百合地黃湯對抑郁模型大鼠行為及海馬內單胺類 神經遞質和單胺氧化酶含量的影響

薛劍,李冀

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

抑郁癥(depression)已是全球高發疾病，WTO預測在2020年以后成為繼高血壓之后第二大臨床慢性疾病[1]。百合地黃湯是治療百合病的代表方劑，中醫理論中百合病屬于現代醫學中，抑郁癥的范疇。抑郁癥臨床癥狀中多有學習上的障礙，有時會有一定的情感障礙及記憶能力的下降。在諸多抑郁癥病因假說中指出，單胺類神經遞質的功能紊亂會直接導致抑郁癥的發生發展，而研究指出使單胺類遞質含量的升高可以有效緩解抑郁癥，是減輕抑郁水平的重要途徑[2]。當抑郁癥發生時，腦組織中的海馬區是與情緒、記憶功能密切相關的腦組織區域，研究指出海馬區也是應激易損傷的重要靶點區域，因此本實驗通過建立慢性輕度不可預見性刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)加孤養模型，并給予百合地黃湯進行抗抑郁干預治療，觀察造模前后，百合地黃湯灌胃前后大鼠的行為學變化，取海馬區的單胺類神經遞質及單胺氧化酶作為抗抑郁機制的研究[3-4]，探討百合地黃湯對大鼠抑郁行為的影響及大鼠腦內海馬區單胺類神經遞質、單胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)含量的影響,為治療抑郁癥的提供依據。

1 材料與方法

1.1 藥物主要實驗藥品試劑及儀器

百合地黃湯組成為百合、地黃，藥物購自黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院天江中藥局，百憂解膠囊(鹽酸氟西汀，批號:蘇州制藥公司)。

1.2 試劑盒

去甲腎上腺素(NE)、5羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、單胺氧化酶(MAO)檢測試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器

KDL-40低速離心機(科大創新股份有限公司)；anthos酶標儀(安徽實達電腦科技有限公司)。

1.4 實驗動物及分組

雌性健康成年SD大鼠40只，黑龍江中醫藥大學動物中心提供，動物合格證：SCXK(黑)2007003。大鼠體質量為180～200 g。適應性飼養1周，自由進食飲水，室溫為(22±3)℃。大鼠隨機分為空白組、模型(CUMS)組、陽性藥組、百合地黃湯組(簡稱百地組)，每組10只。

1.5 分組給藥

給藥從造模第22天開始所有大鼠連續給藥14 d。陽性藥組給予百優解(鹽酸氟西丁膠囊)20 mg/日，空白組和模型組每天給予5 mL/kg生理鹽水灌胃。百地組每天給予計算后5 mL/kg的百合地黃湯灌胃。

1.6 抑郁模型的建立

根據文獻建立CUMS加孤養模型[5]，并根據具體環境情況加以改進。空白組大鼠正常條件飼養無任何干預；其余3組大鼠用CUMS應激刺激進行抑郁造模并單籠飼養，進行21 d隨機方式刺激，刺激方式包括電擊足底(強度10 mA，1次持續刺激10 s，共刺激20次)、冰水游泳(4℃，5 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)、黑白顛倒(24 h)、夾尾(1 min)、潮濕墊料(24 h)共7種，每日隨機給予1種刺激方式，每種刺激方式全程共3次，同種刺激不能連續出現，使大鼠不能預測刺激的發生，造模共21 d，建立不可預知性抑郁模型。

1.7 大鼠強迫游泳實驗(forced swimmingtest，FST)

將大鼠單獨置于強迫游泳的刻度圓筒內，桶內裝清水，水溫24～26℃，桶內徑為40 cm ，高度為70 cm，水面高度為35 cm，將大鼠放置其中，放置時動作柔和避免過度刺激。實驗共測試5 min，前1 min為大鼠適應階段，后4 min納入不動狀態的時間。全程用攝像機采集影響材料。大鼠漂浮或小肢體運動為大鼠的不動狀態標準。為了避免重復用水對大鼠產生影響，則每只大鼠測試后需要更換一次水。每只大鼠實驗結束后需用毛巾、吹風機干燥身體后放回單籠。統計的不動狀態時間作為抑郁程度的指標。

1.8 取材

行為學實驗完成后，斷頭處死大鼠取腦并迅速剝離出海馬組織，將組織分為左右部分，左側用于單胺類神經遞質檢測，右側用于單胺氧化酶檢測，將組織分好后放入適量生理鹽水搗碎制成勻漿，低溫3 000 r離心10 min取上清液，按照試劑盒說明書檢測NE、5-HT、DA及MAO含量。

1.9 統計學方法

2 結果

2.1 百合地黃湯干預后各組大鼠行為學指標變化

與空白組比較，模型組大鼠強迫游泳不動時間明顯延長(P<0.01)；陽性藥組時間對比模型組有所縮短，百合地黃組大鼠強迫游泳不動時間明顯縮短(P<0.01),見表1。

2.2 各組大鼠海馬單胺類神經遞質含量變化

經過28 d慢性不可預知性溫和性應激刺激后，與空白組相比較，模型組大鼠海馬區單胺類神經遞質均有降低；與模型組相比，陽性藥組百合地黃湯組大鼠海馬區單胺類神經遞質含量明顯升高。見表2。

表1 各組大鼠強迫游泳指標變化與空白組比較

注：與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01

表2 各組大鼠海馬單胺類神經遞質含量變化

注：與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△△P<0.01

2.3 治療后各組大鼠海馬單胺氧化酶含量變化

經過28天慢性不可預知性溫和性應激刺激后，與空白組相比較，模型組大鼠海馬區MAO有所升高；與模型組相比，陽性藥組和百合地黃湯組大鼠海馬區MAO含量有所降低。見表3。

表3 各組大鼠海馬MAO含量變化

注：與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

3 討論

現代社會，由于環境等因素，抑郁癥嚴重影響人們的身心健康。本實驗運用CUMS結合孤養的方法建立抑郁大鼠模型，與人類抑郁癥的發展機理較為接近，被國際學者廣泛運用。行為學實驗中，采用了大鼠強迫游泳實驗，本實驗是將大鼠置于圓形水桶環境中，觀察動物在水中拼命掙扎后，漂浮于水面的“不動狀態”的時間，這種不動狀態即動物的行為學上的絕望狀態。時間越長，說明大鼠絕望狀態越嚴重，則可以說明抑郁越嚴重。通過21 d的造模和14 d的藥物組干預，行為學測試中與空白組比較，模型組大鼠表現出的不動時間明顯變長，表明模型組的抑郁模型復制成功。行為學實驗中同時發現，陽性藥組與百地組在大鼠強迫游泳的不動時間上對比模型組時間均有縮短，從行為學角度也說明百合地黃湯具有一定的抗抑郁作用。

單胺類神經遞質主要包括去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)等，查閱文獻中可以得知自1965年開始提出5-HT和NE含量改變能改善抑郁的假說開始，單胺類神經遞質的研究便與抑郁癥的研究密不可分。研究中得出5-HT和NE的減少與抑郁癥的發生機制有關[6]。有效促使5-HT和NE的升高，則抑郁癥緩解明顯。多巴胺(DA)是下丘腦和腦垂體腺中的關鍵性神經遞質，能直接影響人的情緒，研究中證明DA可以產生興奮的情緒，增加行動力[7]。因增加單胺類神經遞質在大腦內的含量水平，是有效減輕抑郁的重要途徑之一。本實驗中百合地黃湯組的對比模型組中單胺類神經遞質的含量均有升高(P<0.05)。從單胺類遞質方面的研究可以說明百合地黃湯可以有效改善抑郁癥。

單胺氧化酶(MAO)是一種催化單胺氧化脫氨反應酶。研究中發現MAO具有一定的抗抑郁、抗焦慮的作用[8-10]。MAO增高，單胺類神經遞質的分解力度則會加強，則單胺類神經遞質含量則會降低，抑郁癥便會發生發展。而本實驗中可以得出百合地黃湯可以降低MAO的活性含量，從而減少了DA、5-HT、NE的分解，避免其含量降低。實驗中百地組的MAO指標比模型組有顯著的降低(P<0.05)。因此,從單胺氧化酶的實驗分析中可以得出百合地黃湯有著一定得抗抑郁作用。

綜上所述，百合地黃湯對CUMS結合孤養的抑郁模型大鼠具有抗抑郁作用，其機制與抑制MAO，從而升高大鼠的單胺類神經遞質含量有關。

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