液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在鹽酸克倫特羅殘留中的應(yīng)用

李翠萍

【摘 要】鹽酸克倫特羅被作為飼料添加劑非法添加到動(dòng)物飼料中，造成中毒事件，引起人們廣泛關(guān)注，其殘留對(duì)人民健康造成嚴(yán)重威脅。因此，需要一種高靈敏度的有效檢測(cè)方法。液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)少且準(zhǔn)確度高，被用于鹽酸克倫特羅殘留的檢測(cè)。本文對(duì)鹽酸克倫特羅和液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)做了簡(jiǎn)單概述，淺析了液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在鹽酸克倫特羅殘留中的應(yīng)用，以期為市場(chǎng)監(jiān)測(cè)中快速檢測(cè)鹽酸克倫特羅提供參考。

【關(guān)鍵詞】液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)；鹽酸克倫特羅；殘留；應(yīng)用

【中圖分類號(hào)】R155.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1005-0019（2018）23--01

1 鹽酸克倫特羅概述

鹽酸克倫特羅又名“瘦肉精”，屬于腎上腺類神經(jīng)興奮劑，主要藥理作用為：舒張及松弛子宮平滑肌、舒張支氣管等，是一種臨床上常見的平喘藥。鹽酸克倫特羅不是獸藥，不能作為飼料添加劑非法使用。但是由于鹽酸克倫特羅在人體和家畜內(nèi)吸收比較好，一些不法商販為了經(jīng)濟(jì)利益，在動(dòng)物飼料中非法添加鹽酸克倫特羅等瘦肉精，來(lái)提高動(dòng)物蛋白質(zhì)合成率，減少動(dòng)物的脂肪生成，增加動(dòng)物瘦肉量，縮短飼養(yǎng)時(shí)間，從而降低生產(chǎn)成本，增加利潤(rùn)。我國(guó)已明令禁止在動(dòng)物飼料中添加瘦肉精，但是非法添加的情況仍然存在，造成“瘦肉精”中毒事件的發(fā)生，對(duì)人類生命健康造成威脅。因此，找到一種檢測(cè)鹽酸克倫特羅殘留量的有效方法具有重大意義。目前用于檢測(cè)鹽酸克倫特羅殘留量的方法主要有高效液相色譜法、生物傳感技術(shù)、氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等。其中高效液相色譜法耗時(shí)較長(zhǎng)，靈敏度較低，假陽(yáng)性率較高；生物傳感技術(shù)檢測(cè)范圍有限，靈敏度不高，僅用于尿液、水溶液和血清中鹽酸克倫特羅殘留量的檢測(cè)；氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)操作步驟繁多，待測(cè)物通常需要進(jìn)行衍生化處理，操作耗時(shí)；而液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)耗時(shí)少、操作簡(jiǎn)單、抗干擾能力強(qiáng)、靈敏度高、確證能力強(qiáng)，被廣泛用于鹽酸克倫特羅殘留量的檢測(cè)。

2 液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)概述

液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)簡(jiǎn)稱液質(zhì)聯(lián)用，是液相色譜與質(zhì)譜串聯(lián)的技術(shù)。主要由五部分組成：液相色譜儀、接口離子源與質(zhì)譜的連接裝置、質(zhì)量分析器、真空系統(tǒng)以及計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。樣品進(jìn)入液相色譜儀，經(jīng)色譜柱實(shí)現(xiàn)分離，被分離組分依次從接口進(jìn)入質(zhì)譜儀，經(jīng)離子源被離子化，離子于質(zhì)量分析器中被聚焦，依據(jù)質(zhì)荷比實(shí)現(xiàn)分離，離子信號(hào)轉(zhuǎn)變成電信號(hào)，被傳送到計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，依據(jù)質(zhì)譜峰強(qiáng)度及位置對(duì)樣品中成分及其結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。目前，常用的液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)有兩類：一類是從質(zhì)量分析器的角度來(lái)劃分，主要包括離子阱質(zhì)譜儀、四級(jí)桿質(zhì)譜儀、傅立葉變換質(zhì)譜儀、飛行時(shí)間質(zhì)譜儀；另一種是從離子源的角度來(lái)劃分，主要包括大氣壓化學(xué)電離、電噴霧離子、基質(zhì)輔助激光解吸離子化等。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)集液相色譜的高分離效能和質(zhì)譜的強(qiáng)鑒別能力于一身，可以對(duì)樣品準(zhǔn)確定性定量。因此，被廣泛應(yīng)用于許多領(lǐng)域。

3 液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在鹽酸克倫特羅殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

王春民等[1]采用超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)動(dòng)物源食品中的克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺以及特布他林四種瘦肉精進(jìn)行檢測(cè)分析。采用葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶對(duì)樣品進(jìn)行酶解，用溶劑乙酸乙酯進(jìn)行提取，經(jīng)過(guò)固相萃取小柱的凈化處理后，超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。經(jīng)過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在1.0μg/L-25.0μg/L的濃度范圍內(nèi)，四種瘦肉精呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.999，檢出限均達(dá)到0.5μg/kg。加標(biāo)水平下，回收率達(dá)到84%-105%。說(shuō)明超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法可用于鹽酸克倫特羅殘留量檢測(cè)。王嬌等[2]利用高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豬肉中鹽酸克倫特羅。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在1-20 ng/mL的濃度范圍內(nèi)，鹽酸克倫特羅的色譜峰面積與濃度線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9995，線性回歸方程為：y=1.114x-0.012，檢出限達(dá)到0.33 ng/mL。由此表明：高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法可用于檢測(cè)分析豬肉中的鹽酸克倫特羅。

金慧然等[3]利用超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)牛尿中克倫特羅等3 種β-興奮劑殘留量進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)過(guò)提取和凈化，有效地去除了樣品中的雜質(zhì)，經(jīng)超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在0.5-5.0 ng/mL的濃度范圍內(nèi)，克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系、回收率以及重現(xiàn)性，充分體現(xiàn)了該方法的高靈敏度、高精密度。表明超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法可用于檢測(cè)牛尿中克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的殘留量。陳蕾等[4]利用液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)豬肉中鹽酸克倫特羅進(jìn)行了快速檢測(cè)，并建立了快速提取豬肉中鹽酸克倫特羅的方法，對(duì)液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀分析條件進(jìn)行了優(yōu)化。用溶劑乙腈提取豬肉中的鹽酸克倫特羅，研究對(duì)比了影響提取凈化效果的三個(gè)因素：無(wú)水硫酸鎂的加入量、填充料的加入量以及填充料類型。結(jié)果表明：在0.15μg/L-1.5μg/L的濃度范圍內(nèi)，鹽酸克倫特羅線性關(guān)系良好，平均回收率可達(dá)到80%-120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.47%，檢出限為0.5μg/L。說(shuō)明液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法簡(jiǎn)單、快速、可靠，可用于快速測(cè)定豬肉中的鹽酸克倫特羅殘留量。孟文瑛等[5]采用固相萃取/超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)豬肉中的鹽酸克倫特羅殘留量進(jìn)行測(cè)定，用5%的高氯酸對(duì)豬肉樣品進(jìn)行超聲提取，高速離心15 min，用固相萃取柱富集和凈化上清液，去除復(fù)雜的干擾基質(zhì)，選擇性地富集凈化目標(biāo)樣品。試驗(yàn)結(jié)果表明：在0.25-50μg/kg 的濃度范圍內(nèi)，鹽酸克倫特羅呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9982，1.25、12.5、50μg/kg的添加水平下，平均回收率達(dá)到62.2%-72.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.2%-6.1%，檢出限達(dá)到0.05μg/kg。表明固相萃取/超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法高效、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速，可用于鹽酸克倫特羅的選擇性富集及分離檢測(cè)。

朱曉艾等[6]采用高效液相色譜法對(duì)豬肉中的鹽酸克倫特羅進(jìn)行了檢測(cè)，對(duì)高效液相色譜儀的檢測(cè)條件和樣品的前處理方法進(jìn)行優(yōu)化，建立了相關(guān)快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法。結(jié)果表明：優(yōu)化后，樣品前處理只需兩個(gè)過(guò)程：提取和蛋白質(zhì)沉淀。色譜峰良好，樣品的加標(biāo)回收率介于88.55%-94.03%之間，精密度小于2%，檢測(cè)限達(dá)到0.025mg/kg。表明該方法成本低、準(zhǔn)確、快速且簡(jiǎn)便，適用于快速檢測(cè)豬肉中鹽酸克倫特羅殘留。蔣萬(wàn)楓等[7]采用超高效液相色譜/四極桿/飛行時(shí)間質(zhì)譜法對(duì)動(dòng)物組織中的克倫特羅等7 種β-受體激動(dòng)劑殘留進(jìn)行了快速篩查。結(jié)果表明：4種加標(biāo)水平下，7 種β-受體激動(dòng)劑的加標(biāo)回收率達(dá)到75%-114%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.5%-20.6%?？藗愄亓_的線性范圍介于0.4-40.0 μg/kg之間，定量下限達(dá)到0.4 μg/kg，其余6種β-受體激動(dòng)劑的線性范圍均介于0.2-40.0μg/kg之間，定量下限達(dá)到0.2 μg/kg，相關(guān)系數(shù)均位于0.9914-0.9999之間。說(shuō)明超高效液相色譜/四極桿/飛行時(shí)間質(zhì)譜法適合于快速篩查動(dòng)物組織中7種β-受體激動(dòng)劑殘留。

4 展望

嚴(yán)控鹽酸克倫特羅殘留量，必須要嚴(yán)格執(zhí)法，同時(shí)也需要有效的檢測(cè)技術(shù)作為保障。液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在瘦肉精殘留檢測(cè)領(lǐng)域雖然有其優(yōu)勢(shì)，但是也有其弊端，比如價(jià)格昂貴，成本高，難以普及。隨著各種新興檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展進(jìn)步，檢測(cè)鹽酸克倫特羅的未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)是研究開發(fā)成本低、高效、快速、能定性且定量的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)方法，最終在市場(chǎng)檢測(cè)中使其普及化、常規(guī)化。

參考文獻(xiàn)

王春民，張秋萍，吳春霞，馬曉艷，李建. 動(dòng)物性食品中4 種β-興奮劑的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2016，26（21）：3064-3066

王嬌，高永慧，姚華，史靖宏. 高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豬肉中的鹽酸克倫特羅[J]. 現(xiàn)代食品，2018，47（13）：133-136

金慧然，韓宏超，郭文欣，李蕊，陶婭，江淼，李春輝. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛尿中3 種β-興奮劑殘留[J]. 《黑龍江畜牧獸醫(yī)》科技版，2014，（5） ： 214-216

陳蕾，石盼盼，魏法山，朱凱，吳麗. 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法法快速檢測(cè)豬肉中鹽酸克倫特羅[J]. 食品研究與開發(fā)，2017，38（22）：163-166

孟文瑛，郭志謀，沈偉健，沈崇鈺，吳斌，劉艷明，等. 一種新型固相萃取柱結(jié)合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法選擇性富集測(cè)定豬肉中的鹽酸克倫特羅[J]. 色譜，2012，30（2） ：141-145

朱曉艾，陳雅君，陳雪香，等. 高效液相色譜法檢測(cè)豬肉中鹽酸克倫特羅的前處理方法[J].食品與機(jī)械，2015，31（2）：106-109

蔣萬(wàn)楓，趙珊. 超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查動(dòng)物組織中7 種β受體激動(dòng)劑殘留[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013，32（6）：675-680