桃仁提取液對家兔小腸收縮運動影響的研究*

吳悅 鐘雯雅 倪陸橋 俞婧怡 陳越 盧昌恒 黃亦輝 沈雨莎 李天一 饒芳 儲利勝 潘小平

浙江中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 浙江 杭州 310053

桃仁為薔薇科植物桃或山桃的種子，具有活血祛瘀和潤腸通便之功效［1］。現(xiàn)代研究亦表明，桃仁具有抗凝血、抗菌、活血化瘀等作用，臨床上可用于治療痛經(jīng)、血滯經(jīng)閉、瘀血腫痛、腸燥便秘等多種疾病。《醫(yī)學(xué)啟源》記載桃仁“治大便血結(jié)”，桃仁既能潤腸通便，又善于活血化瘀。《金匱要略》下瘀血湯中用桃仁以活血潤燥［2］。《世醫(yī)得效方》采用五仁丸（包括桃仁、杏仁等組成）治療津枯便秘以及由桃仁、杏仁組成的民間治便秘驗方。桃仁具有通滯開結(jié)功效，宜用于瘀熱內(nèi)結(jié)或氣滯血瘀之便秘，其性質(zhì)平和，為習(xí)慣性便秘之良藥，提示桃仁對胃腸平滑肌收縮運動可能有興奮作用［3］。關(guān)于桃仁的組成成分及藥理作用已經(jīng)得到很多闡明，但是，桃仁是否影響小腸收縮運動以及收縮幅度，未見報道。本文以家兔離體小腸為實驗對象，探索桃仁提取物對家兔離體小腸收縮運動的影響，以便探索其初步機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物：健康家兔4只（購買于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心），實驗前禁食12h。

1.2 主要儀器設(shè)備：RM6240生物信息采集處理系統(tǒng)、HSS-1（B）型恒溫水浴槽、麥?zhǔn)喜劬鶠槌啥純x器廠生產(chǎn)；50521張力換能器由北京新航興業(yè)科貿(mào)有限公司生產(chǎn)。

1.3 實驗試劑：臺氏液：氯化鈉8mg/ml、氯化鉀0.2mg/ml、氯化鈣0.2mg/ml、氯化鎂0.1mg/ml、碳酸氫鈉1mg/ml、磷酸二氫鈉0.05mg/ml、葡萄糖1mg/ml，pH8；硫酸阿托品注射液（批號：H12020384，天津金耀藥業(yè)有限公司）；乙酰膽堿。

1.4 桃仁及水提取液制備：稱取新鮮桃仁100g，粉碎為粗末，直徑約為2mm，加水1000ml，浸泡30min，煮沸1h，過濾后濾渣加水500ml，煎煮30min，過濾。合并濾液，濃縮至200ml備用。桃仁水提取液的濃度為0.5g/ml，4℃冰箱留存?zhèn)溆谩嶒灂r加入臺氏液配成所需工作液濃度。

1.5 實驗方法與步驟：分述如下。

1.5.1 家兔離體腸肌的制備：取健康家兔，實驗前禁食12h，采用20%氨基甲酸乙酯,以5ml/kg劑量麻醉家兔，立即打開腹腔并采取十二指腸空腸腸段，迅速置入盛有氧飽和臺氏液的培養(yǎng)皿中，清洗腸內(nèi)容物，剪去腸系膜，腸管剪成2～3cm的小段，兩端各穿一線并打結(jié)備用。在麥?zhǔn)显〔壑校尤?7℃臺氏液。連接好加氧泵以及通氣玻鉤并供氧，每秒鐘1～2個氣泡。水浴溫度37±0.5℃。

1.5.2 離體小腸收縮運動的記錄：待腸段運動穩(wěn)定后，用RM6240生物信息采集處理系統(tǒng)、及張力換能器記錄腸肌收縮運動，觀察桃仁水提取液對離體小腸收縮運動，以及觀察在乙酰膽堿、阿托品作用下桃仁水提取液對家兔離體小腸收縮運動的影響。設(shè)立正常腸段組（正常組）、桃仁水提取液組、乙酰膽堿+桃仁水提取液組、阿托品+桃仁水提取液組。

1.6 數(shù)據(jù)處理：以正常臺式液中穩(wěn)定的腸段收縮平均振幅為100%，其余各組數(shù)據(jù)以與其相比所得相對值。實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用SPSS17.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 桃仁水提取液對家兔小腸收縮運動收縮振幅的影響：在正常臺氏液中，小腸收縮運動相對穩(wěn)定，平均收縮張力為0.077±0.003g，收縮振幅為100%。加入0.5g/ml濃度的桃仁水提取液3ml、5ml、7ml（終濃度分別為0.075g/ml、0.125g/ml、0.175g/ml）后，家兔小腸收縮張力由正常對照的0.077±0.003g分別增強(qiáng)到0.082±0.002g（P＞0.05）、0.112±0.002g(P＜0.01)、0.124±0.002g(P＜0.01)，家兔小腸收縮運動的振幅分別增強(qiáng)至(108±0.2)%、（146±0.2）%、（162±0.2）%。即桃仁水提取液對家兔離體小腸收縮運動具有明顯促進(jìn)作用，且桃仁水提取液呈濃度依賴性增強(qiáng)家兔小腸收縮運動（詳見圖1、表1）。

2.2 乙酰膽堿作用下桃仁水提液對家兔小腸收縮運動的影響：在正常臺氏液條件下，待小腸收縮運動平穩(wěn)后，加入0.01g/L終濃度的乙酰膽堿溶液，可見小腸收縮運動的振幅明顯增大，促進(jìn)小腸收縮運動運動，收縮力由0.077±0.003g升至0.293±0.037g（n=4,P＜0.05）,家兔小腸收縮振幅由100%增加至(380.2±3.7)%。在此基礎(chǔ)上加入0.5g/ml的桃仁水提取液5ml后，小腸收縮運動的振幅明顯減小，收縮力減弱，收縮力由0.293±0.037g降至0.077±0.002g（n=4，P＜0.05），小腸收縮運動的振幅降至(100±0.2)%，明顯抑制小腸收縮運動。該結(jié)果提示桃仁水提取液對乙酰膽堿具有顯著拮抗作用（詳見圖2、表1）。

2.3 阿托品作用下桃仁水提液對家兔小腸收縮運動的影響：在正常臺氏液條件下，家兔小腸收縮運動平穩(wěn)后，加入0.5mg/ml終濃度的阿托品，家兔小腸收縮運動的振幅明顯減小，收縮力減弱，收縮力由正常對照0.077±0.003g降低到0.053±0.005g（n=4,P＜0.01），小腸收縮運動的振幅由100%減弱至(69±0.5)%。在此基礎(chǔ)上加入0.5g/ml濃度的桃仁水提取液5ml后，家兔小腸收縮運動的振幅有回升，腸道收縮運動明顯增強(qiáng)，收縮力由0.053±0.005g增強(qiáng)至0.092±0.007g（n=4,P＜0.01）。小腸收縮運動有一定恢復(fù)，收縮的振幅提高至（119±0.7）%。表明桃仁水提取液對阿托品具有顯著拮抗作用（詳見圖3、表1）。

圖1 不同濃度桃仁水提取液對家兔小腸收縮運動的影響

表1 乙酰膽堿、阿托品、桃仁水提取液對家兔離體小腸收縮運動的影響

圖2 乙酰膽堿和桃仁水提取液作用下小腸收縮運動收縮情況

圖3 阿托品和桃仁水提取液作用下家兔小腸收縮運動情況

3 討論

桃仁是臨床常用活血化瘀的重要中藥，能夠明顯增加腦血流量，降低腦血管阻力并改善血流動力學(xué)，近年來多用于治療心腦血管疾病。這種重要性可能與其不飽和脂肪酸的組成，亞油酸和油酸的含量有關(guān)［4］。它的主要化學(xué)成分為脂肪油類、苷類、氨基酸和蛋白質(zhì)、揮發(fā)油、甾體和黃酮及其糖苷類化合物［5］。現(xiàn)代藥理研究側(cè)重于分析桃仁的活血化瘀的功效，尚未發(fā)現(xiàn)桃仁提取物可以刺激腸壁增加蠕動而促進(jìn)排便的現(xiàn)象［5］。有報告含有桃仁配方的血府逐瘀湯治療膽汁反流性胃炎，獲得高于西藥治療的總有效率［6］。桃仁富含45%的脂肪油，能提高腸內(nèi)容物粘膜的潤滑性，且具有改善血流阻滯、血行障礙等作用，一直是臨床治療便秘的常用藥物［1］，但是，目前有關(guān)桃仁對胃腸作用的研究甚少。

與大腦、心臟或骨骼肌電信號相比，小腸收縮運動的電信號具有明顯較低的頻率［7］。因此，消化道收縮運動興奮性較低，慢波信號良好，具有自動節(jié)律性收縮的特性，給予離體小腸合適的生存環(huán)境，就可以保持其消化道收縮運動的良好生理特性。這是由于家兔離體腸肌雖已失去外來神經(jīng)的支配，但是壁內(nèi)神經(jīng)叢仍存在，在適宜的條件下，仍能保持收縮運動的特性及腸壁神經(jīng)叢的作用［8］。小腸的節(jié)律性活動是受小腸的基本電節(jié)律（即慢波電位）所控制，易受離子環(huán)境、神經(jīng)遞質(zhì)和激素等生物活性物質(zhì)的影響［9］。本研究結(jié)果表明，桃仁對家兔離體小腸收縮運動具有顯著的加強(qiáng)作用。

乙酰膽堿是膽堿能神經(jīng)末梢釋放的一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，主要通過突觸后膜煙堿型受體和毒蕈堿型受體發(fā)揮其生理作用，其中廣泛分布于胃腸平滑肌，并對小腸具有調(diào)控作用的為M膽堿能受體[10]。因此，可明顯興奮胃腸道收縮運動，使小腸收縮幅度、張力、蠕動增加，具有重要的胃腸道運動調(diào)節(jié)功能。乙酰膽堿激動胃腸平滑肌上的M受體，通過cAMP作為第二信使的細(xì)胞膜信號傳導(dǎo)，導(dǎo)致鈣離子內(nèi)流，興奮小腸平滑肌并產(chǎn)生強(qiáng)烈的收縮運動［11］。阿托品為M受體阻斷劑，競爭性拮抗乙酰膽堿或膽堿能受體激動藥對M受體激動作用，表現(xiàn)出與劑量相關(guān)的抑制腺體分泌、松弛平滑肌、加快心率及升高血壓等作用，因此，導(dǎo)致小腸收縮運動的收縮振幅減小。本研究結(jié)果表明，桃仁能夠拮抗乙酰膽堿對家兔小腸收縮運動的興奮作用，同時又能夠拮抗阿托品引起的家兔小腸收縮運動的抑制作用。因此，筆者認(rèn)為結(jié)果提示桃仁對興奮作用下的小腸收縮運動和抑制作用下的小腸收縮運動可能具有雙向作用。但是，桃仁對家兔小腸的具體作用機(jī)制尚不明確，亟待進(jìn)一步闡明。

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