1型AIH患者外周血T細胞PD-L1的表達及與肝功能的相關性

熊克宮 柯坤宇 孔金峰 陳麗芳

自身免疫性肝炎（AIH）是一種自身免疫反應所介導的慢性肝損傷，病因和發病機制仍未闡明[1]。程序性死亡因子配體1（PD-L1）通過與其受體相互作用，從而介導負性共刺激信號，與多種自身免疫性疾病密切相關[2]。但目前關于PD-L1表達與1型AIH的相關性研究卻報道較少，現研究探討1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細胞表面PD-L1表達情況及其與肝功能的相關性。

1 資料與方法

1.1 研究對象

我院2014年1月—2017年8月收治的62例1型AIH患者。AIH參考2010年美國肝病學會更新的AIH診治指南[3]。緩解是指癥狀消失，血清轉氨酶、膽紅素及IgG均正常，肝組織正常或無活動性肝硬化。另選取20例健康者為對照組。排除合并其他肝病者。

1.2 PD-L1表達的檢測

每例患者采取外周靜脈血5 ml，EDTA抗凝，6 h內送檢。取100 μl全血分別加入2支試管中，各加入10 μl抗體，其中1支加入小鼠抗人PE-PD-L1、FITC-CD4、FITC-CD8、CD3 PerCP-Cy5.5，另1支加入FITC-IgGl、PE-IgGl。避光室溫孵育30 min，加入2 ml紅細胞裂解液避光靜置10 min，加緩沖液洗滌3次，1%多聚甲醛重懸細胞，立刻上機流式細胞儀檢測。以CD3及CD4雙陽性圈定為CD4+T淋巴細胞，以CD3及CD8雙陽性圈定為CD8+T淋巴細胞，再測定CD4+、CD8+T淋巴細胞PD-L1陽性比例。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 研究對象一般資料

62例1型AIH患者，其中活動期43例，男性4例、女性39例，平均年齡（46.8±12.1）歲；緩解期19例，男2例、女17例，平均年齡（48.3±12.5）歲。活動期組血清轉氨酶、膽紅素、GGT、ALP、IgG較緩解期組均下降（均P＜0.05），而自身抗體譜及自身抗體滴度之間差異無統計學意義。

2.2 1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細胞PD-L1表達情況

外周血CD4+、CD8+T細胞PD-L1的表達率均高于對照組，且活動期組、緩解期組及對照組逐漸下降（均P＜0.05）（詳見表1）。

2.3 1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細胞PD-L1表達與肝功能的相關性

1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細胞PD-1表達與TBIL、ALT、AST及IgG水平均呈正相關（r=0.773、0.851、0.734、0.814，均P＜0.05）。

3 討論

AIH可能是各種誘發因素、自身抗原、遺傳因素和免疫調節之間錯綜復雜的相互作用而使自身免疫耐受被打破，由自身免疫異常導致的慢性免疫性肝損傷。目前，隨著醫務人員對AIH的不斷認識，我國AIH診斷率呈逐年升高趨勢。

PD-L1是B7家族的重要成員，通過與受體PD-1相互作用，參與調控免疫應答過程中效應性T淋巴細胞的凋亡。PD-L陽性細胞能與表達PD-1的T、B淋巴細胞相互作用，降低T、B淋巴細胞免疫效應并抑制其功能，避免外周組織受自身免疫系統的攻擊，從而防止疾病的發生發展[4]。國內關于PD-1及其配體的研究主要集中在病毒性肝炎和風濕性疾病[5-6]。亦有研究發現外周血PD-L1是1型AIH有用的診斷指標，且能反應1型AIH患者臨床特征。柯坤宇等[7-8]研究表明PD-L1在AIH患者肝組織中表達上調，并與患者臨床指標密切相關。由此可見，PD-1/PD-L1介導的免疫功能異常在免疫相關性疾病中的作用已被人們所關注，但PD-L1在AIH中的研究仍較少。

表1 各組外周血T淋巴細胞PD-L1的表達率

研究發現1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細胞PD-L1的表達率高于對照組。這與理論上自身免疫性疾病患者PD-1/PD-L1的表達應下調不符，推測T細胞PD-L1雖表達上調，但是表達PD-L1的T細胞的增殖能力反而下降，從而沒有達到下調免疫反應及抑制自身免疫的作用，T細胞PD-L1高表達可能是機體的代償反應。PD-L1在AIH活動期組患者外周血CD4+、CD8+T細胞的表達率高于緩解期組。提示免疫抑制劑治療可能通過提高表達PD-L1的CD4+、CD8+T細胞的增殖能力，使PD-L1的表達下調而發揮作用。此外，本研究亦發現1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細胞PD-L1表達與TBIL、ALT、AST及IgG水平均呈正相關。提示PD-L1可能參與了1型AIH疾病進展。分析原因可能為特異性T細胞功能部分恢復后，機體免疫仍處于紊亂狀態，炎性反應加重，肝細胞死亡增加，膽紅素代謝障礙，機體為恢復免疫耐受而過度表達PD-L1。

綜上所述，1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細胞PD-L1表達率增加，且與肝功能指標密切相關，提示PD-L1參與了1型AIH的發生發展，其具體機制有待今后進一步研究。

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