左旋咪唑殘留危害及檢測方法研究進展

魏中鋒，周 麗，張 倩，董翠梅，宇 凌

（1.山東省菏澤市動物疫病預防控制中心，山東 菏澤 274000；2.山東省菏澤市牡丹區畜牧獸醫水產局，山東 菏澤 274000；3.山東省成武縣畜牧獸醫局，山東 菏澤 274000）

1 左旋咪唑在畜牧業的應用現狀

左旋咪唑（levamisole），分子式為C11H12N2S，是人工合成的咪唑并噻唑類廣譜、高效、安全的驅蟲藥，對牛、豬、綿羊、犬和雞的等大部分線蟲都具有較好的驅殺效果，又因其藥源豐富，性質穩定，所以臨床上應用十分廣泛。具有驅蟲活性，驅蟲機理目前認為是通過抑制蟲體肌肉延胡索酸還原酶的活性，使蟲體糖代謝終止，導致蟲體肌肉麻痹。被世界衛生組織推薦為治療蛔蟲及鉤蟲的藥物。左旋咪唑除了具有驅蟲活性外，還對免疫反應有明顯影響。可恢復外周T淋巴細胞的細胞介導免疫功能，對單核細胞的吞噬有興奮作用，對免疫功能受損的動物作用更明顯。左旋咪唑還可以增強布魯氏菌疫苗等的免疫反應和效果。國外也有相關報道證明，左旋咪唑作為改良的佐劑可用于改善病毒滅活疫苗的體液免疫和細胞免疫應答。在2000年喬彥良等就發表了關于左旋咪唑對雞細胞免疫和體液免疫功能的影響的文章[1]。另有試驗報道左旋咪唑對西寧奶牛場荷斯坦泌乳奶牛43頭的隱性乳房炎的防治也有明顯的效果[2]。左旋咪唑還能夠增強抗體的產生水平和機體巨噬細胞功能，臨床上還可用于動物的抗病毒、抗菌消炎、抑制腫瘤和促進生長等方面[3]。左旋咪唑還有很好的協同作用，是治療某些疾病時的輔助性藥物。柳風祥等研究表明，左旋咪唑黨參多糖可以提高胸腺、法氏囊和腎臟的指數，尤其高劑量組的提高效果更為明顯[4]。

2 左旋咪唑藥物殘留的危害

左旋咪唑臨床制劑為獸藥非處方藥，隨著左旋咪唑使用范圍的不斷擴大，養殖戶為追求經濟利益，違規超量使用，造成藥物在動物源性可食用組織中的殘留。澳大利亞胃腸道線蟲是限制乳品企業發展的疾病之一，特別影響泌乳早期產奶和小母牛的增重。農民依賴驅蟲劑來控制寄生蟲病的發生，長期、連續地使用驅蟲藥物，導致藥物在動物體內的殘留。盡管動物源食品中獸藥殘留的水平比較低，但長期食用這類動物源食品，藥物殘留會隨食物鏈間接的在人體內堆積，最終產生病變，從而造成實質性和難以逆轉的危害[5]。有統計報道顯示，在2007年前左旋咪唑嚴重不良反應約有600多例，文獻中左旋咪唑引起的黃疸性肝炎病1例，大劑量左旋咪唑致急性腎功能衰竭2例，左旋咪唑所致腦病10例等[6-8]。

隨著左旋咪唑在臨床上廣泛使用，甚至過量超量使用，會導致動物機體耐藥性以及動物源性可食用組織中左旋咪唑的殘留問題，如果左旋咪唑在人體有過量的蓄積，有一定的腎毒性及肝臟毒性，對人體還有致畸、致癌的危害，嚴重影響人體健康[9-12]。在JECFA第36次會議上，建立的日允許攝入量（ADI）為3 μg·kg-1·d-1。楊學志等發表了關于左旋咪唑上市后安全性再評價Ⅲ：風險預防對策的文獻[13]。其文獻表明，左旋咪唑有涉及多種器官和系統嚴重不良反應，其中最為常見的是神經系統，包括腦炎綜合征、脫髓鞘腦病、錐體外系反應等。

3 左旋咪唑的最高殘留限量和休藥期

隨著人們生活水平的日益提高，食品安全問題也成為我們日常生活中的焦點問題。目前許多發達國家頒布了許多關于動物源食品中獸藥殘留的法規和限量標準，制定了詳盡的獸藥殘留檢測方法，并且嚴格實施對其監控、檢測與監督。所以為完善動物養殖業的規范生產和合理用藥，保障動物源性食品安全，保障我們的身體健康，提高我們的生活質量，有必要對動物性食品中左旋咪唑殘留量進行嚴格監控，建立相應的檢測方法和檢測標準。美國、日本等許多國家均制定了相關法規及標準。我國也出臺了有關牛奶及肉制品的殘留限量標準。

大鼠放射標定的代謝臨床試驗表明，其中主要代謝物是對羥基左旋咪唑，毒性比其母體的化合物的毒性要低許多。所以，左旋咪唑的殘留檢測中標識化合物認定為左旋咪唑母體藥體就可以滿足要求[14-17]。為加強獸藥殘留監測工作，農業部于2002年12月24日發布公告，第235號公告中左旋咪唑為批準使用獸藥，按照農業部頒發的質量標準和標簽說明書規定，使用于食品動物，但要求有最高的殘留限量。公告附表中規定左旋咪唑Levamisole的日允許攝入量（ADI）為0～6 μg·kg-1·d-1，標志殘留物為Levamisole，牛、羊、豬、禽的肌肉、脂肪和腎臟的最高殘留限量為10μg·kg-1。在肝臟中的最高殘留限量為100μg·kg-1。

鹽酸左旋咪唑注射液按規定用法與用量使用，其休藥期為牛14 d，羊、豬、禽28 d。

4 左旋咪唑殘留方法研究進展

目前，國內外針對檢測左旋咪唑的方法主要有電位滴定法、拉曼分析法、氣相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜-串聯質譜法等。

我國對獸藥殘留的研究起步較晚，檢測方法與標準制定嚴重滯后。農業部在1993年開始組織研究獸藥殘留檢測方法，迄今為止，農業部制定并發布的獸藥殘留檢測方法標準可操作性也有很大的提高。20世紀60年代初，美國就開始關注獸藥殘留問題，1975年制訂了《國家殘留計劃》（NRP），對屠宰動物可能存在的殘留進行監控和調查，并把常用的獸藥建立了監測標準方法。隨著科技的飛速發展和對獸藥認識的不斷深化，原本認為安全的獸藥（化學物）實際使用過程中卻被發現對人類或動物有嚴重的毒性作用。曾大量用作動物促生長劑的喹乙醇，后來也發現有致癌或致突變的不良作用。目前許多國家把這些藥物列為禁用藥物，并且在動物性食品中要求零殘留（一般都要求 1μg·kg-1）。

左旋咪唑用電位滴定測定含量來源于《中國獸藥典2015年版》二部，方法簡單易行，樣品也不用進行復雜的處理，氫氧化鈉滴定液（0.1 mol·L-1）進行滴定測其含量即可，針對原料及其制劑檢測可行性還是很好的，但這對于動物性食品中藥物殘留的定性定量檢測則是有難度的，生物樣品的干擾物質較多。

高效液相法（HPLC）是目前較為普遍的方法之一，我國也出臺了《食品安全國家標準》GB29681-2013，HPLC法。其檢測限為2.5 μg·kg-1，定量限為5 μg·kg-1。曾勇等對豬雞組織中左旋咪唑殘留的高效液相檢測方法的研究中，左旋咪唑濃度在10～1 000 μg·L-1時，與峰面積有良好的線性關系，雞、豬的肝臟中的定量限為10 μg·kg-1，雞、豬的肌肉、腎臟及脂肪中的定量限為5 μg·kg-1，回收率均在70%～110%[18]。另有試驗測定奶粉中的左旋咪唑等。高效液相法其優點分析時間短，測定范圍較廣，可檢測的物質比較多，如果配備不同的檢測器，結合衍生實驗的特點還可以檢測絕大多數的化合物。液相的精密度較高，其判定標準為RSD＜2%，也可以做左旋咪唑的定性定量分析，定量限也可以達到國家標準。但加標回收率不高，有雜質峰干擾[19-26]。

關于氣相色譜法及氣相色譜-串聯質譜的研究文獻也有許多。張叢蘭建立了豬、雞、羊可食用組織中左旋咪唑殘留氣相色譜法的檢測方法[27]。徐靜等利用氣相色譜-串聯質譜檢測動物食品中左旋咪唑的殘留[28]。氣相色譜-串聯質譜方法的優點是簡便，穩定性好，樣品加標回收率可達到76%～106%，定量限為5 μg·kg-1。但在實際監督檢測中，氣相色譜-串聯質譜的使用不如液相色譜-串聯質譜廣，氣相色譜可檢測的物質只有易揮發物質，并且氣相色譜的精密度一般約10%，試驗誤差較大。從安全性考慮，如果是配備FID的氣相色譜，其氫氣源，無論是鋼瓶的還是發生器的，都有一定危險性。如果是配備ECD的氣相色譜，在使用中不當或者處理不當，就可能會造成ECD中的放射源的泄漏，從而導致放射污染等。

液相色譜-串聯質譜法是一種先通過液相進行分離，然后通過質譜進行檢測分析的技術，不但對混合物中的單個化合物進行定性工作，而且通過質譜的高靈敏度的特點，對低濃度樣品的進行定量檢測。我國已出臺牛奶和奶粉中左旋咪唑殘留量液相色譜-串聯質譜的測定方法GB/T22994-2008。其原理是在堿性環境下用乙酸乙酯提取樣品中左旋咪唑的殘留，用稀鹽酸將樣品中的左旋咪唑反萃取到鹽酸層，再用強離子交換柱進行凈化，氮氣吹干后，復溶過濾后上機，液相色譜-串聯質譜，外標法定量分析。牛奶和奶粉的檢出限分別為0.4和3.2 μg·kg-1，液相色譜-串聯質譜的優點是定性準確，定量限低，分析時間短。液相色譜-串聯質譜法因其有較高的靈敏度和較高的專屬性、可以對組分進行定性定量分析的特點被廣泛使用。目前急需解決的是用液-質聯用建立一套動物性食品中左旋咪唑殘留量的檢測技術體系，為全方位開展動物性食品中左旋咪唑殘留量的檢測提供便利。