板藍(lán)根飲片、板藍(lán)根顆粒中（R，S）－告依春的含量測(cè)定

王寧莉，周振旗，賈萬倉

（1．陜西省銅川市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，陜西 銅川 727031； 2．陜西省銅川市宜君縣人民醫(yī)院，陜西 銅川 727200）

板藍(lán)根，又名靛青根、藍(lán)靛根、大青根，十字花科植物菘藍(lán) Isatis indigotica Fort．的干燥根[1]，性寒，味先微甜后苦澀，具有清熱解毒、預(yù)防感冒、利咽之功效，主要用于溫毒發(fā)斑、舌絳紫暗、爛喉丹痧等。藥理研究表明，板藍(lán)根飲片的功效主要為抗病毒、抗炎、抗菌、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等[2－10]。板藍(lán)根顆粒的唯一組方是板藍(lán)根，其功效主要為清熱解毒、涼血利咽、消腫，用于由肺胃熱盛所引起的咽喉腫痛、腮部腫脹及口咽干燥[1]，收載于2015年版《中國藥典(一部)》。相較于飲片，其標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)其進(jìn)行了薄層色譜鑒別，而無指標(biāo)成分的含量測(cè)定，質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)較單一，制劑質(zhì)量難以保證。其指標(biāo)成分（R，S）－告依春含量測(cè)定見2015年版《中國藥典(一部)》。參考文獻(xiàn)[11－20]，本研究中優(yōu)化了測(cè)定板藍(lán)根飲片和板藍(lán)根顆粒中指征成分（R，S）－告依春含量的高效液相色譜（HPLC）法，簡(jiǎn)單易行，準(zhǔn)確度高?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

LC－2030型高效液相色譜儀（日本島津公司）；LC－2030UV型檢測(cè)器(日本島津公司)；MS－105型電子天平（感量0．000 01 g，梅特勒－托利多公司）。

1．2 試藥

（R，S）－告依春標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為 111753－201506，含量以 99．9%計(jì)）；甲醇為色譜純，水為純化水。板藍(lán)根飲片(以下簡(jiǎn)稱飲片)為自購樣品，經(jīng)銅川市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心檢定為板藍(lán)根正品；板藍(lán)根顆粒（以下簡(jiǎn)稱顆粒，葵花藥業(yè)有限公司，批號(hào)為170426；云南維和藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為1610053；吉林吉春制藥有限公司，批號(hào)為161201；甘肅眾友藥業(yè)制藥有限公司，批號(hào)為161026；修正藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)為150426；山西萬輝制藥有限公司，批號(hào)為 170313)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent C18柱(250 mm× 4．6 mm，5 μm)，以十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑；柱溫：35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：245 nm；流動(dòng)相：甲醇－水(15∶85)[3]；流速：1．0 mL／min。理論板數(shù)按（R，S）－告依春峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

?。≧，S）－告依春對(duì)照品 0．012 40 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇100 mL，制得質(zhì)量濃度為0．124 0 g／L 的（R，S）－告依春標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為對(duì)照品貯備液。取飲片檢品，粉碎，粉末過4號(hào)篩，精密稱取1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入水50 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率250 W，頻率30 kHz）提取1 h，放至室溫，稱定質(zhì)量，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，得供試品溶液1。取顆粒粉末，研細(xì)，稱取樣品 2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水50 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率250 W，頻率 30 kHz）提取1 h，放至室溫，稱定質(zhì)量，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，得供試品溶液2。

表1 （R，S）－告依春加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液 0．5，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0，6．0，7．0 mL，分別置 20 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度定容，分別制成質(zhì)量濃度為0．003 1，0．006 2，0．012 4，0．018 6，0．024 8，0．031 0，0．037 2，0．043 4 g／L 的溶液，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，精密吸取10 μL，測(cè)定。以進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)（ Y）、峰面積為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝3．3×10－4X＋1．68，r＝0．999 94(n＝8)。結(jié)果表明,（R，S）－告依春質(zhì)量濃度在 0．003 1～0．043 4 g／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取一定濃度的對(duì)照品溶液，精密吸取10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積分別為 1 820 191，1 843 843，1 836 956，1 865 214，1 844 302，1 855 412，RSD為0．8%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液 1，于 1，3，5，8，12，16，21，24 h 時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果峰面積分別為 632 901，632 570，631 856，626 051，624 612，612 999，613 953，617 411，平均值為 624 044，RSD 為 0．5% （n＝8），表明供試品溶液1在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。取同一供試品溶液2，分別于 1，3，5，8，12，16，21，24 h 時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果峰面積分別為283 796，284 044，274 484，278 936，288 318，279 460，278 506，279 651， 平 均 值 為 280 899， RSD 為 1．5%（n＝8），表明供試品溶液2在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：按供試品溶液的制備方法，對(duì)同一廠家飲片檢品和同一廠家同一批次顆粒檢品處理6份平行檢品，分別進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果（R，S）－告依春平均含量分別為 0．620 1 mg／g 和 0．098 4 mg／g， RSD 分別為0．9%和 1．0% （n ＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取含量為0．620 1 mg／g的飲片檢品共6份，各0．5 g，精密稱定，加入2 mL質(zhì)量濃度為0．124 0 g／L 的（R，S）－告依春標(biāo)準(zhǔn)品溶液，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果見表1。取含量為 0．098 4 mg／g的顆粒檢品共 6份，各 2 g，精密稱定，分別精密加入 1．5 mL質(zhì)量濃度為 0．124 0 g／L的（R，S）－告依春標(biāo)準(zhǔn)品溶液，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2．4 樣品含量測(cè)定

取飲片待測(cè)檢品12批次，按照2．2項(xiàng)下方法制備檢品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果見表2。取6個(gè)廠家6批次待測(cè)顆粒樣品，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果見表3。

表2 飲片檢品中（R，S）－告依春含量測(cè)定結(jié)果(mg／g)

表3 顆粒檢品中（R，S）－告依春含量測(cè)定結(jié)果(mg／g)

3 討論

3．1 樣品處理

2015年版《中國藥典（一部）》中收載的板藍(lán)根飲片的提取方法是以水為溶劑煎煮2 h，放冷，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量。但煎煮火候不易掌控，水分揮發(fā)較大，容器壁附著較多，加之煎煮時(shí)間過長(zhǎng)，壁上附著物變焦，無法溶入溶劑，且經(jīng)比對(duì)煎煮提取后（R，S）－告依春的含量偏低，曾比較加熱回流提取和超聲（功率250 W，頻率30 kHz）提取，超聲處理簡(jiǎn)便可控，且（R，S）－告依春高于煎煮提取。溶劑曾分別選用50%甲醇、70%甲醇、甲醇、70%乙醇和水，結(jié)果不同的溶劑提取對(duì)（R，S）－告依春含量影響不大。提取時(shí)間選擇，分別考察了30，60，90，120 min，發(fā)現(xiàn)在 60 min 后（R，S） － 告依春的含量未明顯增加。結(jié)合節(jié)省成本和環(huán)境保護(hù)方面考慮，最終選擇用水作為溶劑，超聲（功率250 W，頻率30 kHz）1 h為提取方法。

3．2 指標(biāo)成分選擇

2015年版《中國藥典（一部）》中板藍(lán)根顆粒質(zhì)量控制方法為薄層鑒別，無法有效控制板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量，無法確保板藍(lán)根顆粒藥品安全有效。考慮（R，S）－告依春抗病毒作用明顯，且含量較大，選擇（R，S）－告依春作為板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量控制成分，并建立HPLC法測(cè)定含量，易于掌握，可控性好，準(zhǔn)確度高，可作為控制板藍(lán)根飲片和板藍(lán)根顆粒中指標(biāo)成分（R，S）－告依春的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

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