肉蓯蓉多糖對更年期高血壓燥證大鼠內分泌 功能調節的研究

張娜娜

(開封市中醫院藥學部，河南 開封 475001)

更年期高血壓是由于機體內分泌代謝紊亂并伴有植物神經功能失調從而引發的血壓波動，有近80%的女性會出現該癥狀，并且該階段血壓波動易受到情緒、睡眠等外界因素的干擾，導致血壓變異性較大，常規降壓藥控制不理想，并且長期服用有不同程度的不良反應發生。現代研究更年期血壓異常波動可能與患者內分泌激素水平變化有明顯關聯[1]，臨床治療主要以雌激素替代療法進行干預，而該方法不適用于有激素禁忌癥的患者，如肝腎功能障礙、乳腺癌、糖尿病等，與此同時也會增加患者心腦血管疾病及生殖系統副反應發生的幾率[2]；相對于祖國醫學對該疾病的治療，則顯的更具有優勢，中醫藥辨證組方不但能對血壓進行不同幅度的調節，還能改善患者睡眠狀況、減輕患者臨床癥狀，臨床治療以療效確切、毒副作用少等優點而受到患者的好評。肉蓯蓉為列當科寄生植物，是“藥食兩用”之品，營養價值高，具有獨特的醫藥和保健功能，其中多糖(cistanche deserticola polysaccharides,CDPS)為其主要生物學活性組分，有研究顯示由肉蓯蓉組方制成的制劑能改善更年期綜合征的臨床癥狀[3]，且肉蓯蓉對雌性腎虛小鼠有促卵泡發育、促黃體生成作用，顯示了肉蓯蓉對雌性腎虛小鼠內分泌功能的調節作用[4]，但對于肉蓯蓉多糖的調節作用機制尚未有深入研究，基于此，本研究以更年期婦女患者的臨床指征為基礎復制更年期高血壓燥證動物模型，并給予肉蓯蓉多糖進行干預治療，以考察肉蓯蓉多糖對更年期患者內分泌系統的調節機制。

1 材料與方法

1.1 動物

健康雌性SPF級SHR大鼠65只，體質量(200.0±15.0)g，購自河南省實驗動物中心，許可證號SCXK(豫)2014-0009。大鼠喂養普通飼料，自由飲水，避免噪聲及其他環境因素干擾。

1.2 試藥與試劑

肉蓯蓉飲片500 g(購自張仲景大藥房,產地：內蒙古，批號20121025)；其他試劑均為分析純。坤泰膠囊(貴陽新天藥業股份有限公司，批號140507)；內分泌指標[雌二醇(estradiol,E2)、促卵泡生成激素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黃體酮生成激素(luteinizing hormone,LH)] Elisa檢測試劑盒購自北京康為世紀生物科技有限公司；神經遞質[去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)、神經肽Y(neuropettide Y,NPY)、5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)] Elisa檢測試劑盒購自北京四正柏生物科技有限公司。

1.3 儀器與設備

超聲波清洗器(KQ-300VDV，昆山市超聲儀器有限公司)；島津2010型紫外可見分光光度計(日本)；ACCESS型全自動化學發光免疫分析儀(美國BECKMAN COULTER公司)；AB204-S型梅特勒電子天平(北京梅特勒-托利多有限公司)；動物無創血壓測量儀(BP-100A型，程度泰盟科技有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 肉蓯蓉多糖的制備

取肉蓯蓉飲片500 g，加10倍量水浸泡30 min，加熱提取2次，每次1.5 h，合并煎液(呈棕紅色)，濃縮至2∶1(體積質量比)，離心(3 000 r/min)15 min，取上清液，加入3倍量95%乙醇沉淀，冷藏并靜置24 h，離心分離沉淀，將沉淀物用無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，將洗滌后的沉淀真空干燥，采用蒽酮-硫酸法測定肉蓯蓉多糖的含量，即得到肉蓯蓉多糖粗品(灰棕紅色，得率為10.13%)。

1.4.2 分組與給藥

所有大鼠購回后分籠飼養，適應1周后分組，剔除體質量偏差較大的SHR大鼠3只，其余62只按照隨機數字表法分為5組，分別為SHR組，假手術組，模型組(更年期高血壓燥證模型)，陽性組(坤泰膠囊，1.08 g/kg)，肉蓯蓉高劑量組(相當于肉蓯蓉生藥量11.84 g，1.2 g/kg)、低劑量組(相當于肉蓯蓉生藥量5.92 g，0.6 g/kg)；按照《藥理實驗中動物間和動物與人間的等效劑量換算》公式換算大鼠給藥劑量，2015版《中國藥典》肉蓯蓉用量為6～10 g/d，肉蓯蓉多糖粗品1 g相當于肉蓯蓉生藥量9.87 g，給藥前取肉蓯蓉多糖適量于滅菌生理鹽水中，配制成0.1 g/mL的肉蓯蓉多糖溶液，陽性組取內容物配制成濃度為0.1 g/mL的水溶液，按照體質量計算每次給藥劑量，正常對照組和模型組給予等劑量的生理鹽水。除肉蓯蓉多糖兩個劑量組分別11只大鼠外，其余三組均為10只。各組動物連續給藥4周，觀察并記錄藥物干預期間動物行為學特征變化。

1.4.3 動物模型的復制

方法復制更年期高血壓燥證大鼠模型[5-6]，采用手術方法摘除雙側卵巢，復制更年期高血壓大鼠，在模型復制成功1周后，每日給予特殊飼料(飼料配方：普通大鼠飼料+0.5%孜然+0.5%五香粉+10%動物脂肪+2.5%油炸花生仁+2.5%熟芝麻)100 g，飲用水200 mL，保持飼養籠溫度和相對濕度恒定，連續造模3周，復制更年期高血壓燥證大鼠，模型復制期間密切觀察動物生物學特性并及時記錄。

1.4.4 指標的檢測

實驗結束后，采用動物無創血壓測量儀檢測實驗前后大鼠尾動脈收縮壓(測量3次，取平均值)。10%水合氯醛溶液腹腔麻醉(35 mg/kg)，腹主動脈取血約5 mL，以3 000 r/min速度離心15 min，分離血清于Eppendorf管，-20 ℃冷凍保存待測。采用放免法測定血清內分泌指標(E2、FSH、LH)。取血后的大鼠迅速斷頭取腦，采用化學熒光法測定下丘腦神經遞質(5-HT、NE、DA、NPY、5-HIAA)含量。

1.4.5 統計學處理

采用SPSS17.0數據處理系統對實驗數據進行統計學分析，首先對實驗數據進行正態性檢驗(KS檢驗)，符合正態分布且方差齊的數據采用單因素方差分析法進行多組間比較；不符合正態分布的數據采用Chi-square檢驗，所有統計比較以P<0.05代表差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 更年期高血壓燥證大鼠模型評價

更年期高血壓燥證模型大鼠表現出明顯的好斗、易怒、性情急躁等特點，動物飲食量降低，毛發槁枯，該癥狀與臨床特征相一致。

2.2 各組大鼠在藥物干預前后血壓水平變化

表1 摘除卵巢前后各組大鼠尾動脈收縮壓變化

注：與假手術組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與陽性組比較，cP<0.05

由表1可以看出：假手術組與SHR組相比血壓變化不明顯，差異沒有統計學意義(P>0.05)；模型組大鼠血壓較SHR組有明顯上升，與假手術組相比差異具有統計學意義(P<0.05)。

2.3 各組大鼠在藥物干預前后血清內分泌水平變化

由表2可以看出：與假手術組和SHR組大鼠相比模型組大鼠內分泌激素水平較大，組間差異明顯(P<0.05)，集中體現在E2水平大幅度下降，FSH、LH表達水平明顯上升，提示模型組大鼠內分泌指標出現紊亂，符合更年期高血壓臨床特征。給予藥物干預后，陽性組和CDPS高、低劑量組大鼠的內分泌水平有不同程度的改善，其中陽性組改善作用更為明顯，CDPS高、低劑量組對E2水平的改善程度稍弱，與模型組相比，差異沒有統計學意義(P>0.05)，而對FSH、LH指標改善明顯，差異具有統計學意義(P<0.05)。

表2 各組大鼠血清內分泌指標水平比較

注：與假手術組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與陽性組比較，cP<0.05

2.4 各組大鼠在藥物干預前后各血清神經遞質含量變化

由表3可以看出：模型組大鼠與假手術組相比，各神經遞質表達水平有顯著差異(P<0.05)，提示模型組大鼠神經遞質表達水平異常，該癥狀符合更年期高血壓燥證臨床特征。經藥物干預治療后，與模型組相比，除CDPS低劑量組對DA調節作用稍弱以外(P>0.05)，陽性組和CDPS各劑量組均能不同程度的調整各神經遞質的表達水平，且差異具有統計學意義(P<0.05)，其中陽性組作用強度較CDPS高劑量組強。

表3 各組大鼠血清神經遞質指標水平變化

注：與模型組比較，aP<0.05；與陽性組比較，bP<0.05

3 討論

更年期綜合征(menopausal syndrome,MPS)是指更年期婦女由于卵巢功能衰退，E2分泌減少，機體對下丘腦-垂體系統的負反饋調節作用減弱，誘導下丘腦弓狀核和室旁核脈沖式分泌促性腺激素釋放激素(GnRH)至門脈循環系統，刺激垂體分泌FSH、LH增加，引起下丘腦-垂體-卵巢軸(hypothalamo-pituitary-ovarian axix,HPOA)功能紊亂[7]，進而影響下丘腦單胺類神經遞質的平衡。神經遞質在神經細胞間及神經細胞與內分泌、免疫系統之間信息傳遞有非常重要的作用，其中神經遞質中以單胺類神經遞質為主，包括兒茶酚胺類(如DA)、吲哚類(如5-HT)，而5-HT是控制人類情緒變化的最主要物質，直接影響機體的生理及心理功能，更年期婦女神經遞質的異常變化會導致機體植物神經功能的異常，進而影響個人情緒與正常的生理功能，產生諸如失眠多夢、煩躁不安等癥狀[8]；有研究證實[9]血清E2表達水平的降低與FSH、LH的升高與女性更年期發病有明顯關系。傳統中醫學中，對于更年期并與明確的名稱與之相對應，根據患者臨床癥狀，可將本病與“臟燥”“盜汗”“眩暈”等疾病相關聯。祖國醫學認為，女子以肝為先天，以血為用，更年期婦女天癸將絕而未絕，陰血虧虛，肝失所養，疏泄不力而致肝氣郁結不暢，故“肝郁”為更年期發生之標；肝失條達，則氣機不暢，血行不利，可成血瘀之弊，故“血瘀”為其主要病理表現；肝失所養，日久累腎，腎氣日衰，精血不足，陰陽失衡，故而“腎虛”為發生之本；根據辨證，兼以祛痰、解郁、瀉火之法；“更年期”實為本虛標實、虛實夾雜之證，治則當以“滋補肝腎”為主[10]，基于此，實驗復制動物模型時在更年期高血壓模型的基礎上復制了燥證模型更符合更年期特征。

肉蓯蓉屬于《神農本草經》“上品”類中藥，為列當科植物肉蓯蓉(CistanchedeserticolaY .C.Ma)的干燥帶鱗葉的肉質莖，具有補腎壯陽、添精補髓、養血潤燥、悅色延年之功效，由于其資源的匱乏，目前已列為國家二級保護植物。現代藥理學研究證實，肉蓯蓉有多種生物學活性，發揮該生物學活性的主要活性成分為多糖類成分，如促進機體產生白介素-2、促進免疫細胞增殖、促進網狀內皮系統吞噬、促進胸腺成熟細胞向外周釋放等免疫調節作用[11-13]。坤泰膠囊(原名更年寧心膠囊)用于更年期綜合征，尤其是對絕經過渡期更年期患者更為適合，提示該制劑可直接作用于卵巢組織，促進卵巢內微循環，增強卵巢供血功能，有效改善卵巢功能；同時組方中熟地黃、阿膠等中藥能刺激已經閉鎖的卵泡，恢復卵巢分泌激素的功能，調節激素分泌平衡；延長卵巢生命力，推遲女性絕經期[14-15]，因此本文以坤泰膠囊作為陽性藥物參與對照。

從研究結果來看：卵巢摘除前后模型組大鼠尾動脈收縮壓無明顯變化(P>0.05)，提示摘除卵巢對SHR大鼠的應激性刺激尚未影響到血壓的波動；摘除后的大鼠內分泌指標有異常變化，大鼠在被切除卵巢后，血清中雌激素E2表達水平顯著下降(P<0.05)，提示此時下丘腦-垂體的負反饋作用減弱，代償性使FSH、LH含量上升(P<0.05)，導致內分泌功能出現紊亂，該變化符合更年期特征，而內分泌的紊亂會影響到下丘腦單胺類神經遞質的平衡；研究顯示，CDPS高、低劑量組明顯下調FSH、LH表達水平(P<0.05)，但對E2表達水平調整作用不明顯，比模型組稍高，組間比較顯示差異沒有統計學意義(P>0.05)。從神經遞質的角度來看：模型組大鼠血清5-HT、5-HIAA含量顯著上升，NPY、NE、DA含量明顯下降，該變化符合更年期婦女神經遞質的變化情況；其主要原因可能是兒茶酚胺類遞質合成代謝受到抑制，而分解代謝有所增強，同時會導致大腦內5-HT的代謝及神經活性相應增強，打破了5-HT/NE的動態平衡，而5-HT在機體中以抑制興奮為主要效應，其指標的異常升高，會引起情緒低沉、抑郁寡歡，這也是5-HT能夠引起神經功能低下導致抑郁癥的病理生理基礎之一。

綜上所述，肉蓯蓉多糖能通過增強HPOA功能實現腎上腺素與皮質激素的調節，FSH、LH指標的下調和E2含量的回升提示肉蓯蓉多糖能顯著改善機體的內分泌調節機制，糾正下丘腦神經遞質紊亂狀態，改善植物神經功能，穩定機體內環境，促進內分泌功能的改善，并加速新陳代謝，發揮改善更年期癥狀的作用。

參考文獻：

[1] 祖力胡馬爾·玉素甫,郭蔚,徐燕,等.中西醫防治女性更年期高血壓病的研究進展[J].中國醫藥導報,2015,33(12):46-50.

[2] Marnocha SK,Bergstrom M,Dempsey LF.The lived experience of perimenopause and menopause[J].Contemp Nurse,2011,37(2):229-240.

[3] 段賢春,汪永忠,方朝暉,等.蓯歸益腎顆粒對糖尿病腎病模型大鼠的治療作用[J].中成藥,2015,37(3):473-477.

[4] 劉昕.肉蓯蓉對雌性腎虛小鼠生殖內分泌功能影響的研究[D].廣州：中山大學,2010.

[5] 葛麗,林雪,李鴻霞,等.更年期高血壓燥證大鼠模型的構建[J].中國全科醫學,2015,18(30):3692-3696.

[6] 林雪,周斌,甘慶雷.虛燥更平散對更年期高血壓大鼠血壓計血壓變異性影響的研究[J].中國全科醫學,2013,16(5):567-571.

[7] 陽松威,郭建生,王曉倩,等.補腎療更浸膏對去勢更年期模型大鼠神經內分泌功能失調的作用[J].中成藥,2016,38(3):651-654.

[8] Otrmann O,Doren M,Windler E,et al.Hormone therapy in perimenopause and postmenopause (HT) interdisciplinary S3 guideline ,association of the scientific medical socienties in germany AWMF 015/062-short version[J].Arch Gynecol Obstet,2011,284(2):343-355.

[9] 許鳳全,鄭瑀,許琳潔,等.女性更年期抑郁癥與下丘腦-垂體-卵巢軸關系的研究述評[J].精神醫學雜志,2016,29(1):69-72.

[10] 許鳳全,許琳潔,張瑩.98例女性更年期抑郁癥患者中醫癥候分布規律臨床研究[J].世界中西醫結合雜志,2014,9(10):1056-1058.

[11] Cai RL,Yang MH,Shi Y,et al.Antifatigue activyty of phenylethanoid-rich extract from Cistanche deserticola[J].Phytother Res,2010,24(2):313-315.

[12] 尹若煕,李剛,俞騰飛,等.肉蓯蓉多糖對東莨菪堿所致學習記憶障礙模型小鼠在突觸可塑性方面的保護作用[J].中國藥理學通報,2014,30(6):801-807.

[13] 崔雅婷,李剛.肉蓯蓉多糖藥理作用研究進展[J].世界臨床醫學,2016,10(1):252-253.

[14] 王艷芳,趙繼軍,李旻輝,等.肉蓯蓉多糖對CCl4所致小鼠急性肝損傷的保護作用[J].包頭醫學院學報,2014,30(6):3-5.

[15] 陳蓉,林守清,楊欣,等.坤泰膠囊與戊酸雌二醇對更年期綜合征各種癥狀的不同療效分析[J].醫學綜述,2013,19(10):1869-1872.