電針“長強”穴對缺血缺氧腦損傷大鼠行為學的影響※

黃倩茹　薩喆燕　潘曉華　蘭彩蓮　萬　隆　許金森

新生兒缺血缺氧性腦病（Hypoxic-Ischemic Brain Damage，HIBD）指新生兒在胎兒時期和或出生后因為窒息而導致的顱腦損傷，是引起新生兒死亡和嬰幼兒神經系統功能障礙的主要因素[1-3]。研究表明，發展中國家HIBD發病率達每千名活產嬰兒26例，約20%～25%嚴重HIBD引起死亡，約25%嚴重HIBD的新生兒出現永久性的神經功能障礙[4]。運用行為學指標可對神經功能的損傷進行測評，以反映神經系統損傷的程度、部位及治療效果。近些年，針灸在兒童缺血缺氧性腦損傷的治療中取得一定療效，越來越多學者通過研究動物模型的行為學表現，為HIBD新生兒的治療提供一定的理論依據。在長期的臨床過程中，我們發現針刺“長強”穴可改善發育遲滯等腦病患兒的臨床癥狀[5]。因而本實驗擬采用電針“長強”穴對HIBD新生大鼠進行干預，觀察電針“長強”穴對HIBD大鼠懸吊及傾斜板試驗的影響，探討“長強”穴臨床治療HIBD新生兒的理論基礎。

1　材料與方法

1.1實驗動物及分組 福建省中醫藥研究院實驗動物中心所提供的購自福建醫科大學實驗動物中心的7日齡SD仔鼠，體質量（15±5） g，雌雄不限 (許可證號SCXK(閩)2012-0001)。仔鼠飼養于恒溫（22℃）、恒濕（50%） 及每日12 h日光燈明暗交替 (明：6:00～18:00，暗：18:00～6:00)的實驗室中。待仔鼠生長至7日齡時，予以稱重，去除體重過低鼠 (＜12 g)，隨機選取SD仔鼠8只予分離左側頸總動脈但不結扎剪斷，亦不做缺氧處理作為假手術組，余仔鼠予以左側頸總動脈結扎、剪斷及缺氧后制備缺血缺氧大鼠，將造模成功的仔鼠分為模型組、長強組及非穴組各8只。

1.2主要儀器及試劑 手術器械（北京醫療器械廠），恒溫箱水浴箱（型號700，中國），SDZ-II型華佗牌電子針療儀（蘇州醫療用品廠有限公司），自制常壓艙：60 cm×50 cm×40 cm，8%O2-92%N2混合氣（福州華鑫達工業氣體有限公司）。

1.3造模 依照Rice法[6]，運用Nakajima等[7]改良的動脈結扎法建立缺血缺氧動物模型。在保持室溫25℃左右的環境下，腹腔注射10%水合氯醛將新生7日齡SD大鼠予以麻醉，將大鼠仰臥位四肢固定于小手術板上，用75%酒精予大鼠頸部皮膚消毒后行頸前中切口，無菌條件下分離大鼠左側頸總動脈，運用外科7-O滅菌手術絲線雙道結扎大鼠左側頸總動脈后，將絲線中間剪斷，予以傷口縫合并再次消毒皮膚后將大鼠放入恒溫箱(32.5℃)2 h。隨后將手術大鼠放入底層鋪有鈉石灰(以吸收CO2和濕氣)并置于37℃電熱恒溫水浴中的常壓缺氧艙中（8%O2-92N2混合氣） 2 h。后再置于室溫下約1～2 h，待其狀態尚可后放回母鼠籠行母乳喂養。假手術組只分離左側頸總動脈但不結扎剪斷，縫合皮膚后不做缺氧處理，后與模型組同時返回母鼠籠中飼養。

1.4治療方法 長強組仔鼠長至第10日齡（postnatal 10 day，PN10），用布和皮筋固定，用0.25×13 mm毫針 (雙極針)直刺長強穴（長強穴：參照《實驗針灸學》[8]，當尾骨端和肛門連線中點）深度7.8 mm，電針接在雙極針兩端，刺激20 min（連續波，頻率為2 Hz，強度為2 mA），連續治療10 d為1個療程，共1個療程；非穴組取右脅肋下緣一橫指處，余操作同長強組；模型組在相同條件下飼養，除布和皮筋固定，不予干預。

1.5指標檢測及方法

1.5.1懸吊試驗 干預前后在距桌面高45 cm處固定玻璃棒（0.5 cm直徑），令大鼠的前腿抓住玻璃棒后開始計時，記錄其掉下的時間，單位：秒（S）。

1.5.2傾斜板試驗 干預前后將大鼠頭部垂直朝下放置于45°斜面上，同時記錄大鼠轉頭向上135°時間，單位：秒 （s)。

1.6統計學方法 應用SPSS 19.0軟件對實驗數據進行統計，P＜0.05為差異有統計學意義，P＞0.05為差異無統計學意義。滿足正態分布者采用單因素方差分析，不滿足正態分布者采用非參數檢驗。

2　結果

2.1懸吊試驗 干預前：與假手術組相比，模型組、非穴組及長強組的懸吊時間均下降，有顯著性差異 (P＜0.05)。干預后：與假手術組相比，模型組及非穴組的懸吊時間下降，有顯著性差異 (P＜0.05)，長強組的懸吊時間下降，差異無統計學意義 (P＞0.05)；與模型組相比，長強組的懸吊時間升高，有顯著性差異 (P＜0.05)，非穴組的懸吊時間上升，差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1　懸吊試驗　（x±s，s）

2.2傾斜板試驗 干預前：與假手術組相比，模型組、長強組及非穴組的轉頭時間均上升，有顯著性差異(P＜0.05)。干預后：與假手術組相比，模型組、非穴組及長強組的轉頭時間上升，有顯著性差異 (P＜0.05)；與模型組相比，長強組的轉頭時間下降，有顯著性差異 (P＜0.05)，非穴組的懸吊時間上升，差異無統計學意義 (P＞0.05)。見表2。

表2　傾斜板試驗　（x±s，s）

3　討論

隨著現代醫療的先進性，HIBD的死亡率較前明顯下降，然其后遺癥的出現率卻逐漸上升。HIBD是一個復雜的損傷過程，其包括了炎癥級聯反應、能量代謝障礙及興奮性氨基酸的釋放等，常表現為智力和運動發育受損、皮質盲、神經性聽力損失、智力殘疾、腦性麻痹、癲癇和腦癱等[9-10]。盡管大部分HIBD患者皆經臨床治療，但仍有約40%重度HIBD患兒在18～24月齡時出現神經性殘疾[12-13]。因而如何有效治療HIBD患者成為社會熱點話題。

中醫學認為缺血缺氧腦損傷的病因在于父母精氣血虧虛引起胎兒先天之氣欠缺，進而導致胎氣不足。而腦髓損傷等后天的失宜，更進一步促使本證發生及發展。《古今醫統·五軟五硬》云：“日月不足而生者，或服墜胎之劑不去，而竟成胎者，耗傷真氣”，表明HIBD的病機為脾胃虧損、氣血虧虛及肝腎不足。中醫學療法中，以針灸最具代表，其可疏通機體經氣，調整機體氣血，進而增加組織器官血供，促使腦組織功能的代償和恢復。在長期的臨床過程中，我們發現針刺“長強”穴可改善發育遲滯患兒的臨床癥狀療效顯著[4]。《難經》云：“督脈者，起于下極之俞……入屬于腦。”長強穴即“下極之俞”，提示古人認為長強是督脈起始穴，且督脈同腦密切相關；臟腑精微多通過督脈上行于腦[14]，若督脈虧虛，則氣血、津液未能上行入腦，造成腦髓的空虛[15]。然而由于其基礎研究尚未完善，臨床推廣欠佳。

HIBD是一種腦功能障礙的神經系統疾病[16]。行為學的檢測，是神經病學疾病診斷及科學研究的重要組成。運用行為學指標對神經功能的損傷進行測評，以反映神經系統損傷的程度、部位及治療效果。越來越多學者通過研究動物模型的行為學表現，為HIBD新生兒的治療提供一定的理論依據。如，馬惠芳、吳至鳳等[17-18]研究表明，HIBD大鼠予針刺后神經癥狀有顯著改善。眾所周知，懸吊試驗和斜坡試驗是檢測動物運動協調能力較靈敏的行為學指標[19]；Pazaiti等[20]學者的研究結果表明，HIBD可引起大鼠模型肌張力的異常及平衡協調能力的改變，表現為抓握懸吊棒時間及傾斜板轉頭時間異常。因而，本研究建立缺血缺氧腦損傷動物模型，通過“長強”穴的干預觀察其懸吊及傾斜板試驗的改變，進而分析“長強”穴對缺血缺氧大鼠行為學的改善作用。

干預前，本實驗中懸吊及傾斜板試驗結果顯示：與假手術組相比，模型組、長強組及非穴組的時間有顯著性差異 (P<0.05)，提示缺血缺氧腦損傷大鼠存在平衡協調和肌張力異常等神經運動功能改變，這可能與缺氧缺血的易損部位大腦皮層和海馬的損傷存在聯系。上述結果與Pazaiti等[19]學者研究結果一致。干預后，本實驗中懸吊試驗結果顯示：與假手術組相比，模型組及非穴組的懸吊時間下降，有顯著性差異 (P<0.05)，長強組的懸吊時間下降，差異無統計學意義(P>0.05)；與模型組相比，長強組的懸吊時間升高，有顯著性差異 (P<0.05)，非穴組的懸吊時間上升，差異無統計學意義 (P>0.05)，提示電針“長強”穴可改善缺血缺氧腦損傷大鼠的肌張力，促使其趨于正常，而非經非穴刺激幾乎無療效，進一步驗證了經穴“長強”的療效性。另本實驗傾斜板試驗結果顯示：與假手術組相比，模型組、非穴組及長強組的轉頭時間上升，有顯著性差異 (P<0.05)；提示與模型組相比，長強組的轉頭時間下降，有顯著性差異 (P<0.05)，非穴組的轉頭時間上升，差異無統計學意義 (P>0.05)，亦提示了電針“長強”穴可改善缺血缺氧腦損傷大鼠的平衡協調能力，但在觀察期內其療效無懸吊顯著，而非經非穴刺激幾乎無療效，進一步驗證了經穴“長強”的療效。綜上我們推斷，電針“長強”穴可改善缺血缺氧大鼠的行為學能力，為缺血缺氧疾病的有效治療方式之一。

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