布病生物安全Ⅱ級實驗室生物安全風險評估

章春燕

（遼寧朝陽市動物疫病預防控制中心，遼寧 朝陽 122000）

布病是布魯氏菌病的簡稱，是一種細胞內寄生菌，可感染牛、豬、山羊、綿羊、野兔、馴鹿、沙林鼠、犬等多種動物和人，是一種危害較為嚴重的人畜共患病[1-2]。

該病在我國呈廣泛分布，牛羊飼養量較大的地區尤為嚴重。在對開展實驗室診斷的過程中，實驗人員在進行采樣、實驗室診斷等實驗操作時可能會暴露于物理、化學以及生物性危險因素中，造成實驗室感染。本文以布病的病原學為背景資料，分析實驗室活動可能產生的危害、對實驗室人員健康的影響以及其他相關因素，對開展布病診斷的實驗室生物安全進行初步的風險評估，以期為從事布病診斷相關操作的實驗室人員做好生物安全防護提供依據。

1 布魯氏菌病流行病學

布魯氏菌是革蘭氏染色陰性的短桿狀菌，不產生外毒素，但有毒性較強的內毒素，被吞噬細胞吞噬成為胞內寄生菌。布魯氏菌病的抗原結構比較復雜，包括6種20個生物型，已知的菌種中，可感染人類的有5個。由強到弱依次為羊種、豬種、牛種、犬種、海洋生物種布魯氏菌[3]。

1.1 傳染源

由于布魯氏菌主要侵蝕生殖系統，因此患病母畜的乳汁、流產胎兒、胎衣、羊水、子宮陰道分泌物、公畜的精液、膿液、糞和尿及患病動物污染的環境、飼料、墊草、用具等都是主要的傳染源[4]。

1.2 易感動物

易感動物比較多，目前已在60多種動物身上發現布魯氏菌。我國的易感動物依次為羊、牛、豬、鹿、犬。母畜較公畜易感。人群對本病普遍易感，但本病在人群中感染有明顯的職業性，與患病動物接觸較多的養殖戶、屠宰戶、鄉村獸醫、鄉村防疫員等人員的感染率比一般人高。

1.3 傳播途徑

一般認為，該病主要是通過直接接觸傳染，比如交配，也可通過被該病原污染的環境以及一些常見的昆蟲媒介間接傳染。感染途徑包括生殖道、消化道、皮膚和黏膜等，實際上布魯氏菌病幾乎可通過任何途徑感染。

1.4 穩定性

布魯氏菌對外界環境的抵抗力強，在污染的土壤和水中可存活30～120 d，皮毛60～120 d，鮮乳中8 d，肉中2個月，糞便中120 d，流產胎兒中約75 d，子宮滲出物中200 d。在陽光直射下可存活4 h。對熱和消毒劑的抵抗力不強，煮沸能將其立即殺死，新潔爾滅等消毒劑5 min可將其殺死。

1.5 人感染后的潛伏期和致病性

布氏桿菌病的潛伏期一般是7～60 d，也有一些個別病例是在感染后數月甚至1年才發病。如果是在實驗室中感染，這種患者一般會在10～50 d內就發病。人感染布氏桿菌病在臨床表現較為多樣，一些病人的臨床癥狀較為簡單，僅在一些部位表現為局部的膿腫；一些復雜的病例在臨床上則出現多個臟器、系統同時受到影響。在我國羊型布病最為多見，未經治療者的自然病程為3～6個月（平均4個月），但也可以表現為僅1個月或長達數年以上。布氏桿菌病的病程一般可分為急性期和慢性期，牛型的急性期常常不典型，不容易確診。

人類感染布魯氏菌后在臨床上可將其分為急性型、亞急性型、慢性型、復發感染型和局限性感染。急性型在臨床上主要表現出的特征性癥狀為發熱、乏力、多汗、睪丸炎、關節炎等。還有一些在臨床上會出現神經痛、頭痛、肝脾腫大、皮疹等。亞急性型在臨床上主要表現為一些不典型癥狀，如失眠、乏力、上呼吸道炎癥、低熱、食欲差等，一些個別急性感染的病例可能也會與亞急性型相同，沒有非常典型的臨床癥狀。慢性型在臨床上主要表現為頭痛、肌肉疼痛、關節痛、夜間盜汗、長期低熱、乏力，有一些在臨床上還會表現為胃腸道癥狀（如胃納差、腹瀉、便秘等）、失眠、抑郁、易激動等，這些癥狀在臨床上極易被診為神經官能癥而耽誤病情。

1.6 治療

利福平與多西環素聯合治療：利福平劑量為600～900 mg·d-1；多西環素 200 mg·d-1，分次口服，連用6周，為首選方案。亦可選用四環素與利福平聯合治療。也可用鏈霉素、慶大霉素、阿米卡星與多西環素聯合治療。在治療期間要盡量臥床休息，可以適量口服一些維生素。對于發熱的病人一般采用物理降溫的方式進行處理，劇烈頭痛及關節痛的患者可應用解熱鎮痛藥物。

2 生物安全Ⅱ級實驗室實驗活動的潛在危險性

2.1 實驗活動

實驗活動主要是指在實驗室從事與布氏桿菌病病原相關活動的行為，包括布氏桿菌病病原的血清學及病原學檢測等。

2.2 實驗活動的類型

根據該病原菌的檢驗流程，在實驗室中主要涉及樣品的采集及運輸、樣品的接收、實驗室檢測操作過程、生物安全柜等實驗室設備的使用、試驗樣本及廢棄物的處理等。

2.3 實驗活動風險識別和控制措施

2.3.1 直接和簡接接觸感染風險

樣品采集保存運輸、樣品接收、樣品檢測的過程中，實驗人員直接或間接接觸了具有感染性的樣品以及因感染性樣品外泄導致污染的樣品外包裝、操作臺面、儀器設備等造成人員感染和樣品污染。

在采集樣品和接收樣品的過程中，每個動物群體都應當視為可疑感染動物群體，識別被傳染的潛在風險。在采樣時，采樣人員要做好個人防護，佩戴手套、口罩、帽子、防護眼罩、穿防護服、鞋套等防護設備。接收樣品時，應當遵守《實驗室生物安全管理程序》的要求，設有專門接受樣品的房間或空間，接樣人員在做好個人防護的同時，在指定的地點完成樣品交接，樣品通過指定的通道進入實驗，避免樣品對實驗室以外的環境造成污染，從而造成人員接觸感染。

樣品在采集和運輸過程中發生泄露甚至擴散，可能會引發從業人員感染或污染環境，為有效降低這種風險，收集標品的容器最好為質地堅固、密封良好的塑料制品，保證密封后無泄露，在容器外部不應有殘留物，標本的內層要在生物安全柜內打開，并用消毒劑對外部進行噴灑消毒。樣品保存的冰箱冰柜應貼生物安全標識，實行雙人雙鎖管理，確保陽性樣品不隨意流出實驗室。

在接觸過可疑污染物時，應及時更換手套，工作服應在檢測活動結束時應通過消毒液浸泡或紫外燈照射消毒處理，工作臺面、地面、使用的儀器設備也要消毒處理，防止接觸感染。

2.3.2 氣溶膠產生風險

工作人員在打開樣品、用移液器抽吸樣品等實驗活動中都會產生氣溶膠。因此，樣品的打開、實驗操作等活動盡可能的在生物安全柜內操作，操作過程動作應輕柔。

2.3.3 銳器的意外傷害

注射器等銳器使用不當造成損傷。風險控制措施：在采樣等實驗活動中，應嚴格遵守防護措施，避免手持注射器等銳器隨意走動或傳遞銳器；用注射器采集動物血液樣品時在采集血液樣品時，應小心規范操作，采樣結束后，應將針頭帽套回，避免樣品運輸過程扎傷工作人員；禁止用手分離注射器針頭或徒手毀壞使用過的注射器，推薦使用負壓離心管和獸用采血針采血。將使用過的針頭丟入利器盒中，防止意外傷害。利器盒在實驗結束后要統一滅菌處理。

2.3.4 設備風險

生物安全柜如果沒有按照其設備的操作規范進行定期的維護與檢修，就會失去應有的防護效果，高壓滅菌器滅菌也要定期更換膠圈等，以確保其滅菌效果。離心機使用時操作不當，如離心機的頂蓋沒有蓋嚴引起離心的樣品向外飛濺，也或者離心機沒有配平等原因導致的離心管破裂，離心機內部被樣品污染。對特殊儀器設備管理人員應當定期進行培訓考核，考核合格方能上崗。儀器使用人員應遵守儀器設備操作要求，儀器要在規定時間內定期維護檢測以及期間核查，必保其正常工作性能。

3 建議

實驗室在決定操作布病試驗時，要先確定本實驗室的生物安全防護級別，以保障操作人員的自身安全，建議實驗室達到生物安全Ⅱ級實驗室的建筑和設施水平方可開展布病一系列的實驗室檢測。

建議實驗室人員定期開展檢驗操作技術培訓和生物安全技術培訓，培訓的內容應包括實驗操作標準技術規范、生物安全制度、生物安全操作標準技術規范、生物安全法律法規等，考核合格方能上崗，確保每個實驗員都能自覺準守操作標準，做好個人防護，避免感染。實驗室可針對各風險點建立突發生物安全事故應急預案，定期開展培訓，有條件的實驗室可定期開展生物安全應急演練，通過實驗室內審、實驗室督查等手段對實驗員操作情況進行檢查指導。

相關的儀器設備應當按要求定期維護和檢定，認真確實的開展儀器期間核查，對有安全隱患和使用效果不達標的儀器應及時上報，對儀器設備管理人員和儀器設備使用人員開展儀器操作技術培訓，對操作危險性的儀器可授權專門人員操作使用。

建議實驗室建立實驗人員的健康檔案，每年組織實驗人員開展布病項目的體檢，實驗室人員必須在身體健康的情況下才能進入實驗室工作，有皮膚損傷、懷孕等的情況下禁止進入實驗室開展本項目的檢測活動。

4 小 結

我國把布魯氏菌病定位二類病原微生物，認為其是實驗室感染機會較多，發病后不易治療，多人群健康造成危害較大的傳染病類種。近年來，布病在人間感染有逐年上身趨勢，人類布病流行又有明顯的職業傾向，獸醫、基層防疫人員、獸醫實驗室檢驗人員都是高危人群，實驗室關于布病檢測項目的實驗室風險識別和防控措施是一個持續性的工作，需要全體實驗室工作人員的共同參與，只有實驗室人員自覺提高風險防控意識，風險管控能力才能提升，實驗室人員感染布病的安全隱患才能徹底排除。