艾滋病HAART前后IL-7與CD4+T細胞及HIV-RNA定量相關性研究

蔣 奕，胡 騰，劉 冰，榮秀明

（四川綿陽四0四醫院感染科，四川 綿陽 621000）

艾滋病,即獲得性免疫缺陷綜合征（acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS）是一種是由人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus,HIV）感染引起的危害極大的傳染病，嚴重威脅人類公共衛生與健康，影響到經濟發展和社會穩定[1-2]。HIV主要攻擊人類免疫系統的CD4+T淋巴細胞，影響CD4+T細胞數量和功能，最終發生一系列免疫缺陷綜合征[3]。高效抗逆轉錄病毒治療（Highly active antiretroviral therapy,HAART）能夠最大限度地降低HIV病毒載量，保護和重建部分免疫功能，降低HIV相關疾病的發生率和死亡率[4]。IL-7屬于促紅細胞生成素家族Ⅰ型短鏈細胞因子，在T細胞穩態的維持中發揮著關鍵的作用，IL-7與其受體CD127結合后促進T細胞存活的基因高表達，并增強抗凋亡分子，提高T細胞的存活，刺激CD4+T細胞數量增加[5]。但HAART前后艾滋病患者IL-7水平與CD4+T細胞計數及HIV-RNA的關系尚不明確。本研究監測HAART前后艾滋病患者血清IL-7水平、CD4+T細胞計數及HIV-RNA，并探討它們的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2016年12月間接受HAART的艾滋病患者73例，其中男54例，女19例，年齡18～45歲，平均年齡（30.6±9.2）歲。按傳播方式分別為性傳播64例，血液傳播7例，其他2例；HAART方式分別為2NRTIs+NNRTI方式59例，2NRTIs+PI方式14例，見表1。所有患者均經四川省綿陽市疾病預防控制中心蛋白印跡試驗（Western Blot，WB）確認HIV-1抗體陽性，診斷符合2012年發布的衛生部《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準》[6]，并依照2011年發布的《艾滋病診療指南》，采用HAART，推薦方案采用2種NRTIs+1種NNRTIs或者2種NRTIs+1種加強型PIs（含RTV）[7]。入組患者自愿簽署知情同意書。排除高血壓、心臟病、糖尿病等代謝性疾病及嚴重精神神經疾病患者。

表1 患者一般情況統計Table1 General statistics of patients

1.2 實驗設備與試劑

1.2.1 實驗設備 美國BioTek ELx800通用酶標儀，德國羅氏公司LightCycler96定量PCR儀，CD4+T淋巴細胞絕對計數采用美國BD Facscalibun/FACsCoum流式細胞儀測定。病毒載量的測定使用荷蘭生物梅里埃公司EasyQ病毒載量測定儀。

1.2.2 試劑 人類IL-7檢測試劑盒（美國BD公司），人類免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸擴增（PCR）熒光定量檢測試劑盒（深圳匹基生物工程有限公司），人類CD4抗體（美國BD公司）。

1.3 方法 收集HAART前和治療3個月后患者血液標本，檢測IL-7水平、CD4+T細胞計數和HIV-RNA定量。

1.3.1 血清IL-7水平檢測于HAART前和治療3個月后收集艾滋病患者血液標本，分離血清后保存于-80℃冰箱待測，通過ELISA法檢測IL-7水平，操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.3.2 CD4+T細胞計數于HAART前和治療3個月后收集艾滋病患者血液標本，取100μL血液，加入10μL CD4抗體，混勻后避光孵育20 min，利用流式細胞儀檢測CD4+T細胞計數。

1.3.3 HIV-RNA定量 于HAART前和治療3個月后收集艾滋病患者血液標本，利用人類免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸擴增（PCR）熒光定量檢測試劑盒分析HIV-RNA定量，根據熒光信號的變化來檢測 HIV-RNA定量。該方法定量檢測范圍為5.0×102～1.0×108拷貝/ml。

1.4 統計學方法 本研究采用SPSS 19.0統計軟件，計量資料采用表示，治療前后的結果比較采用配對t檢驗分析，兩組之間的相關系數采用r2線性表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 艾滋病患者HAART前后IL-7水平、CD4+T細胞計數和HIV-RNA定量 經過HAART后艾滋病患者IL-7水平降低、CD4+T細胞計數增高，HIV-RNA定量減少（P＜0.001），見表2和圖1。

表2 HAART前后IL-7水平、CD4+T細胞計數和HIV-RNA定量情況Table2 The levels of IL-7,CD4+T and HIV-RNAwere measured before and after HAART

表2 HAART前后IL-7水平、CD4+T細胞計數和HIV-RNA定量情況Table2 The levels of IL-7,CD4+T and HIV-RNAwere measured before and after HAART

?

圖1 HAART前后IL-7水平、CD4+T細胞計數和HIV-RNA定量比較Figure1 IL-7 levels before and after HAART,CD4+T cell count,and HIV-RNAquantitative comparisons

2.2 艾滋病患者HAART前后IL-7改變量與CD4+T細胞數量及HIV-RNA定量改變量的相關性 HAART前后的IL-7改變量與CD4+T細胞數量改變量成負相關（r2=0.8050）；與HIVRNA定量的對數值改變量無相關性（r2=0.0150），見圖2。

3 討論

艾滋病的病原體為獲得性免疫缺陷病毒（HIV），HAART的出現和廣泛推廣應用是艾滋病發展史上最重大的事件，它能夠最大程度的抑制患者體內的 HIV病毒水平，從而緩解HIV的臨床進程，使患者的免疫功能得到重建，改善預后并提高生存質量[8]。HIV-RNA主要影響以CD4+T細胞為主的T細胞及機體免疫系統功能，HIV血清陽性患者與健康對照試驗以及單核-巨噬細胞系統體外細胞試驗研究證明,HIV感染可導致細胞因子的產生發生紊亂[9]，反之，細胞因子也可對HIV的表達發揮調節作用。其中IL-7在維持T細胞的穩態這方面發揮著關鍵的作用。IL-7屬于EPO家族細胞因子，可由基質細胞、樹突狀細胞、內皮細胞等產生[10]，能提高成熟T細胞的生存能力[11]，動員造血干細胞入血補充T細胞。國外有研究報道HIV感染者血漿IL-7水平較正常對照升高，與病毒載量呈正相關，與CD4+T細胞的數量呈負相關，同時發現IL-7可使CD4+T細胞上CXCR4表達水平上調，這與SI表型的形成有一定相關性，并影響疾病進展[12]。

我們的研究發現HAART后艾滋病患者IL-7水平降低、CD4+T細胞計數增高，HIV-RNA定量減少（P＜0.001），這與已有的報道結果保持一致[13]；HAART前后的IL-7改變量與CD4+T細胞數量改變量成負相關（r2=0.8050）；與HIV-RNA定量的對數值改變量無相關性（r2=0.0150）。HAART后，控制大多數艾滋病患者HIV病毒復制，使得血HIV-RNA定量下降到檢出下限以下（＜5.0×102拷貝/ml），病毒量的減少使得T細胞穩定性增加。本研究發現HAART后IL-7改變量與CD4+T細胞數量改變量成負相關，IL-7降低后CD4+T細胞數量增加，提示IL-7可能在艾滋病患者HAART后免疫重建中發揮著重要的作用。但IL-7與HIV-RNA并無相關性，其原因在于我們對于HIV-RNA的檢出下限為5.0×102拷貝/ml，大部分患者經3個月的HAART后HIV-RNA降低到檢出下限以下，故未發現IL-7與HIV-RNA存在相關性。

HAART是目前艾滋病治療過程中最有效抑制HIV-RNA定量、減少并發癥、延長生命、改善生活質量的治療手段。事實證明接受長期HAART的艾滋病患者淋巴細胞亞群數量功能和免疫功能可以得到一定程度的恢復。IL-7在固有免疫和獲得性免疫之間起著重要的橋梁作用，HAART前后的IL-7改變量與CD4+T細胞數量改變量成負相關，其機制可能是IL-7降低后導致CD4+T細胞數量增加，這提示IL-7在 HAART后免疫重建過程中發揮著重要的作用。在HARRT過程中動態監測IL-7水平和CD4+T細胞計數及病毒載量的相關性能夠更好地反映HIV感染者免疫狀態，為預防機會性感染及指導抗病毒治療提供依據

圖2 HAART前后IL-7改變量與CD4+T細胞數量及HIV-RNA定量改變量的相關性分析Figure2 Correlation analysis between IL-7 modified variables and CD4+T cell number and HIV-RNAquantitative changes before and after HAART

[1] Piot P,Quinn TC.Response to the AIDS pandemic--a global health model[J].N Engl J Med,2013,368(23):2210-2218.

[2] Piot P,Abdool Karim SS,Hecht R,et al.Defeating AIDS--advancing global health[J].Lancet,2015,386(9989):171-218.

[3] Turner BJ,Markson L,Taroni F.Estimation of survival after AIDS diagnosis:CD4 T lymphocyte count versus clinical severity[J].J Clin Epidemiol,1996,49(1):59-65.

[4] KillenJ,HarringtonM,FauciAS.MSM,AIDSresearch activism, and HAART[J]. Lancet, 2012,380(9839):314-316.

[5] Coiras M,Bermejo M,Descours B,et al.IL-7 Induces SAMHD1 Phosphorylation in CD4+T Lymphocytes,Improving Early Steps of HIV-1 Life Cycle[J].Cell Rep,2016,14(9):2100-2107.

[6] 邵一鳴,康來儀,汪寧,等.艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準[J].中國艾滋病性病,2012(4):272-274.

[7] 中華醫學會感染病學分會艾滋病學組.艾滋病診療指南(2011版)[J].中華臨床感染病雜志,2011,4(6):321-330.

[8] Dore GJ,Cooper DA.HAART's first decade:success brings further challenges[J]. Lancet, 2006,368(9534):427-428.

[9] MA Bornemann,J Verhoef,PK Peterson.Macrophages,cytokines,and HIV[J].Journal of Laboratory&Clinical Medicine,1997,129(1):10-16.

[10]Jiang Q,Li WQ,Aiello FB,et al.Cell biology of IL-7,a key lymphotrophin[J].Cytokine Growth Factor Rev,2005,16(4-5):513-533.

[11]Saini M,Pearson C,Seddon B.Regulation of T celldendritic cell interactions by IL-7 governs T-cell activation and homeostasis[J].Blood,2009,113(23):5793-5800.

[12]Q Wang,H Shang,YA Wang,et al.Association of IL-7 with disease progression in Chinese HIV-1 seropositive individuals[J].中華醫學雜志(英文版),2006,119(4):288-293.

[13]Benito JM,López M,Lozano S,et al.Down-regulation of interleukin-7 receptor(CD127)in HIV infection is associated with T cell activation and is a main factor influencing restoration of CD4(+)cells after antiretroviral therapy[J].J Infect Dis,2008,198(10):1466-1473.