乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性與乙肝病毒核酸載量的相關(guān)性

楊正南

(江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團儀征醫(yī)院， 江蘇 儀征 211900)

乙型病毒性肝炎(viral hepatitis type B)又叫乙肝，是臨床上常見的傳染性疾病。此病是由乙肝病毒(HBV)感染引起的。目前，我國的乙肝病毒攜帶者約占全世界乙肝病毒攜帶者的47.24 %。乙肝表面抗原 (HBsAg)是乙肝病毒的外殼，本身不具有傳染性，只具有抗原性。因此，當患者的HBsAg呈陽性或低水平陽性時，則表明其可能感染了乙肝病毒。但是，不同的實驗室對HBsAg低水平陽性的檢測結(jié)果存在較大差異，這就有可能造成不同的診斷結(jié)果[1]。而對HBsAg是否呈低水平陽性的判斷，直接關(guān)系到患者的診斷結(jié)果和后續(xù)治療。因此，臨床上積極研究對HBsAg低水平陽性樣本進行有效確認的方法，對降低乙型病毒性肝炎的誤診率具有十分重要的意義。基于此，筆者對2014年6月至2016年5月期間江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團儀征醫(yī)院收治的80例疑似HBsAg低水平陽性患者進行了以下研究。

1　資料與方法

1.1　一般資料

本次研究的對象為2014年6月至2016年5月期間江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團儀征醫(yī)院收治的80例疑似HBsAg低水平陽性患者。在這80例患中，有男性患者58例，女性患者22例，其年齡為18～70歲，平均年齡為（35.25±4.64）歲。此項研究已得到該院醫(yī)學倫理委員會的批準，且患者均自愿參與本次研究，并簽署了參與本次研究的知情同意書。

1.2　方法

1.2.1進行血清HBsAg檢測的方法 1）在檢測當日的清晨，抽取本組患者5ml的空腹靜脈血。2）將血樣放置1 h后，對血樣進行10min左右的離心處理（處理速度為3000 r/min），并分離出血清。3）采用磁微粒化學發(fā)光法對這些患者的血清樣本進行HBsAg檢測。在檢測期間，檢驗人員須嚴格按照乙型肝炎表面抗原定量試劑盒（產(chǎn)品批號：20170317）的操作規(guī)程進行相關(guān)操作。使用的儀器為Autolumo A200 型全自動化學發(fā)光測定儀，試劑盒與儀器均來自鄭州安圖生物工程股份有限公司。在檢驗人員完成相關(guān)操作后，儀器可自動完成檢測并判斷監(jiān)測結(jié)果，當患者血清HBsAg的結(jié)果＞0.05 IU/mL時，即可判斷其血清HBsAg呈陽性。

1.2.2進行血清HBV-DNA載量檢測 1）對經(jīng)使用磁微粒化學發(fā)光法檢測出血清HBsAg呈低水平陽性的血液標本進行編號，并留取標本中HBV-DNA的成分，以做為進行血清HBV-DNA載量檢測之用。2）采用PCR-熒光探針法對帶有編號的血液標本進行HBV-DNA載量檢測。在檢測期間，檢驗人員須嚴格按照乙型肝炎病毒核酸定量試劑盒上熒光定量聚合酶鏈反應的說明書進行相關(guān)操作。使用的儀器為美國ABI 7000 型實時熒光定量PCR儀，HBV-DNA呈陽性的判斷標準為[2]：每毫升核酸拷貝數(shù)（Copies/ml）＞500。

1.3　統(tǒng)計學方法[3]

將本次研究中的數(shù)據(jù)錄入到SPSS 22.0軟件中進行處理，計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用%表示，采用X2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

采用磁微粒化學發(fā)光法對這80例患者進行HBsAg檢測的結(jié)果顯示，在這80例患者中，僅有23例患者的HBsAg呈低水平陽性（占28.75 %）。然后，再采用PCR-熒光探針法對上述23例患者進行HBV-DNA載量檢測。結(jié)果顯示，在這23例患者中，只有15例患者的血清中含有HBV-DNA（占65.22 %），其HBV-DNA的平均核酸載量值為7.306。

3　討論

在臨床上，采用磁微粒化學發(fā)光法對患者進行HBsAg檢測，并得出COI（乙肝表面抗原定量）的水平在1.00～50.00之間，即可認定其HBsAg呈弱陽性。雖然采用磁微粒化學發(fā)光法檢測HBsAg結(jié)合了機體的抗體、抗原免疫反應與發(fā)光原理，具有檢測的速度快、敏感度高、線性范圍寬、試劑貯存期較長、操作簡單等操作優(yōu)勢，但一旦遇到HBsAg的檢測表現(xiàn)在弱陽性灰區(qū)時，就不能準確地判斷患者是否感染了乙肝病毒。患者在感染了乙肝病毒之后，形成病毒的完整顆粒需要由病毒蛋白和核酸共同進行編碼復制，而在HBV 編碼的5個開放閱讀框架中，HBsAg的編碼區(qū)位于第3個閱讀框架，HBsAg只是HBV-DNA的外殼蛋白，而其中是否含有HBV，并不能確定[4]。當HBV感染人體后，還存在一段時間的“窗口期”，即當人體感染HBV后，其機體的免疫功能會產(chǎn)生免疫反應，消滅HBV，但不能產(chǎn)生HBsAb (乙型肝炎表面抗體)。而HBsAb一般在患者感染急性乙肝病毒的后期或者HBsAg 消失一段時間后才會出現(xiàn)，但在這個“窗口期”內(nèi)HBsAg和HBsAb 都無法被檢出。即使PCR實時熒光定量檢測技術(shù)可以準確、及時的診斷感染性疾病，但依然無法突破“窗口期”這個病毒復制與人體免疫機制的難題。

HBsAg 的出現(xiàn)常伴隨HBV的存在 , 因此 HBsAg 是已感染 HBV 的標志。通常情況下，HBsAg存在于HBV感染患者的血液、唾液、乳汁、汗液、精液、陰道分泌物及其他分泌物中。一般在感染乙肝病毒2～6個月后，到其谷丙轉(zhuǎn)氨酶合成量升高前的2～8 周這段期間內(nèi)，可在患者的血清中檢測出 HBsAg呈陽性。如果此時患者的HBsAg呈現(xiàn)出低水平陽性，則可使用PCR實時熒光定量檢測儀來進一步檢測其體內(nèi)HBV-DNA的具體含量[5]。PCR實時熒光定量檢測技術(shù)可以直接測定病毒核酸載量，它有效地融合了光化學技術(shù)、基因擴增與分子雜交機理，檢測的靈敏度較高，可以充分實現(xiàn)對擴增產(chǎn)物的自動分析，并反映出HBV的實際感染狀態(tài)。在本次研究中，筆者通過分析HBsAg 低水平陽性與HBV-DNA載量之間的關(guān)系可以準確診斷出HBsAg低水平陽性的HBV感染患者的感染情況，為醫(yī)生的臨床診斷提供有效、可靠的數(shù)據(jù)支撐，從而避免在無法準確診斷的情況下，使乙型肝炎病毒通過輸血、器官移植等途徑傳播感染。

相關(guān)的臨床研究結(jié)果表明，當患者HBsAg呈現(xiàn)低水平陽性，且其HBV-DNA載量的均值＜500時，即可表明其體內(nèi)存在HBV的外殼，但不存在HBV-DNA，故不具有病毒的復制性和傳染性；但是，當患者HBsAg呈現(xiàn)弱陽性或者陽性，且其HBV-DNA載量的均值＞500時，即可診斷其已經(jīng)感染了HBV，其體內(nèi)存在完整的HBV, 且具有病毒的復制性和傳染性[6]。本次研究的結(jié)果顯示，采用磁微粒化學發(fā)光法對這80例患者進行HBsAg檢測的結(jié)果顯示，在這80例患者中，僅有23例患者的HBsAg呈低水平陽性（占28.75 %）。然后，再采用PCR-熒光探針法對上述23例患者進行HBV-DNA載量檢測。結(jié)果顯示，在這23例患者中，只有15例患者的血清中含有HBV-DNA（占65.22 %），其HBV-DNA的平均核酸載量值為7.306。這說明，通過磁微粒化學發(fā)光法檢測出的HBsAg低水平陽性患者，其體內(nèi)不一定含有乙肝病毒，只能表明他們體內(nèi)含有乙肝病毒的蛋白外殼或者呈現(xiàn)假陽性，也有可能其正處于乙肝潛伏期或慢性乙肝發(fā)展期，而蛋白外殼中是否含有乙肝病毒核酸，則需要進一步結(jié)合PCR-熒光探針法進行檢測診斷。

[1]周麗英,蔣理.乙型肝炎病毒核酸載量與乙型肝炎病毒大蛋白的相關(guān)性研究[J].中華疾病控制雜志,2014,18(01)：39-42.

[2]李小永,溫懷凱,陶洪群,等.乙型肝炎患者病毒核酸載量與乙型肝炎病毒外膜大蛋白含量相關(guān)性的研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2013,20(04)：793-794.

[3]趙倩瑜,張俊峰,衛(wèi)紅偉.乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性血清的病毒核酸載量分析[J].中國現(xiàn)代藥物應用,2014,25(15)：28-29.

[4]黃勁松,張軍霞,劉世國,等.乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性血清的病毒核酸載量分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2014,23(06)：782-783.

[5]黃學忠,林佩佩,陳曉飛.乙型肝炎病毒核酸載量分析與血清標志物檢測的應用評價[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2013,19(04)：311-312.

[6]趙碎娟,孫根妹,鄭明波.HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者抗病毒治療中血清表面抗原大蛋白水平與乙型肝炎病毒核酸之間的關(guān)系[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2012,14(04)04：818-820.