排毒尪痹湯對類風濕關節炎患者血清轉化生長因子—B1的影響

唐貞力 邱江紅 李留文

摘要：目的 觀察排毒尪痹湯對類風濕關節炎（RA）患者血清轉化生長因子- B1（TGF-B1）含量的影響，從細胞因子角度探討該方藥的作用機制。方法 選擇RA活動期患者136例，隨機分為排毒尪痹湯治療的觀察組和吲哚美辛腸溶片、甲氨蝶呤片治療的對照組；于治療前和治療2個月后分別檢測血清TGF-B1含量。結果 治療2個月后，2治療組血清TGF-B1含量升高，有極顯著性差異（P<0.001），2組間比較差異無顯著性（P>0.05）。結論 RA患者體內存在較低濃度的TGF-B1，可能是導致RA發病的機制之一；排毒尪痹湯能升高血清TGF-B1含量，有助于機體恢復免疫穩定狀態，具有類似甲氨蝶呤的免疫調節效應。

關鍵詞：排毒尪痹湯；類風濕關節炎；血清；轉化生長因子-B1

中圖分類號：R255.6 文獻標志碼：B 文章編號：1007-2349（2018）02-0039-03

類風濕關節炎（RA）是一種以關節及關節周圍組織的非感染性炎癥為主的全身性疾病，關節病變呈漸進性、不可逆性改變。近年來由于社會環境及飲食生活習慣改變，該病發病率不斷上升，本病雖以關節病變為主，但常常合并有多種全身和內臟并發癥，目前RA 在國內外仍屬原因不明的難治之癥，致殘率高。研究表明，細胞因子是RA炎癥和損傷的重要介質，其中轉化生長因子（transforming growth factor-B1，TGF-B1）在RA中的作用近年來備受關注，尤其是TGF-B1參與RA炎癥過程的調節，被視為保護性因子。本院以少數民族的佤醫佤藥為基礎，通過10多年的處方篩選，總結出排毒尪痹湯，自2015 年1 月-2017年9 月，運用該方治療類風濕關節炎68例。本研究觀察RA活動期患者血清TGF-B1含量的變化以及排毒尪痹湯對其影響，從細胞因子角度探討排毒尪痹湯治療RA 的作用機制，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 采用隨機平行對照方法，在云南省臨滄市人民醫院中醫科選擇住院及門診患者136例，隨機分為觀察組和對照組，每組68例；2組一般資料經統計學處理，無顯著性差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 納入標準 （1）年齡15-70歲。（2）均符合美國風濕病協會類風濕關節炎修訂標準（1987）?；顒有訰A 診斷標準[1]（需具備以下5項中4項）：①休息時有中等程度疼痛；②晨僵至少1h；③3個以上關節腫脹；④5個以上關節壓痛；⑤ESR或CRP高于正常。（3）中醫辨證符合國家衛生部頒布的“濕熱型”標準。（4）知情同意：簽署知情同意書。

1.3 排除標準 ①合并其他疾病、證候或合并癥。②3周內已接受相關治療并可能影響效應觀測指標。③伴有可能影響效應指標觀測、判斷的其他生理或病理狀況。④嚴重心、肝、腎損害影響藥物代謝。⑤特殊人群：孕婦、哺乳期、精神病、病情危篤或疾病晚期。

1.4 退出標準 ①不符合納人條件，納入錯誤或未按規定服藥無法判定療效。②資料不全無法判定療效、安全性。③嚴重不良反應、并發癥，特殊生理變化等、難以繼續治療。④使用影響療效藥物。

1.5 診斷標準

1.5.1 西醫診斷 參照美國風濕病學會（ARA）1987年對RA的診斷標準[1]。

1.5.2 中醫診斷 參照《中藥新藥臨床研究指導原則》[2]。

1.6 治療方法 均連續治療4周為1療程，連續2療程。

1.6.1 觀察組 采用排毒尪痹湯治療，處方組成：娘母良10 g，小銅錘5 g，火把花根10 g（先煎），黃芪50 g，桂枝15 g，白術20 g，茯苓20 g，威靈仙20 g，淫羊藿25 g，枸杞子25 g，川斷30 g，紅花10 g，牛膝15 g，雞血藤30 g，秦艽15 g，甘草6 g 。每日1 劑，將火把花根用開水先煎2 h，再放入其他藥物煎煮1 h，取汁200 mL，如此煎煮2次，共煎400 mL，分早、晚2次飯后服。

1.6.2 對照組 吲哚美辛腸溶片（山西云鵬藥業有限公司，國藥準字H14020771，25 mg/片）25 mg/次，1次/d。甲氨蝶呤片（上海信誼藥廠有限公司，國藥準字H31020644，2.5 mg/片）7.5 mg/次，1次/周。

1.7 療效判定 參照《中藥新藥臨床研究指導原則》[2]及瑞得治療研究協作組制定的RA療效標準[3]。臨床緩解：晨僵<15 min，無乏力，無關節痛及壓痛，無關節腫脹，血沉：男<20 mm/h，女<30 mm/h，其中≥4項；顯效：晨僵、關節痛及壓痛、關節腫脹數、握力、血沉改善≥50%，類風濕因子（RF）滴度降低≥50%，其中≥4項；有效：晨僵、關節痛及壓痛數、關節腫脹數、握力、血沉改善≥50%、類風濕因子（RF）滴度降低≥50%，其中≥3項；無效：晨僵、關節痛及壓痛數、關節腫脹數、握力、血沉改善≥50%，類風濕因子（RF）滴度降低≥50%，其中<3項及病情惡化。

1.8 實驗室檢查 于治療前與治療2療程后分別收集患者的血清于-20℃凍存待測?；颊呒敖】但I血者取全血2 mL，患者及健康志愿在我院健康體檢者2 mL，分離血清，集中檢測，采用上海森雄科技實業有限公司提供的人轉化生長因子定量EIA試劑盒。血清標本嚴格按試劑盒要求的步驟操作，采用雙抗體夾心ABC- ELI SA法，用抗人TGF- B1單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的T GF- B1與單抗結合，加入生物素化的抗人TGF- B1 抗體，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入酶底物OPD，，出現黃色，加終止液硫酸，顏色變深，采用美國Bio-TEK INSTRUMENTS EL340型酶標儀，在492 nm 處測OD值，TGF- B1濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中TGF- B1濃度。

1.9 統計分析 采用SPSS15.0統計軟件，計量資料采用（x±s）表示，組間比較用單因素方差分析和t檢驗，計數資料采用卡方檢驗。

2 結果

2.1 退出病例 觀察期間無退出病例。

2.2 脫落病例 觀察期間無脫落病例。

2.3 2組治療前后血清TGF-β1含量測定值比較 見表1。

2.4 2組治療前后血清TGF-B1含量測定值比較：2組血清TGF-B1含量于治療后均明顯升高，治療前后比較均具有極顯著差異（P<0.001），但2組治療后比較無顯著性差異（P>0.05），見表1。

3 討論

RA是一種病因不明的自身免疫性疾病，以中年女性多見，主要表現為對稱性、慢性、進行性多關節炎。中醫中藥在治療RA方面有著悠久的歷史和獨特的優勢，療效肯定，不良反應相對較小，價格相對低廉。因此，加快研發療效確切、不良反應小的中藥，具有重大的臨床意義。

TGF-B1是一類多功能的調節細胞生長、分化及功能的細胞因子，抗原特異性T細胞和激活的巨噬細胞都可以產生活化和潛在形式的TGF-B1[3]。近年來人們研究了血清TGF-B1水平與RA發病的關系后發現：外周血循環中高濃度的TGF-B1可抑制炎癥細胞至滑膜的趨化及激活，是目前已知影響淋巴細胞增殖及功能的最強的內源性抑制劑[4]。有學者發現血清低水平的TGF-B1，其抑制免疫活動的功能下降，自身免疫反應異常，加速RA的發生發展，而RA患者血漿置換后，病情好轉，血清TGF-B1水平轉為正常[5]。如果全身應用TGF-B1，可使外周血中TGF-B1的水平升高，以自分泌或旁分泌的形式作用于相應或鄰近的靶細胞，通過抑制淋巴細胞、巨噬細胞和其他細胞釋放炎性細胞因子[6]，作用于內皮細胞，抑制其產生ICAM -1、抑制E-選擇素表達，阻斷白細胞向滑膜炎癥部位的粘附和定位，從而發揮抗炎作用[7]。這提示：血清TGF-B1水平與RA活動期密切相關，可能是RA中發揮免疫抑制作用的重要的保護性調節因子，它的減少導致RA自身免疫紊亂，是引起RA各種臨床癥狀的重要原因之一[8]。

風濕性關節炎屬于中醫“痹證”范疇。中醫認為RA 是由于風、寒、濕、熱等閉阻經絡，影響氣血運行，導致肢體筋骨、關節、肌肉等處發生疼痛、重著、酸楚、麻木，或關節屈伸不利，僵硬、腫大、變形等癥狀的一種疾病。排毒尪痹湯方中，主藥火把花根有效成分為生物堿、萜類、內酯、酚酸類等，有祛風除濕、舒筋活絡、清熱解毒等功效，具有明顯抑制病理性免疫反應和抗炎鎮痛作用。娘母良系音譯，意為藥之母，味辛甘苦；歸心、肺、腎、肝諸經。具有補腎助陽、養心安神、祛痰解痙的功效。小銅錘具有解毒利濕、止咳定喘、消腫止痛之功。黃芪為補益之長，具有益氣固表，扶正固本之功效，可益衛氣補元氣，調氣血以及益肺、健脾、補腎。據現代藥理研究，黃芪具有雙向免疫調節作用，不僅可使機體從免疫功能低下狀態恢復正常，還可使處于免疫亢進的機體恢復正常。桂枝有溫經通陽的作用，白術補氣、健脾、燥濕，茯苓利水、滲濕、健脾，威靈仙祛風濕、通經絡、止痹痛，枸杞滋補肝腎，淫羊藿補腎壯陽、祛風除濕，川斷補肝腎、行血脈、續筋骨，紅花活血祛瘀，牛膝活血祛瘀、補肝腎、強筋骨，雞血藤行血、補血、舒筋活絡，秦艽祛風濕、舒經絡，甘草補脾益氣、緩急止痛、緩和藥性。諸藥合用共奏祛風散寒、利濕通絡、活血化瘀、補氣血、補肝腎之功。

本研究發現活動期RA患者血清中TGF-B1含量明顯低于正常對照組及緩解期（表1），與文獻報道一致。排毒尪痹湯可升高RA患者血清TGF-B1的含量，使其含量接近于正常，與治療前比較有非常顯著的差異（P<0.001）；與吲哚美辛腸溶片及甲氨蝶令片治療作對照觀察，2組結果相似。這提示，排毒尪痹湯具有與甲氨蝶令片相似的免疫調節作用?？紤]其可能的機制是：排毒尪痹湯通過調節活動期RA患者血清TGF-B1水平，升高血清TGF-B1的含量，可能與組方中選用的火把花根、小銅錘、雞血藤、黃芪、淫羊藿等中藥有關。如火把花根能顯著增加TGF-B1在骨痂組和血清中的表達[10]；黃芪水溶性成分中存在具有高度免疫活性的多糖，此免疫多糖在較高劑量下可調節體液免疫和細胞免疫；雞血藤亦具有減少中性粒細胞的游走和抗炎癥作用。發揮對RA的保護性調節作用，這可能是該方治療RA 的主要作用機制之一。至于排毒尪痹湯對RA中其他細胞因子的影響，以及其治療RA 的分子機制尚不明確，值得進一步研究。

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