下調(diào)CCR3表達(dá)，上調(diào)CCR5表達(dá)，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡來發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用。且在本研究中，未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。因此，治療兒童過敏性紫癜，復(fù)方甘草酸苷是一種理想的輔助用藥，具有很好的應(yīng)用前景和臨床價(jià)值。

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