銀杏雙黃酮藥理作用的研究進展

涂清波，孫云，許婷，林穎，呂志陽，盛晟，王俊，吳福安,*

(1南京中醫(yī)藥大學翰林學院，江蘇泰州225300；2江蘇科技大學生物技術學院)

銀杏又名白果樹、公孫樹，為銀杏科銀杏屬植物，是現(xiàn)存種子植物中最古老的孑遺植物，以活化石著稱于世，為我國特有的盛產植物。銀杏藥用歷史悠久，《本草綱目》對銀杏記載：“其氣薄味厚，性濇而收，色白屬金，故能入肺經，益肺氣，定喘嗽。其花夜開，人不得見，蓋陰毒之物，故又能殺蟲消毒，然食多則收令太過，令人氣壅臚脹昏頓”。中醫(yī)認為銀杏有祛痰、止咳、潤肺、定喘等功效。銀杏葉中主要活性成分為銀杏黃酮和銀杏內酯類化合物，其中銀杏黃酮含量豐富，2015版中國藥典規(guī)定銀杏葉提取物中銀杏黃酮含量不低于24%。銀杏黃酮根據其化學結構可分為單黃酮類、雙黃酮類等。銀杏雙黃酮在銀杏葉中含量約0.036%[1]，為3′,8′-雙芹菜素型雙黃酮。雙黃酮化合物比其單體有著更高的生物活性，藥用價值較高[2，3]。現(xiàn)就近年銀杏雙黃酮在抗氧化、抗凝血、神經保護、抗炎、抗腫瘤和抗感染的藥理研究作用綜述如下。

1 抗氧化作用

健康時體內氧化與抗氧化、自由基產生與清除處于動態(tài)平衡。當平衡被打破，就會引發(fā)一系列自由基鏈鎖反應，使機體新陳代謝紊亂以及免疫功能下降，加重及誘發(fā)相關疾病。研究表明動脈粥樣硬化、心肌缺血再灌注、帕金森病和癌的發(fā)生均與氧自由基有關。銀杏雙黃酮是一種天然抗氧化劑，能清除自由基，減少脂質過氧化產物的生成與沉積，提高超氧化物歧化酶的活性，保護細胞膜，調節(jié)器官組織功能[4]。Shi等[5]通過DPPH-HPLC法分析卷柏中幾種黃酮化合物對自由基的抗氧化性，其中銀杏雙黃酮半抑制(IC50)約為75 μmol/L，與芹菜素相當。Sung等[6]從扁柏中提取了銀杏雙黃酮、穗花杉雙黃酮，并發(fā)性二者可以通過保護抗氧化酶活性或抑制細胞外調節(jié)蛋白激酶的激活，預防小鼠海馬細胞HT22的氧化損傷。

2 抗凝及擴血管作用

血小板黏附、聚集、釋放等功能異常可導致缺血性疾病，尤其是缺血性心腦血管疾病，如心肌梗死、腦梗死等。銀杏雙黃酮能有效降低血液黏稠度，拮抗血小板活化因子，抑制血小板聚集和血栓形成，保護血管內皮細胞，改善微循環(huán)。潘蘇華等[7]發(fā)現(xiàn)異銀杏雙黃酮能降低大鼠體內外血栓的形成風險，擴張血管，抑制小動脈收縮，增加小動脈血流量，抑制二磷酸腺苷及膠原誘導的兔血小板聚集，聚集抑制率與阿司匹林效應相近，而劑量更低毒副作用小。其作用機制可能是通過促使血小板釋放內源性致聚物質。Duan等[8]研究銀杏葉提取物的抗凝血作用，發(fā)現(xiàn)100 μg/mL的銀杏雙黃酮和異銀杏雙黃酮分別延長凝血酶原時間9.82%、32.86%，具有顯著的抗凝血酶與抗血小板聚集活性作用。

雙黃酮可通過增加血管內皮細胞一氧化氮的生成或提高其生物活性，進而提高環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)水平，降低由苯腎上腺素引起的動脈血管收縮作用。Dell等[9]在雙黃酮存在的條件下測定磷酸二酯酶(PDE)的活性，發(fā)現(xiàn)銀杏中的5種雙黃酮可劑量依賴性地抑制人重組PDE5A1，其中銀杏黃素的抑制活性最高(IC50值為0.59 μmol/L)，對PDE5A1的抑制活性由高到低依次為銀杏黃素>白果素>金漢松雙黃酮>穗花杉雙黃酮>紅杉雙黃酮。

3 神經保護作用

神經元鐵穩(wěn)態(tài)和氧化應激的破壞與帕金森病(PD)的發(fā)病機制密切相關。Chang等[10]研究表明，銀杏雙黃酮通過減少細胞內活性氧水平，維持線粒體膜電位，對1-甲基-4-苯基-吡啶(MPP+)誘導的細胞損傷有顯著的保護作用，同時經Caspase-3和Bcl2/Bax途徑抑制MPP+誘導的細胞凋亡。銀杏雙黃酮通過大幅抑制黑質中酪氨酸羥化酶的表達和紋狀體中超氧化物歧化酶活性，可顯著改善1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)誘導的PD模型小鼠的協(xié)調運動能力。另外，由于銀杏雙黃酮能強烈螯合鐵離子，通過下調L-鐵蛋白和上調轉鐵蛋白受體1，可抑制細胞內鐵離子水平的升高。銀杏雙黃酮有望成為PD和鐵代謝紊亂相關疾病的治療藥物。

4 抗炎作用

炎癥的發(fā)生機制主要是由病原菌、物理損傷、缺血性、毒性或自身免疫性損傷激活磷脂酶A2(PLA2)，水解膜磷脂產生溶血磷脂和AA，AA通過脂氧酶(LOX)和環(huán)氧合酶(COX)途徑分別代謝產生白三烯(LT)、前列腺素(PG)和血栓素A2(TXA2)等介質。Son等[11]發(fā)現(xiàn)銀杏雙黃酮具COX-2/5-LOX的雙重抑制特性，抗炎效應強，且不良反應少。Kim等[12]用佛波酯誘導的小鼠耳腫脹模型測算出銀杏雙黃酮和陽性藥前列腺素E2的抗炎抑制率分別為22.8%～30.5%和30.2%～31.1%。

NF-κB是哺乳動物一種主要的誘導轉錄因子，在固有免疫反應和慢性炎癥反應中發(fā)揮重要作用。NF-κB參與調控多種分子的早期免疫反應和炎癥反應中的各個階段，包括腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)、COX-2、趨化因子、黏附分子和集落刺激因子等。活化的NF-κB上調這些因子的表達而引發(fā)炎癥反應。Wu等[12]發(fā)現(xiàn)銀杏雙黃酮和異銀杏雙黃酮均可抑制NF-κB表達，前者抑制效果更佳，IC50值約為7.5 μmol/L。

5 抗腫瘤作用

黃酮類藥物的抗腫瘤機制主要包括抑制腫瘤細胞的增殖生長、促進腫瘤細胞的快速凋亡、調節(jié)抗癌基因和干擾細胞信號的傳導等。Baek等[14]發(fā)現(xiàn)銀杏雙黃酮是一種重要的轉錄調節(jié)因子STAT3抑制劑，通過抑制上游JAK1激酶、c-Src激酶和A549細胞、FaDu細胞的STAT3核轉位，可顯著抑制STAT3的磷酸化，同時強烈誘導SHP-1/PTEN蛋白及其mRNA的表達。銀杏雙黃酮能促進細胞凋亡，特征有包括G1期細胞數量增多、陽性膜聯(lián)蛋白V結合、線粒體膜電位下降、STAT3調控基因產物表達下調和聚ADP核糖聚合酶(PARP)的裂解。Weng等[15]發(fā)現(xiàn)銀杏雙黃酮時間和劑量依賴性抑制786-O細胞的生長，IC50值7.23 μmol/L，作用機制為抑制JAK2-STAT3的信號通路。Kong等[16]發(fā)現(xiàn)銀杏雙黃酮的對髓母細胞瘤細胞的抑制活性最高，IC50值為5.92 μmol/L，機制是通過降低髓母腫瘤細胞Wnt通路基因的表達，包括AXIN2、cyclinD1和survivin等蛋白，抑制Wnt信號通路，從而阻滯細胞周期。此外，銀杏雙黃酮對卵巢癌、前列腺癌、肺癌等腫瘤細胞均有一定的抑制作用[17～19]。

6 抗感染作用

Kyoko等[20]發(fā)現(xiàn)對Ⅰ型皰疹病毒(HSV-1)、II型皰疹病毒(HSV-2)以及人類巨細胞都具有抑制作用，治療指數分別為14.1，13.8和11.6。銀杏雙黃酮能抑制流感病毒的唾液酸酶，Kunio等[21]報道異黃芩素-8-甲醚、銀杏雙黃酮、銀杏雙黃酮唾液酸酶對H1N1和H3N2流感的IC50分別9.78 μg/mL、8.95 μg/mL，55.00 μg/mL、9.78 μg/mL、5.50 μg/mL、0.82 μg/mL，說明銀杏雙黃酮抗病毒活性強。Anton等[22]觀察了幾種銀杏雙黃酮對杜氏利什曼原蟲和錐體蟲的抑制效果，結果抗杜氏利什曼原蟲效果最好的是異銀杏雙黃酮(IC50為1.9 mmol/L)，抗錐體蟲效果最好的是銀杏雙黃酮和異銀杏雙黃酮，IC50分別是11 mmol/L和13 mmol/L。Jacobus等[23]研究從長葉羅漢松中分離的三種銀杏雙黃酮的抗菌作用，結果顯示異銀杏雙黃酮對金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌等都具有較高的選擇性抑制作用。

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