腹瀉糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗的價值結果分析

楊 飛

（遼寧省錦州市疾病預防控制中心，遼寧 錦州 121000）

感染性腹瀉是由寄生蟲或各種微生物及其產物所引起的常見腸道傳染病，而小腸結腸炎耶爾森菌為一種重要的感染性腹瀉致病菌，其為革蘭染色進行小桿菌或球桿菌，主要經糞-口途徑進入人體，人類感染該菌后潛伏期為攝食后3～7 d，病程一般為1～3 d，主要表現為急性胃腸炎的癥狀以及腸道外感染，嚴重影響患者的生命健康[1-2]。因此，提高小腸結腸炎耶爾森菌的檢出率，并了解其分布特征對臨床疾病的防治有重要指導性意義[3]。本研究中通過資料回顧性分析，探討不同檢測方法檢驗耶爾森菌感染者的臨床價值，現作以下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取50例于2014年5月至2015年5月我單位接收的腹瀉患者，均符合感染性腹瀉診斷標準（WS271-2007），患者表現為糞便形狀發生改變，每日排便次數不低于3次。50例患者中，女22例，男28例，年齡5個月～70歲，平均（32.49±8.53）歲。

1.2 檢測方法與判斷標準：采集患者新鮮糞便，置于干燥、潔凈無吸水性的有蓋容器內，并保證不混有水、尿液等雜質。之后，分別采用RT-PCR法和培養法對樣本中耶爾森菌感染情況進行檢測。培養：取0.5 g糞便樣本置于Cary-Blair保存液內，并加入45 mL生理鹽水，于16 ℃增菌液內放置并進行培養，時間為18 h。18 h后于CIN平板上取5 μL進行接種，再在25 ℃環境下培養24 h，予以可疑菌落培養、初篩，根據生化試驗結果及初篩結果進行陰性判定，采用標準菌株進行陽性對照。陰性判定標準：不具備陽性菌株的生化反應；陽性判定標準：具有與標準菌株相同的生化反應。RT-PCR法：取0.5 g糞便樣本于16 ℃環境下培養18 h后取，取200 μL予以DNA提取，反應溫度設置為95 ℃，產物擴增長度為154bp，并設立對照組，以反應前后熒光差值作為主要衡量標準。陰性判定標準：樣品擴增后未出現預期大小的條帶；陽性：樣品擴增后出現預期大小條帶。

1.3 觀察指標：觀察兩種檢測方法對小腸結腸炎耶爾森菌的檢測情況，并做比較分析。

1.4 統計學方法：采用SPSS15.0軟件分析及及處理數據，以百分比（%）表示計數資料，當P＜0.05，具有統計學意義，組間數據以卡方檢驗。

2 結 果

RT-PCR法對小腸結腸炎耶爾森菌陽性檢出率為12%，較培養法小腸結腸炎耶爾森菌4%的陽性檢出率明顯更高，具有統計學差異（χ2=4.348，P＜0.05），見表1。

3 討 論

小腸結腸炎耶爾森菌是一種重要的感染性腹瀉致病菌，人類感染該菌后，主要表現為腹瀉、腹痛、發熱等急性胃腸炎癥狀，還可引起活動性關節炎、結節性紅斑、耶氏肝炎，還有心肌炎、敗血癥、腦膜炎及創傷感染等腸道外癥狀，甚至還能由超抗原引起自身免疫性疾病，因此該菌越來越受到全球范圍內人們的普遍重視，且多將該菌列為進出口食品的常規檢測項目[4]。雖然大部分患者主要表現為自限性的腹瀉，但該菌極易侵犯腸系膜淋巴結，使患者成為慢性攜帶者及潛在的傳染源，再加上該菌所特有的超抗原可引發關節炎、敗血癥、甲狀腺疾病等腸外癥狀，對人類的健康造成極大威脅。對耶爾森菌感染進行及時正確診斷，以便進行臨床方案的制定，有賴于準確、快速、簡便檢測方法的建立。通過調查發現，該菌在我國的分布非常廣泛，但既往人們對該菌的檢出率不高，原因是采取的是分離培養聯合生化鑒定方法檢測該菌，而耶爾森菌培養增殖緩慢，分離成功率低[5]。

表1 兩種檢測方法對小腸結腸炎耶爾森菌檢出率的比較[n（%）]

目前臨床上檢驗小腸結腸炎耶爾森菌常使用的方法為RT-PCR和培養法，其中培養法操作簡單，是一種采用人工方法使細菌生長繁殖的技術，其成本低，設備投入少，對檢驗人員的素質要求底，并且該技術在操作過程中可進行精確調控，但其也有一定的缺陷，具體有以下幾方面[6]：①無菌操作嚴格，該檢測方法在培養過程中需嚴重執行無菌操作，否則一旦標本受外界細菌的污染，會導致錯誤結果；②耗時耗力，不易自動化，可能會延誤對疾病的治療以及及時有效的預防控制措施的實施，故該技術對于大規模的流行病學調查往往不適用。RT-PCR法結合cDNA聚合酶鏈式擴增（PCR）和RNA反轉錄（RT）雙重技術的生化技術，其主要原則在于利用相關技術對細胞或組織中的總RNA進行提取，并以其中的mRNA為模板，利用反轉錄酶轉錄呈cDNA，之后行PCR擴增，而檢測基因表達或獲得目的基因。其在細菌檢驗中，靈敏度高，特異性強，在該技術下能分離出高質量的RNA，不含反轉錄沒的抑制劑且保證全長，進而成功合成cDNA，提高檢出的特異度及靈敏度；該技術檢測快速，可使監測鑒定所耗費的時間大大縮短；不易污染；能通過微量的物質得到不少的目的片段，是對樣品進行定量及定性分析。本研究中通過資料回顧性分析結果顯示，RT-PCR法對耶爾森菌的檢出率較培養法顯著要高，差異具有統計學意（P＜0.05），分別為，可見RT-PCR檢測法對耶爾森菌的檢出效果更好，同時其還能對檢驗結果進行定量分析，以便于臨床醫師更好地掌握患者感染情況，并給予合理的治療。但該技術也存在一定的缺陷，具體有以下幾方面：①對操作人員技術素質要求較高；②檢驗試驗中容易出現假陰性及假陽性，得到的片段可能并非目的片段；③其需要的實驗儀器設備昂貴，檢測成本高，使其不適用于基層單位推廣普遍使用及現場快速檢測。綜上所述，RT-PCR檢測法對腹瀉糞便中小腸結腸炎耶爾森菌的檢出效果更好，以便及時予以抗感染治療，對改善患者預后具有更高的臨床意義，建議在臨床推廣應用。

[1] 周旭.腹瀉糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗的價值結果分析[J].中國醫藥指南,2014,12(14)：102-103.

[2] 張景艷,榮幸,張永旭,等.腹瀉糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗的價值分析[J].中國衛生標準管理,2016,7(7)：161-162.

[3] 符倚川,趙艷,高運安,等.兩種方法檢驗腹瀉糞便中小腸結腸炎耶爾森菌的結果比較[J].醫學臨床研究,2016,33(9)：1823-1824.

[4] 姜曉梅,李剛山,王意銀,等.小腸結腸炎耶爾森菌的分離鑒定及毒力基因檢測[J].西南國防醫藥,2015,25(8)：844-846.

[5] 鄭書發,余斐,陳曉,等.2009-2014年浙江省哨點醫院急性腹瀉患者病原監測研究[J].中華預防醫學雜志,2016,50(12)：1084-1090.

[6] 沈麗珍,陳素菜,張愛鳴,等.感染性腹瀉患者病原菌分布與耐藥性研究[J].中華醫院感染學雜志,2015,25(23)：533-534.