血府逐瘀膠囊對流產大鼠血瘀型產后惡露不絕治療作用研究*

王 梓 ，王 帆 ，楊欣瑩 ，康 利 ，王 蕾

產后惡露不絕指的是產后持續3周以上出現陰道不規則出血，伴血塊或壞死蛻膜組織成分血液物質，中醫認為，產后惡露不絕多因產后沖任不調，氣血不足，氣血運行不暢有關，導致瘀血內滯、新血不得歸經[1－2]。血府逐瘀湯臨床上可用于治療血瘀等瘀癥的治療，本實驗通過復制大鼠流產模型，觀察血府逐瘀膠囊對流產大鼠血流變、血紅蛋白、血小板聚集功能的影響，進一步探討血府逐瘀膠囊對血瘀型產后惡露不絕的治療作用和機制。

1 材料

1.1 實驗藥物及試劑 血府逐瘀膠囊藥粉由天津宏仁堂藥業有限公司提供，磚紅色粉末，每袋2.5 kg，批號E03023。益母草膏：棕黑色膏狀半流體，廣西維威制藥有限公司生產，批號160304。米非司酮片：每片25 mg，華潤紫竹藥業有限公司生產，批號：43160201。米索前列醇片：每片0.2 mg，華潤紫竹藥業有限公司生產，批號：43160315。膠原誘導劑：1 mL，HELENA，LOT4－16－5368,EXP11－17。ADP 誘導劑：1 mL，HELENA，LOT7－16－5366，EXP6－17。CD34抗體：0.1 mL，武漢博士德，批號10CM130。

1.2 實驗動物 SD大鼠，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司。許可證號：SCXK（京）2012－0001。雄性 30只（體質量 300～320 g），雌性 70只（體質量200～220 g）。動物飼養在具有實驗動物使用許可證[許可證號：SYXK（津）2011－0003]的實驗環境內，每日供給北京科澳協力飼料有限公司生產的普通鼠全價顆粒飼料，產品許可證號：SCXK（京）2014－0010。

1.3 實驗儀器 全自動血球計數器，MEK－6318K，日本光電；血小板聚集儀，AggRAM，海倫娜；血流變儀，LG－R－80（A 型），北京世帝科學儀器有限公司；ASP200S自動真空組織脫水機；Leica EG1150H自動生物組織包埋切片機；HMIAS－2000高清晰度數碼顯微圖像分析系統。

2 方法

2.1 造模方法 大鼠適應性飼養1周后，合籠當日的白天，雌鼠與雄鼠臨籠擺放，當日下午5時將雌鼠與雄鼠以2∶1合籠，次日早晨進行陰道栓和陰道涂片檢查，以發現陰道栓或者大鼠精子當天為受孕第1天，連續4 d，剔除4 d后未檢出陰道栓或大鼠精子的雌性大鼠，選取10只受孕大鼠作為正常對照組，其他受孕大鼠于受孕第7天分別灌胃米非司酮（8.3 mg/kg，上午 8:00）和米索前列醇（0.1 mg/kg，下午5:00），灌胃體積10 mL/kg。給藥第1天灌胃米索前列醇后，陰道內置干棉球1個，第2天以陰道有流血判斷流產模型的復制成功。給藥同時給予流產大鼠冷水浴，并適當斷食，制備早孕流產血瘀大鼠模型[3-5]。

2.2 動物分組 將未流產大鼠作為正常對照組，將流產雌性大鼠按體質量隨機分為5組（模型對照組、血府逐瘀高、中、低劑量組、陽性藥對照組），每組10只，隨機編號，用苦味酸在大鼠不同部位做標記進行區分。

2.3 給藥方法 各組大鼠于受孕第8天開始按相應劑量灌胃給藥，灌胃相應受試藥液10 mL/kg，1 次/日，各劑量分別為 1.92、0.96、0.48 g 藥粉/kg（分別相當于臨床人用劑量24、12、6倍）。正常對照組、模型對照組灌胃等體積溶媒介質純凈水、陽性藥對照組灌胃益母草膏3 mL/kg，相當于臨床人用劑量12倍。連續給藥7 d。

2.4 觀察指標 造模期間觀察大鼠生活狀態，末次給藥后1 h，腹腔注射4.5%戊巴比妥（1 mL/kg）麻醉，腹主動脈取血，部分以肝素1∶9抗凝，用于檢測血流變指標；部分以3.8%枸櫞酸1∶9抗凝，用于檢測血小板聚集率[6-7]，另取10 μL用于血球計數檢測。解剖子宮，并置于12%中性福爾馬林中固定，HE染色及免疫組化法檢測CD34抗原。

2.5 統計學方法 使用SPSS 17.0軟件進行統計學分析，實驗數據用平均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 血府逐瘀膠囊對產后血瘀大鼠存活狀態的影響 與正常對照組相比，模型組對照組大鼠發生較大變化，主要表現為少動、精神不振、炸毛、體態偏瘦、部分有稀便。血府逐瘀高、中劑量組及陽性藥組較模型組相比，大鼠生存狀態有較大改善，趨近于正常組，低劑量組改善不明顯。

3.2 血府逐瘀膠囊對產后血瘀大鼠血流變學及血小板聚集功能的影響 模型對照組大鼠與正常對照組相比，全血黏度、血漿黏度顯著增加（P<0.05，P<0.01）。與模型對照組相比，血府逐瘀膠囊高、中劑量組可明顯降低全血高切、低切、血漿黏度（P<0.05，P<0.01），從而改善大鼠血液黏濃凝滯的狀態。在以ADP及膠原為誘導劑誘導下，模型對照組大鼠與正常對照組相比，血小板聚集率明顯增大（P<0.01），說明模型對照組大鼠血液處于血小板功能亢進及高凝血因子狀態。與模型對照組相比，血府逐瘀膠囊高、中劑量組可以不同程度的降低血小板聚集，尤以高劑量組為佳。見表1及圖1、2。

表1 血府逐瘀膠囊對產后血瘀大鼠血流變學及血小板聚集功能的影響（x±s）Tab.1 Effects of Xuefu Zhuyu capsules on blood rheology and platelet aggregation function in abortion rats（x±s）

圖1 以ADP為誘導劑的大鼠血小板聚集圖Fig.1 Platelet aggregation of rats induced by ADP

圖2 以膠原為誘導劑的大鼠血小板聚集圖Fig.2 Platelet aggregation of rats induced by collagen

3.3 血府逐瘀膠囊對產后血瘀大鼠RBC及HGB含量的影響 與正常對照組相比，模型對照組紅細胞及血紅蛋白含量顯著降低（P<0.05，P<0.01）。血府逐瘀膠囊高中劑量組可以顯著增加模型大鼠RBC及 HGB 含量（P<0.05，P<0.01），能一定程度上改善產后血瘀大鼠血虛的狀況。見表2。

表2 血府逐瘀膠囊對產后血瘀大鼠血液中RBC及HGB含量的影響（x±s）Tab.2 Effects of Xuefu Zhuyu capsules on the contents of RBC and HGB in abortion rats（x±s）

3.4 血府逐瘀膠囊對產后血瘀大鼠子宮MVD的影響 MVD是評估血管生成的指標之一，CD34標記血管內皮細胞的特異性高，在組織有血瘀的情況，經活血化瘀治療后新生血管改善微循環，HE染色結合免疫組織化學染色標記CD34結果顯示空白對照組子宮內膜組織排列好。與空白對照組相比，模型組子宮內膜和內膜下血管數量明顯減少。與模型對照組相比，高、中、低及陽性組有不同程度改善，血管數量有所增加，以陽性組和中劑量組較為明顯。見圖3。

4 討論

產后惡露一詞源自漢代《金匱要略·婦人產后病脈證治》中“產后七八日，無太陽證，少腹堅痛，此惡露不盡”，提出了產后惡露不盡與產后瘀血內阻兼陽明腑實的證治觀點[8]中醫認為，產后惡露不絕發生的機制為沖任為病，氣血運行失常所致，其病因主要是氣虛、血瘀、血熱[9-11]。產后血室正開，寒邪內侵胞宮與血相結，寒凝血瘀，或七情所傷，氣滯血瘀，或氣虛運血無力，余血滯留為瘀，或胞衣殘留，影響沖任，總之瘀血不去，新血不得歸經而出現惡露不絕。

圖3 血府逐瘀膠囊對產后血瘀大鼠子宮MVD的影響Fig.3 The effects of Xuefu Zhuyu capsules on the uterus MVD of rats

血府逐瘀湯，中醫方劑，為理血劑，具有活血化瘀，行氣止痛之功效。該方是清代名醫王清任所創，主治血瘀證等，藥方始收于《醫林改錯·上卷》。全方由當歸、生地等11味中藥組成[12]。本實驗通過復制的大鼠早孕流產模型，較大程度上模擬臨床上產后血瘀所致的惡露不絕等臨床癥狀。希望闡明血府逐瘀膠囊對產后惡露不絕的治療作用及機制。

模型大鼠經過血府逐瘀膠囊治療后，經血流變和血小板聚集功能檢查發現，血府逐瘀膠囊能較大程度改善流產大鼠血瘀等癥狀，降低模型組大鼠全血及血漿粘度，改善血液黏稠凝滯狀態，糾正凝血功能，降低血小板聚集率，增加大鼠血液中血紅蛋白和紅細胞含量，改善大鼠血虛癥狀。

CD34抗原是一種階段特異性白細胞分化抗原，分子量100-120KD，選擇性表達造血干細胞、祖細胞及血管內皮細胞的表面。CD34是高度糖基化N型跨膜蛋白[13]，CD34在新生血管內皮中表達遠遠大于非新生血管內皮，提示高度表達應該和新血管生成有密切的關系，故CD34為比較敏感的血管內皮標志物[14]。采用CD34抗原免疫組化法測量子宮微血管密度，能較為直接地反映出流產大鼠經過治療后的子宮血管再生功能[15-16]，經過血府逐瘀膠囊的治療，HE染色結合免疫組織化標記CD34結果顯示血府逐瘀膠囊高劑量組大鼠與模型組相比，子宮膜組織排列較為整齊，子宮內膜和內膜下新生血管明顯增多，微循環得到一定程度上的改善。

通過本實驗研究，血府逐瘀膠囊具有除瘀血生新血的綜合療效，能改善血液濃、黏、滯的狀態，改善紅細胞變形能力，降低紅細胞聚性，抑制血小板聚集從而改變產后瘀血癥狀，促進血管新生，對產后血瘀、惡露不絕具有較好的治療作用。

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