麩炒炮制對(duì)薏苡仁中甘油三油酸酯含量的影響*

趙麗沙王娜妮董宇蔣桂池許平翠壽旦#

1 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

2 浙江省中醫(yī)藥研究院 浙江 杭州 310007

3 浙江景岳堂藥業(yè)有限公司 浙江 紹興 312025

薏苡仁為禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.ma-yuen(Roman)Stapf的干燥成熟種仁[1]。作為中藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，其味甘、淡，性涼，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有利水滲濕、健脾止瀉、除痹、排膿、解毒散結(jié)之功效，可用于水腫，腳氣，小便不利，濕痹拘攣，脾虛泄瀉，肺癰，腸癰等癥[2-3]。薏苡仁作為藥食兩用的藥材，用途廣泛，文獻(xiàn)記載其炮制方法有清炒、麩炒、土炒、鹽炒、糯米炒、鹽湯煮、姜汁拌炒等[4]，目前市場(chǎng)上各種薏苡仁炮制品均有使用，而不同的炮制品臨床藥效有所區(qū)別，原因可能是由炮制引起化學(xué)成分的變化，因此研究炮制對(duì)薏苡仁成分的影響具有重要意義。薏苡仁藥材中主要含有油、脂等化學(xué)成分[5]，其中甘油三油酸酯是2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定檢測(cè)成分。本研究通過比較清炒、清麩炒、1/3蜜炙麩皮+2/3麩皮炒、蜜炙麩皮炒等不同麩炒炮制方法對(duì)薏苡仁中甘油三油酸酯含量的影響，期望為薏苡仁麩炒制品的質(zhì)量研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器：20A-VP高效液相色譜儀(日本島津)；AlltechELSD檢測(cè)器(日本島津)；SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器(日本島津)；AE400電子天平(瑞士梅特勒)；KQ400超聲提取器(江蘇昆山)。

1.2 材料：對(duì)照品甘油三油酸酯(批號(hào)：111692-201605)，購自中國(guó)食品藥品檢驗(yàn)研究院，乙腈（德國(guó)默克）、二氯甲烷（阿拉丁）為色譜純。實(shí)驗(yàn)收集不同來源薏苡仁樣品共10批密封保存。

2 方法與結(jié)果

2.1 薏苡仁炮制：①凈薏苡仁：取原藥材，除去皮殼及雜質(zhì)，篩去灰屑。②清炒薏苡仁：取凈薏苡仁，置預(yù)熱炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至表面微黃色，略鼓起，具香氣時(shí)，取出晾涼。③清麩皮炒薏苡仁：先將炒制容器預(yù)熱至200℃，加入麩皮，起濃煙后投入薏苡仁，溫度最低點(diǎn)138℃，回升至158℃出料，冷卻，篩去麩皮。④1/3蜜炙麩皮炒薏苡仁：先將炒制容器預(yù)熱至200℃，加入1/3蜜炙麩皮和2/3麩皮，濃煙后投入薏苡仁，溫度最低點(diǎn)138℃，回升至158℃出料，冷卻，篩去麩皮。⑤蜜炙麩皮炒薏苡仁：先將炒制容器預(yù)熱至200℃，加入蜜炙麩皮，濃煙后投入薏苡仁，溫度最低點(diǎn)138℃，回升至158℃出料，冷卻，篩去麩皮。

2.2 色譜條件：色譜柱：資生堂Capcell Pak C18(250mm×4.6mm,5μm)；流動(dòng)相：乙腈-二氯甲烷=60：40；柱溫：30℃；流速：0.5ml/min；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器參數(shù)：飄移管溫度70℃，載氣流速2.0L/min。

2.3 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取甘油三油酸酯對(duì)照品5.0mg，置5ml容量瓶，加流動(dòng)相制成1.0mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備：精密稱取薏苡仁粉末1.0g（過60目篩），置具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相50ml，稱定重量，重浸泡2h，超聲提取（功率450W，頻率28kHz）30min，放冷，稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5 方法學(xué)考察：分述如下。

2.5.1 線性考察：取甘油三油酸酯儲(chǔ)備液，加流動(dòng)相逐級(jí)稀釋，制成5個(gè)不同濃度梯度對(duì)照品溶液。按方法與結(jié)果“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以對(duì)照品濃度(mg/ml)對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，峰面積對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程logY=1.8615logX+7.2194。

2.5.2 精密度試驗(yàn)：取“2.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按方法與結(jié)果“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各甘油三油酸酯峰面積RSD為1.45%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批薏苡仁樣品（浙江20170503）6份，按“2.4”項(xiàng)下制備，按方法與結(jié)果“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算各甘油三油酸酯峰面積RSD為1.48%，結(jié)果表明此方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取按“2.4”項(xiàng)制備的供試品溶液，按方法與結(jié)果“2.2”項(xiàng)下色譜條件分別在0，2，4，6，8，12，24h各進(jìn)樣1次，計(jì)算甘油三油酸酯峰面積RSD為1.84%。結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 加樣回收試驗(yàn)：取同一批薏苡仁樣品（浙江20170503）6份，按“2.4”項(xiàng)下制備分別精密加入等倍的對(duì)照品，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率，甘油三油酸酯回收率為98.26%，RSD%為1.71%。

2.6 不同麩炒炮制對(duì)薏苡仁中甘油三油酸酯的影響：平行取同一批次，五種不同炮制方法制備的薏苡仁炮制品各3份（不同炮制方法制備的飲片樣品見圖1），按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。HPLC結(jié)果見圖1，樣品來源和含量測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 薏苡仁樣品來源和甘油三油酸酯含量測(cè)定結(jié)果

通過含量測(cè)定結(jié)果可知，不同輔料麩炒后薏苡仁中甘油三油酸酯的含量均有增加，其中以1/3蜜炙麩皮+2/3麩皮炒制后含量增加最為顯著。

圖1 薏苡仁不同麩炒炮制方法HPLC色譜圖

3 討論

本實(shí)驗(yàn)參照2015版《中國(guó)藥典》一部中薏苡仁的含量測(cè)定方法，選擇蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，通過比較流動(dòng)相乙腈-二氯甲烷比例（80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45），確定乙腈-二氯甲烷（60:40）峰形最佳。觀察薏苡仁凈制品及其不同麩炒炮制品色度（圖1），凈制品為乳白色，清炒品為乳黃色，麩炒品為米黃色，蜜炙品1和蜜炙品2為深黃色，表明不同的麩炒炮制輔料對(duì)炮制品的外觀顏色有一定的影響。由含量測(cè)定結(jié)果可知，1/3蜜炙麩皮+2/3麩皮炒對(duì)薏苡仁甘油三油酸酯含量影響最大。

通過比較薏苡仁生品和炮制品色譜圖，結(jié)果顯示各成分相對(duì)峰面積RSD均大于10%，這表明生品與炮制品在成分含量上存在一定的差異。為明確薏苡仁炮制前后的差異成分，項(xiàng)目組將進(jìn)一步采用液-質(zhì)等分析方法對(duì)差異化合物進(jìn)行表征。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：376-377.

[2]黃富遠(yuǎn).不同炮制方式對(duì)薏苡仁品質(zhì)的影響[J].浙江中醫(yī)雜志，2009,44(6)：462.

[3]單國(guó)順,步顯坤,孫媛媛,等.麩炒薏苡仁炮制工藝的優(yōu)化[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(6)：42-45.

[4]袁桂平,姜軍華,眭榮春.HPLC法測(cè)定薏苡仁飲片中甘油三油酸酯的含量[J].江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,25(1)：52-54.

[5]Wu H,Wald bauer K,Tang L,et al.Influence of vinegar and wine processing on the alkaloid content and composition of the traditional Chinese medicine Corydalis Rhizoma[J].Molecules,2014,19(8)：11487-11504.