固相萃取-氣相色譜法測定油料和植物油中草除靈

韋丹青，胡永健，楊亞琴，劉進璽，王會鋒，馮書惠，曹　秀，鐘紅艦

（河南省農業科學院 農業質量標準與檢測技術研究所，鄭州　450002）

草除靈（benazolin-ethyl）化學名稱為4-氯-2-氧代苯并噻唑-3-基乙酸乙酯，分子式為C11H10ClNO3S，商品名好實多、高特克等。其為選擇性、內吸傳導型芽后除草劑，用于油菜、苜蓿等防除多種一年生闊葉雜草[1]。草除靈對油菜田豬殃殃和繁縷等高效，對油菜安全[2-3]。雖然草除靈相對安全，但長期使用也會造成一定的污染，國內國際相關限量標準也相繼出臺。我國規定草除靈在油菜籽中的最大殘留限量為0.2 mg/kg[4]；2004年，草除靈被歐盟列入禁止銷售和使用的農藥。有關草除靈原藥及制劑的液相、氣相色譜檢測方法已有報道[5-7]，但是對草除靈殘留量的測定及其降解的研究甚少[8-10]。本文中草除靈殘留采用乙腈提取，弗羅里硅土柱凈化，氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）測定，建立氣相色譜定量分析油料和植物油中草除靈殘留量的方法。

1　材料與方法

1.1　材料與試劑

固相萃取（SPE）柱（弗羅里硅土，1 000 mg，6 mL），上海月旭公司。油菜籽、大豆油，市售產品。草除靈標準品（＞99.5%），德國Dr.Ehrenstorfer公司；乙腈（色譜純），默克化工技術（上海）有限公司；正己烷（色譜純），賽默飛世爾科技（中國）有限公司；丙酮（色譜純），美國J.T.Baker公司；其余試劑為分析純；超純水由Milli-Q超純水系統制。

1.2　儀器與設備

島津GC-2010 Plus氣相色譜儀（配ECD檢測器），日本Shimadzu公司；色譜柱TR-5ms（30 m×0.25 mm，0.25 μm），美國Thermo Fisher Scientific公司；分析天平（精度0.000 1 g），瑞士Sartorius公司；分析天平（精度0.01 g），英國艾德姆衡器（武漢）有限公司；自動均質儀，美國Tomtec公司；Milli-Q超純水發生器，美國Millipore公司；RE-52AA型旋轉蒸發器，上海亞榮生化儀器廠；QGC-12T氮氣吹干儀，上海全島公司；HY-6雙層搖瓶機，金壇市醫療儀器廠；GL-21B高速冷凍離心機，上海安亭科學儀器廠；SK-1快速混勻器，金壇市中大儀器廠；SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵，鄭州長城科工貿有限公司。

1.3　試驗方法

1.3.1溶液的配制

稱取草除靈標準品10 mg（精確至0.000 1 g），用丙酮溶解并定容至10 mL，制得1 g/L的標樣儲備液，于4℃避光儲存。根據需要，將儲備液用正己烷稀釋成不同質量濃度的標樣工作溶液，即用即配。

2%丙酮正己烷溶液：量取丙酮2 mL，用正己烷溶解并定容至100 mL。

6%丙酮正己烷溶液：量取丙酮6 mL，用正己烷溶解并定容至100 mL。

1.3.2樣品前處理

1.3.2.1樣品的提取

將油料樣品粉碎，使其通過425 μm的標準網篩。稱取粉碎油料樣品5.00 g（精確至0.01 g）于100 mL均質瓶中，加入20 mL水浸泡2 h。加入50 mL乙腈，在勻漿機中高速勻漿2 min后過濾，濾液收集到裝有5～7 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，蓋上塞子，劇烈振蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。從具塞量筒中吸取10 mL乙腈溶液，轉入圓底燒瓶，40℃水浴旋轉蒸發至近干，加入2.0 mL正己烷，蓋上鋁箔，待凈化。

稱取攪拌均勻的植物油樣品2.00 g（精確至0.01 g）于100 mL離心管中，加入10 mL正己烷溶解后，再加入50 mL正己烷飽和乙腈溶液，充分混合后振蕩30 min，3 000 r/min離心5 min，吸取10 mL乙腈溶液，轉入圓底燒瓶中，40℃水浴旋轉蒸發至近干，加入2.0 mL正己烷，蓋上鋁箔，待凈化。

1.3.2.2樣品的凈化

將弗羅里硅土萃取柱（1 000 mg，6 mL）依次用5 mL丙酮＋正己烷（體積比為1∶9）、5 mL正己烷活化，當溶劑液面至柱吸附層表面時，立即倒入1.3.2.1中待凈化溶液，用5 mL 2%丙酮正己烷溶液沖洗燒杯后淋洗弗羅里柱，然后用10 mL 6%丙酮正己烷溶液洗脫，收集全部洗脫液，40℃水浴中氮氣吹干，用正己烷定容至2.0 mL，待GC-ECD測定。

1.3.3色譜條件

色譜柱：TR-5ms柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；檢測器：ECD檢測器，溫度310℃。載氣為N2（＞99.999%），流速1.0 mL/min。進樣體積1 μL，不分流模式進樣，進樣口溫度280℃。升溫程序：初始柱溫為120℃，保持1 min；然后以20℃/min升至240℃；再以3℃/min升至270℃，保持1 min；最后以20℃/min升至290℃，保持1 min。在上述色譜條件下，草除靈的保留時間為9.958 min。0.01 mg/L草除靈標樣溶液色譜圖見圖1。

圖1　0.01 mg/L草除靈標樣溶液譜圖

2　結果與分析

2.1　提取溶劑的選擇

在農藥殘留分析中，常以甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯等作為提取溶劑。由于乙腈對農藥的提取效率高，并能有效減少油脂與色素的干擾，且在氯化鈉飽和的狀態下，乙腈能與水清晰分層，而不需要引入非極性溶劑[11]。因此，本試驗選擇乙腈作為提取溶劑。油料選取油菜籽樣品，植物油選取大豆油樣品進行試驗。試驗結果證明：乙腈對油菜籽樣品中草除靈的提取效果很好，能滿足農藥殘留檢測的要求。乙腈提取大豆油樣品時會溶解部分油脂，對樣品凈化及分析造成一定的干擾，因此使用正己烷飽和乙腈溶液作為提取溶劑，則提取液中的油脂含量大大減少。

2.2　凈化柱及淋洗液的選擇

弗羅里硅土柱又稱硅鎂復合吸附劑，可從非水溶液中吸附低極性和中等極性化合物，具有靈敏度高，吸附容量大，穩定性好等特點[12]。其常用于農藥殘留檢測的凈化、分離等，尤其適用于有機氯類農藥。采用不同洗脫溶劑進行弗羅里硅土柱凈化效果驗證。選用弗羅里硅土柱（1 000 mg，6 mL），依次用5 mL丙酮＋正己烷（體積比1∶9）、5 mL正己烷活化，將2 mL質量濃度0.025 mg/L的草除靈標樣溶液（正己烷為溶劑）轉入弗羅里硅土柱，然后用5 mL不同體積分數的丙酮正己烷溶液洗脫，收集洗脫液，蒸干后用正己烷溶解，待GC-ECD測定。回收率結果見表1。由表1可知：5 mL 6%丙酮正己烷溶液可將目標

表1　不同體積分數丙酮正己烷溶液洗脫對回收率的影響 %

物洗脫完全；8%丙酮正己烷溶液極性更大，會有相對多的雜質被洗脫。

2.3　線性相關性測定

用1 mg/L標樣儲備液配制質量濃度分別為0.001,0.005,0.01,0.02,0.06,0.10 mg/L草除靈標樣溶液，各取1 μL進行氣相色譜測定。以草除靈色譜峰的峰面積為縱坐標，標樣溶液質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線（見圖2）。結果顯示，草除靈的質量濃度與峰面積呈良好的線性關系，線性方程為y=7 233 498 x＋15 621，相關系數為0.999 4。

圖2　草除靈標準曲線

在上述色譜條件下，草除靈的最小檢出量為1.0×10-12g；在上述提取方法和測定條件下，草除靈的定量限（LOQ）為0.05 mg/kg。

2.4　方法準確度和精密度測定

選取油菜籽和大豆油空白樣品，以0.05,0.10,0.20,0.40 mg/kg為添加水平進行回收率試驗。樣品添加草除靈后，渦旋30 s，靜置30 min，待草除靈被樣品充分吸收后，按照上述樣品前處理方法和儀器條件進行測定，每個水平重復5次，結果見表2。

表2　方法加標回收率和相對標準偏差（n=5）

由表2可知：草除靈的平均回收率為74.4%～110.9%，相對標準偏差為3.1%～6.8%。方法符合農藥殘留檢測的要求。油菜籽和大豆油空白樣品及添加色譜圖見圖3～圖6。

圖3　油菜籽空白譜圖

圖4　油菜籽添加草除靈（0.1 mg/kg）譜圖

圖5　大豆油空白譜圖

圖6　大豆油添加草除靈（0.1 mg/kg）譜圖

3　結論

本文建立了油料和植物油中草除靈殘留量的氣相色譜檢測方法。此方法的回收率為74.4%～110.9%，相對標準偏差為3.1%～6.8%，LOQ為0.05 mg/kg。結果表明，本方法可滿足油料和植物油中草

除靈殘留量的分析要求。

[1]Schnitzler F,Lavorenti A,Berns A E,et al.The Influence of Maize Residues on the Mobility and Binding of Benazolin:Investigating Physically Extracted Soil Fractions[J].Environmental Pollution,2007,147(1):4-13.

[2]張宏軍,朱文達,喻大昭,等.烯草酮·草除靈防除油菜田雜草的效果[J].湖北農業科學,2008,47(4):424-426.

[3]楊賡,施娟娟,李明,等.草除靈廢水可生物降解性及共基質代謝作用快速測定研究[J].現代農藥,2002,1(2):30-33.

[4]中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會,中華人民共和國農業部,國家食品藥品監督管理總局.GB 2763—2016食品中農藥最大殘留限量[S].北京:中國標準出版社,2016.

[5]魏翔.草除靈的液相色譜分析[J].山東化工,2003,32(1):30-32.

[6]Cai T M,Qian L H,Cai S,et al.Biodegradation of Benazolin-ethyl by Strain Methyloversatilis sp.cd-1 Isolated from Activated Sludge[J].Current Microbiology,2011,62:570-577.

[7]楊開蓮,謝承禮,周岳明.草除靈的氣相色譜分析[J].云南化工,2007,34(1):58-59.

[8]孫惠青,李義強,徐廣軍,等.高效液相色譜法測定草除靈在土壤中降解規律[J].農藥,2012,51(8):587-589.

[9]黃雪,羅俊凱,龔道新,等.高效液相色譜法測定土壤中草除靈和高效氯吡甲禾靈的殘留量[J].農藥學學報,2013,15(1):125-128.[10]孫惠青,李義強,徐廣軍,等.草除靈在油菜植株、油菜籽及土壤中殘留分析方法研究[J].農藥科學與管理,2012,33(8):22-24.

[11]Beyer A,Biziuk M.Applications of Sample Preparation Techniques in the Analysis of Pesticides and PCBs in Food[J].Food Chem,2008,108(2):669-680.

[12]Doong R A,Lee C Y.Determination of Organochlorine Pesticide Residues in Foods Using Soild-Phase Extraction Cleanup Cartridges[J].Analyst,1999,124(9):1287-1289.