強心膠囊對慢性心力衰竭大鼠BNP 及NT-pro BNP的影響

陳晶，胡新穎，何長遠，劉慧多，葉婷

(1.黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫藥大學附屬第二醫院，黑龍江 哈爾濱 150001)

慢性心力衰竭(Chronic Heart Failure，CHF) 是因長期心臟負荷過重，導致心室收縮功能下降，射血功能減弱的一組復雜臨床綜合征，是大部分心血管疾病的最終結果，是現今最為主要的心血管疾病之一[1]。在我國CHF的發病率呈逐年增高趨勢[2]，其5年死亡率高于60%[3]。在2014年最新發布的《中國心力衰竭和治療指南》中第一次提到了應增加中醫藥治療在CHF中的深入研究及應用，從傳統中藥中開發治療CHF的有效藥物，將會對提高心衰患者的生活質量，延長心衰患者的壽命有重大的意義[4]。強心膠囊是筆者在多年臨床經驗基礎上，根據CHF心腎陽虛、瘀血水飲互結的病機特點，結合溫陽化飲、益氣活血的治療原則，研制而成的經驗方。本實驗組前期對該方中的藥物進行了純化提取，獲得了穩定的強心膠囊藥物有效成分[5]；藥理學研究證明，強心膠囊具有提高CHF大鼠SR Ca2+-ATP酶活性[6]，改善心臟血流動力學[7]，抑制心肌細胞凋亡[8]的作用。腦鈉肽(B-type natriuretic peptide, BNP)及N-末端腦鈉肽前體(N-terminal-pro-type B Natriuretic Peptide, NT-pro BNP)具有拮抗腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)，促進血管擴張，排鈉利尿的作用，在2016 年 Esc 心力衰竭指南中建議[9]，將生物標志物中最有價值的BNP、NT-pro BNP作為CHF預后的“金標準”。

本實驗通過觀察強心膠囊抗CHF過程中對心臟功能、BNP及NT-pro BNP的影響，進一步為強心膠囊防治CHF提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級健康雄性SD大鼠90只，體質量(180±20)g，由黑龍江中醫藥大學藥物安全評價中心提供，合格證號：SYXK(黑)2013-012。

1.2 實驗儀器與藥品

Fresco低溫冷凍離心機(美國Thermo公司);AL204電子天平(瑞士METTLEY TOLEDO公司);MultiSkan3酶標儀(美國Thermo公司);ACUSON sequoia512超聲顯像儀(德國SIEMENS公司);水平電泳儀(美國Bio-Rad公司)。

強心膠囊：制附子、紅參、黃芪、白芍、葶藶子、丹參、延胡索、三七等藥物組成(由黑龍江中醫藥大學實驗中心制備)，0.4 g/粒，1 g藥粉相當于生藥2.99 g；馬來酸依那普利：購自江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，10 mg/片，國藥準字H32000378；注射用鹽酸阿霉素：購自北京華奉聯博科技有限公司，10 mg/支，國藥準字0405E1。

BNP ELISA試劑盒：購自上海研吉生物科技有限公司；NT-pro BNP ELISA試劑盒：購自北京博奧森生物技術有限公司。

1.3 模型制備及分組

將90只SD大鼠，依據體質量隨機抽取10只作為空白組，其余80只采用尾靜脈注射阿霉素方法[10]制備CHF模型大鼠，空白組大鼠尾靜脈注射等容積的生理鹽水。6周后對大鼠進行超聲心動圖檢查，模型制備成功的標志為左心室射血分數(LVEF)值低于45%[11]。將65只CHF模型大鼠，根據體質量按隨機數字表法隨機分為模型組13只、西藥組13只、強心膠囊低劑量組(QXCL組)13只、強心膠囊中劑量組(QXCM組)13只、強心膠囊高劑量組(QXCH組)13只，加之前的空白組10只，共6組。

1.4 給藥方法

模型制備成功后開始對各組大鼠灌胃給藥，依照人與大鼠給藥劑量系數折算公式計算給藥量，西藥組給予1.8 mg/(kg·d)依那普利溶液，QXCL組給予0.66 g/(kg·d)強心膠囊溶液灌胃、QXCM組給予1.32 g/(kg·d)強心膠囊溶液灌胃、QXCH組給予2.64 g/(kg·d)強心膠囊溶液灌胃，空白組和模型組均給予1 mL/100 g生理鹽水灌胃，每日1次，共干預治療4周。

1.5 超聲心動圖

造模前、造模后及治療后對各組大鼠行超聲心動圖檢查。給予大鼠腹腔注射0.3 mL/100 g 10%水合氯醛溶液進行麻醉，將大鼠仰臥固定，胸前區備皮。使用小動物超聲診斷儀，選用14 MHz的超聲探頭，測量各組大鼠左心室收縮末期內徑(LVESD)、左心室舒張末期內徑(LVEDD)，取3個心動周期平均值；依照Teichholtz公式計算左心室短軸縮短率(LVFS)、左室射血分數(LVEF)，評價大鼠心臟功能。

1.6 ELISA檢測血清BNP、NT-pro BNP含量

末次給藥后隔日采血，采血前12 h禁食不禁水，腹腔注射10%水合氯醛溶液0.3 mL/100 g麻醉各組大鼠，以5 mL注射器行腹主動脈取血，靜置30 min，然后以3 500 r/min離心15 min，取上層血清，通過ELISA檢測BNP、NT-pro BNP。

1.7 統計學分析

2 結果

2.1 造模前、造模后空白組與模型組大鼠超聲心動圖各項指標比較

表1 造模前、造模后空白組與模型組大鼠超聲心動圖比較

注：造模后，與空白組比較，#P<0.01

造模前，與空白組比較，模型組大鼠LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS分別統計學處理，差異無統計學意義(P>0.05)，說明具有可比性。

造模后，與空白組比較，模型組大鼠LVEDD、LVESD的數值顯著增加(P<0.01)，說明大鼠的心臟結構發生了明顯的改變；模型組大鼠LVEF、LVFS的數值顯著降低(P<0.01)，說明大鼠的心臟功能明顯降低，本實驗成功建立大鼠慢性心力衰竭模型。結果見表1。

2.2 強心膠囊對CHF大鼠超聲心動圖檢查結果的影響

表2 強心膠囊對大鼠超聲心動圖的影響

注：與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與西藥組比較，□P<0.05，□□P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

與空白組比較，模型組LVEDD、LVESD顯著升高，LVEF、LVFS顯著降低，具有顯著性差異(P<0.01)。與模型組比較，各治療組LVEDD、LVESD均有不同程度的降低，其中西藥組、QXCM組、QXCH組LVEDD、LVESD顯著降低(P<0.05，P<0.01) ，QXCL組LVEDD、LVESD降低無統計學意義(P>0.05)；各治療組LVEF、LVFS均有不同程度的升高，其中西藥組、QXCM組、QXCH組LVEF、LVFS顯著升高(P<0.05，P<0.01)，QXCL組LVEF、LVFS升高無統計學意義(P>0.05)。與西藥組比較，QXCL、QXCM、QXCH組LVEDD、LVESD均升高，LVEF、LVFS均降低，QXCL組LVEDD、LVESD顯著升高(P<0.05)，LVEF、LVFS顯著降低(P<0.05,P<0.01)；QXCM、QXCH組LVEDD、LVESD升高無統計學意義(P>0.05)，QXCM、QXCH組LVEF、LVFS降低無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3 強心膠囊對各組大鼠BNP、NT-pro BNP水平的影響

表3 強心膠囊對CHF大鼠BNP、NT-pro BNP水平的影響

注：與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.01；與西藥組比較，△P<0.01，△△P<0.05

與空白組比較，模型組、西藥組、QXCL組、QXCM組及QXCH組大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，西藥組、QXCL組、QXCM組及QXCH組大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均顯著降低(P<0.01)。與西藥組比較，QXCL組、QXCM組及QXCH組大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均升高，其中QXCL組大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平顯著升高(P<0.01)，QXCM組大鼠血清中NT-pro BNP水平明顯升高(P<0.05)，QXCH組升高無統計學意義(P>0.05)。見表3。

3 討論

慢性心力衰竭為西醫學病名，在祖國醫學中當屬“心悸”“喘證”“水腫”等疾病的范疇。其病因多為原臟或它臟疾患遷延難愈導致，屬病重日久，久病傷腎；根據該病心悸怔忡、尿少水腫、喘息不得臥、畏寒肢冷等的常見臨床癥狀，慢性心力衰竭的演變規律在筆者看來，一般起病為心氣虛，后至心陽虛，因心腎同源，心氣根于腎，心陽有賴于腎陽的溫煦，所以慢性心力衰竭發生的根本應為心腎陽虛，血瘀、水飲是其病理產物，遂確立溫陽化飲、益氣活血之治法。遵循以上治療方法，筆者經過20多年的臨床經驗，研制而成純中藥復方強心膠囊。方中以附子為君，味辛甘，為溫陽圣藥。臣以黃芪補脾肺之氣、紅參補氣強心。佐以葶藶子開肺利竅，下氣行水；白術健脾燥濕、茯苓健脾滲濕，脾土得以健運，小便則通利，水濕得除。佐以丹參、三七、延胡索,疏通心脈，活血化瘀。因附子為陽中之陽大燥之藥，利用白芍斂陰和營之功效予以制約，白芍還具有活血脈，利小便之功。全方配伍精當，用藥嚴謹，諸藥并用，共奏溫陽化飲，益氣活血之功效。

BNP前體肽鏈結構的氮末產物為NT-pro BNP，與BNP同屬鈉尿肽家族[12]。當心臟容量負荷或者壓力發生改變時，心肌細胞釋放的前腦鈉肽原(Pre-pro BNP)被迅速分解為有生物活性的BNP和沒有生物活性的NT-pro BNP[13]，以維持循環系統壓力、滲透壓及容量的穩態。研究證實，與非心衰人群比較，CHF患者血液中BNP及NT-pro BNP水平明顯增高[14-15]，且其血清中BNP，NT-pro BNP水平與其慢性心力衰竭程度息息相關。動物實驗發現，在慢性心力衰竭早期，大鼠血漿BNP，NT-pro BNP的水平已明顯增高[16]。

本實驗觀察到，造模后，模型組大鼠LVEDD、LVESD的數值顯著升高，LVEF、LVFS的數值顯著降低，說明模型組大鼠的心腔明顯增大，心肌收縮力降低，心臟射血能力降低，心功能下降，提示CHF模型制備成功。治療后，西藥組、QXCM組、QXCH組LVEDD、LVESD顯著降低，LVEF、LVFS明顯升高，說明西藥組和強心膠囊均能不同程度增強心肌收縮能力，改善CHF大鼠心腔增大，提高心臟功能，西藥組和QXCM組、QXCH組相比較治療CHF效果相當。與CHF大鼠模型組比較，各治療組大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均顯著降低，說明強心膠囊組和西藥組均能明顯降低大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平。與西藥組比較，QXCL、QXCM、QXCH組大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均不同程度升高，其中QXCL、QXCM組大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平顯著升高，QXCH組升高無統計學意義，說明西藥組降低BNP、NT-pro BNP水平優于QXCL、QXCM組，且QXCH組與西藥組降低BNP、NT-pro BNP水平相當。

綜上所述，強心膠囊能夠增強CHF模型大鼠心臟功能，并有效的降低CHF模型大鼠血清中重要生物學標志物BNP、NT-pro BNP水平，可明確的說明強心膠囊具有抗CHF的作用，并且其降低BNP、NT-pro BNP水平與其應用劑量具有依賴性。

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