妊娠及體檢婦女宮頸感染人乳頭瘤病毒基因分型檢測特征分析

張麗敏，方 芳，陳柯霖，劉淑靜，周 金，呂 虹，王俊平，張國軍*，康熙雄*

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院，北京100050；2.北京市免疫試劑臨床工程技術(shù)研究中心，北京100050；3.河北省固城縣醫(yī)院)

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種小雙鏈閉合環(huán)狀DNA 病毒，可特異性感染人皮膚黏膜的鱗狀上皮細(xì)胞，不同型的HPV可引起不同部位的乳頭瘤[1]。HPV主要通過接觸感染部位或污染的物品傳播，生殖器感染主要由性交傳播，新生兒可在產(chǎn)道感染。妊娠期婦女因體內(nèi)激素水平變化、免疫功能狀態(tài)等因素較非妊娠期更易感染HPV[2]。妊娠期HPV可通過母嬰傳播導(dǎo)致嬰兒感染，影響母嬰健康。本文對2014年1月至2016年6月北京地區(qū)來北京天壇醫(yī)院就診的妊娠期婦女HPV感染情況作一回顧性分析,以了解妊娠婦女HPV感染現(xiàn)狀及型別分布特點,并以同期來院進(jìn)行體檢的婦女HPV感染情況為對照,為今后促進(jìn)母嬰健康的相關(guān)研究提供流行病學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1研究對象2014年1月-2016年6月于北京天壇醫(yī)院產(chǎn)科門診就診的妊娠期婦女共3265例，年齡18-58歲，平均年齡29歲。同期于北京天壇醫(yī)院體檢科進(jìn)行體檢的女性7378例，年齡21-86歲，平均年齡48歲。

1.2標(biāo)本采集采用HPV采樣刷采集宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本,將毛刷放入加有專用細(xì)胞保存液的收集管中,4℃冰箱保存,3天內(nèi)檢測。

1.3儀器與試劑采用潮州凱普生物化學(xué)有限公司提供的HPV基因分型檢測試劑盒,HPV基因分型檢測采用凱普導(dǎo)流雜交技術(shù),對21種常見的HPV基因型進(jìn)行分型檢測，包括13種高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68),8種低危型HPV(6、11、42、43、44、53、66和CP8304)。

1.4實驗過程樣本DNA提取；PCR 擴(kuò)增；導(dǎo)流雜交；酶標(biāo)顯色；結(jié)果判斷，根據(jù)芯片顯色位點判斷HPV基因型。

1.5統(tǒng)計方法用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件；計數(shù)資料以百分比表示，率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1妊娠婦女宮頸感染HPV檢出情況

2.1.1HPV感染率及各基因型分布 3265例妊娠婦女HPV-DNA陽性例數(shù)為340例，總陽性檢出率為10.41%(340/3265)。21種基因型共檢出20種，有1種基因型未檢出，為低危型HPV-42。其中HPV-52檢出率最高，共70例，陽性率為2.14%(70/3265)，其次為HPV-16、58、51、53，陽性率分別為1.75%(57/3265)、1.62%(53/3265)、1.01%(33/3265)和1.01%(33/3265)。(多重感染重復(fù)計數(shù))

2.1.2單一及多重感染分布 在340例檢出陽性標(biāo)本中，單一感染271例，占總陽性標(biāo)本的79.71%，二重感染54例，占總陽性標(biāo)本的15.88%，三重及以上感染15例。

2.1.3高危及低危型別感染分布 在340例檢出陽性標(biāo)本中，高危型感染檢出率為74.12%(252/340)，低危型感染檢出率為18.82%(64/340)，高低危型別混合感染檢出率為7.06%(24/340)。其中，高危型感染組以單一感染為主，共214例，占陽性標(biāo)本的84.92%(214/252)，主要型別為HPV-52、16、58、51、39。低危型感染組單一感染58例，占陽性標(biāo)本的90.63%(58/64)，主要型別為HPV-53、CP8304、66，二重感染6例。高低危混合感染組二重感染16例，占陽性標(biāo)本的66.67%(16/24)，主要型別為HPV-53、CP8304。

2.1.4妊娠婦女感染HPV年齡分布情況 妊娠婦女中，年齡<23歲患者HPV感染率為20.24%，高于其他組別。>36歲患者感染率最低為8.26%，如表1所示。

表1 孕婦感染HPV年齡分布情況

*與<23歲比較，P<0.05

2.2體檢婦女宮頸感染HPV檢出情況

2.2.1HPV感染率及各基因型分布 7378例體檢婦女HPV-DNA陽性例數(shù)為947例，總陽性檢出率為12.84%(947/7378)。21種基因型均檢出。其中HPV-52和HPV-CP8304檢出率最高，均為158例，陽性率為2.14%(158/7378)，其次為HPV-58、53、16、39，陽性率分別為2.13%(157/7378)、1.48%(109/7378)、1.45%(107/7378)和1.26%(93/7378)。(多重感染重復(fù)計數(shù))

2.2.2單一及多重感染分布 在947例檢出陽性標(biāo)本中，單一感染722例，占總陽性標(biāo)本的76.24%，二重感染172例，占總陽性標(biāo)本的18.16%，三重及以上感染53例。

2.2.3高危及低危型別感染分布 在947例檢出陽性標(biāo)本中，高危型感染檢出率為64.10%(607/947)，低危型感染檢出率為24.08%(228/947)，高低危型別混合感染檢出率為11.83%(112/947)。其中，高危型感染組以單一感染為主，共515例，占陽性標(biāo)本的84.84%(515/607)，主要型別為HPV-52、58、16、39、18。低危型感染組單一感染207例，占陽性標(biāo)本的90.79%(207/228)，主要型別為HPV-53、66、6，二重感染19例。高低危混合感染組二重感染74例，占陽性標(biāo)本的66.07%(74/112)，主要型別為HPV-CP8304和HPV-58。

2.2.4體檢婦女感染HPV年齡分布情況 體檢婦女年齡范圍較大，因此分為6個年齡段。<26歲患者感染率最高，為23.08%，其次為26-30歲。感染率隨年齡增加總體呈下降趨勢，>60歲患者感染率最低，如表2所示。

表2 體檢婦女感染HPV年齡分布情況

*與<26歲比較，P<0.05#與>60歲比較，P<0.05

2.3妊娠婦女和體檢婦女宮頸感染HPV結(jié)果比較

2.3.1HPV感染率比較 3265例妊娠婦女中HPV陽性感染者340例，HPV感染率10.41%，檢測到20 種HPV 基因型；7378 例體檢婦女中HPV陽性感染者947例，HPV感染率12.84%，檢測到21種HPV基因型；體檢婦女感染率高于妊娠婦女，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。妊娠婦女中單一型別HPV感染271例，感染率8.30%；體檢婦女中單一型別HPV感染722例，感染率9.79%；體檢婦女單一型別感染率高于妊娠婦女，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。妊娠婦女中混合型別HPV感染69例，感染率2.11%；體檢婦女中混合型別HPV感染225例，感染率3.05%，體檢婦女感染率高于妊娠婦女(P<0.05)。兩組婦女中，高危型感染組與高低危型感染組合計為高危感染進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，低危型感染組與高低危型感染組合計為低危感染進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，見表3。體檢婦女高危感染率及低危感染率均高于妊娠婦女(P<0.05)。

表3 妊娠及體檢婦女HPV感染狀況比較(n，%)

2.3.2HPV感染基因型別比較 兩組患者HPV 感染前7 位型別中有6種型別相同，分別為HPV-52、16、58、53、39和CP8304，且首位感染型別相同，為HPV-52，感染率均為2.14%，見表4。HPV-16、58、53、39在兩組間感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，HPV- CP8304感染率體檢婦女高于妊娠婦女，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表4 妊娠及體檢婦女主要HPV型別及感染率比較(n，%)

3 討論

目前HPV已發(fā)現(xiàn)200多種亞型,得到鑒定的有100余種[3]。HPV有高危型和低危型之分，一般認(rèn)為，高危型HPV與宮頸癌發(fā)病有關(guān)，低危型HPV與生殖道良性病變有關(guān)。70%-80%的女性在其一生中都曾感染過HPV，絕大多數(shù)通過自身的免疫力，在感染后的1-2年內(nèi)自行清除。只有持續(xù)的感染高危型HPV才會有發(fā)生宮頸癌的風(fēng)險。因此，定期檢測HPV尤其是檢測HPV的型別非常重要。妊娠期婦女感染HPV，由于體內(nèi)激素水平變化，更利于HPV的復(fù)制，另外陰道分泌物增加，局部的潮濕環(huán)境有利于HPV病毒的生長和繁殖。國內(nèi)有研究數(shù)據(jù)顯示，20%-30%孕婦伴隨HPV 或持續(xù)感染[4]。此外，妊娠期HPV 感染可以垂直傳播，造成新生兒先天性尖銳濕疣或喉乳頭瘤等疾病，成為臨床上嚴(yán)重影響母嬰的身心健康的妊娠期合并癥[5]。因此對妊娠期婦女進(jìn)行HPV篩查有必要在臨床廣泛開展。

本研究對3265例妊娠婦女及7378例體檢婦女進(jìn)行宮頸HPV感染檢測，結(jié)果顯示妊娠婦女感染率為10.41%，低于體檢婦女12.84%。這與妊娠婦女易感染HPV的觀點不符[6]。分析原因我們認(rèn)為入組的體檢婦女年齡分布范圍較寬，而妊娠婦女年齡較為集中，如能將妊娠婦女與同年齡段的非妊娠婦女作比，則能減少偏倚。另外，目前關(guān)于妊娠期婦女HPV感染率的報道結(jié)論并不一致。Aydin等[7]對土耳其婦女的研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期婦女HPV感染率為29.2%，明顯高于非妊娠期婦女(19.6%)。而Biernat等[8]檢測了145例妊娠期婦女與相同樣本量的非妊娠期婦女，結(jié)果顯示兩組婦女HPV感染率無統(tǒng)計學(xué)差異。分析各研究結(jié)果不一致的原因，可能與樣本量、實驗室檢測方法、所測HPV型別不同有關(guān)。孕周不同也可影響HPV感染的檢出率[9]。

兩組婦女HPV感染均以單一感染為主，且高危感染比例高于低危感染，這與此前的報道一致[10]。妊娠婦女單一混合感染陽性率及高危低危感染陽性率均低于體檢婦女。有研究顯示宮頸病變級別隨著HPV 感染亞型的增多而升高[11,12],且高危多重感染宮頸癌變發(fā)生風(fēng)險較單一感染更高[13],因此HPV多重感染亦不容忽視。在感染型別上，本研究顯示兩組高危型均以HPV-52檢出率最高，其次為HPV16/58，低危型以HPV-CP8304最高。這與Jing Ye[14]對浙江地區(qū)婦女HPV感染流行病學(xué)數(shù)據(jù)一致。而另有報道顯示，HPV感染高危型以HPV-1618檢出率最高[1,15-17]，低危型以HPV-6檢出率最高[1,17]。一方面這可能與地域、民族差異有關(guān)，另一方面在感染型別上妊娠婦女與非妊娠婦女可能存在一定差異。

從年齡分布上來看,<23歲妊娠婦女感染率最高,為20.24%,高于其他年齡段,其他三個年齡段之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但>36歲感染率呈下降趨勢。<26歲體檢婦女感染率最高,隨年齡增長感染率呈下降趨勢,>60歲年齡段感染率最低。也就是說高感染率呈現(xiàn)年輕化趨勢。而此前有研究報道HPV感染率在妊娠及非妊娠婦女隨年齡增長均呈上升趨勢[18]。另有一項研究數(shù)據(jù)顯示HPV感染率在50-60歲非妊娠婦女最高，為43.7%[17]。差異存在及本研究高感染率趨于年輕化的原因可能為：(1)研究對象不同，本研究為妊娠婦女及健康體檢者，而其他研究對象為于婦科門診就診的女性患者，伴身體不適的癥狀和體征而前來就診；(2)年輕患者性生活開始早并且活躍，生育年齡較小，又處于宮頸鱗柱上皮轉(zhuǎn)化期，易受HPV感染；(3)部分年輕婦女有多個性伴侶，性生活混亂易患生殖系統(tǒng)疾病，而HPV感染為性傳播疾病；(4)另外年輕患者免疫系統(tǒng)尚不夠成熟，不易清除以16亞型為主的高危HPV感染，使HPV病毒很快整合到宿主細(xì)胞DNA并大量復(fù)制，這可能是年輕宮頸癌患者HPV16型的總感染率高于年長宮頸癌患者的主要原因。而一項納入13640名妊娠婦女的流行病學(xué)Meta分析數(shù)據(jù)顯示<25歲年輕妊娠婦女更易感染HPV，與本研究結(jié)論一致[15]。

綜上所述，我院妊娠婦女HPV感染率較體檢婦女低，兩組均以單一感染和高危感染為主，主要型別為HPV-52、16、58、53、39和CP8304，高感染率呈現(xiàn)年輕化趨勢。HPV分型檢測是妊娠婦女宮頸病變最基本的篩查手段，對新生兒健康也有著積極意義,可以通過預(yù)測及早期治療HPV 感染而減少或控制孕婦宮頸癌的發(fā)生及降低新生兒并發(fā)癥和死亡率。

[1]Zhong TY,Zhou JC,Hu R,et al.Prevalence of human papillomavirus infection among 71,435 women in Jiangxi Province,China[J].J Infect Public Health,2017 Feb 14.pii:S1876-0341(17)30011-4.doi:10.1016/j.jiph.2017.01.011.[Epub ahead of print]

[2]周蓓蓓,張麗娜,范燕燕,等．孕期人乳頭瘤病毒感染類型與母嬰垂直傳播的前瞻性研究[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2012,21(3):208.

[3]范文生,李亞里,楊怡卓,等.基因芯片技術(shù)檢測宮頸病變中HPV 感染的臨床研究[J].中華醫(yī)院感染雜志,2009,19(7):745.

[4]何 玥,吳玉梅,王 彤,等.妊娠合并子宮頸上皮內(nèi)瘤變患者高危型HPV 感染的臨床研究[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2012,47(8):598.

[5]許 穎,馬毓梅,張杰英,等.人乳頭瘤病毒的研究進(jìn)展[J].河北醫(yī)藥.2013,35(12):1884.

[6]Salcedo MM,Damin AP,Agnes G,et al.Prevalence of human papillomavirus infection in pregnant versus non-pregnant women in Brazil[J].Arch Gynecol Obstet,2015,292(6):1273.

[7]Aydin Y,Atis A,Tutuman T,et al.Prevalence of human papilloma virus infection in pregnant Turkish women compared with non-pregnant women[J].European Joumal of Gynaecologieal Oncology,2010,31(1):72.

[8]Biernat I,Szczudrawa A,Tomaszezyk J,et al.HPV infection in pregnant women [J].Ginekologia Polska,2003,74(10):1066.

[9]吳 倩,林 競,趙麗華,等.基因芯片檢測妊娠期HPV感染情況及分型的研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志.2013,22(29),3196.

[10]杜 宏,索蘭草,劉紅賢,等.甘肅地區(qū)女性宮頸HPV感染的現(xiàn)狀研究[J].暨南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版),2015,36(1).40.

[11]李 霓,代 敏.中國城市婦女人乳頭狀瘤病毒多重感染情況及其與子宮頸病變的關(guān)系[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2010,44(5)：423.

[12]楊燕芬,邱 毅,佟 雁,等.HPV多重感染與宮頸病變的關(guān)系研究[J].2016,31(2).

[13]趙紅霞,董艷雙,蔡友治,等.人乳頭狀瘤病毒多重感染對高度鱗狀上皮內(nèi)病變和宮頸癌發(fā)生的影響[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2016,32(8):1268.

[14]Jing Ye,Xiaodong Cheng,Xiaojing Chen,et al.Prevalence and risk profile of cervical human papillomavirus infection in Zhejiang Province,southeast China:a population-based study[J].Virology Journal,2010,7:66.

[15]Liu P,Xu L,Sun Y,et al.The prevalence and risk of human papillomavirus infection in pregnant women[J].Epidemiol Infect,2014,142(8):1567.

[16]李 青,金紅梅.孕期人乳頭狀瘤病毒感染的結(jié)局分析[J].中國臨床醫(yī)學(xué).2014,21(3):293.

[17]王小利,常永超,劉海花,等.洛陽地區(qū)女性HPV感染及病毒亞型分布特征研究[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2016,13(14):1905.

[18]王新忠,趙俊紅.妊娠及非妊娠婦女宮頸感染人乳頭瘤病毒的基因亞型檢測及分析[J].中國臨床醫(yī)學(xué),2014,21(3):288.