乳品中殘留抗生素及檢測技術

馬澤寧

（山西省飼料獸藥監察所，太原 030027）

0 引言

乳制品是我國社會大眾的重要營養食品，乳制品中抗生素含量超標，會損害消費者的身體健康。同時乳制品抗生素殘留，還會進一步降低我國乳制品在國際上的地位，引起貿易摩擦。采取有效的檢測技術，及時發現乳制品中殘留的抗生素就成為現階段需要重點解決的問題。

1 殘留抗生素種類

第一，β-內酰胺類抗生素。這些抗生素應用較為廣泛的主要有青霉素類抗生素和頭孢霉類抗生素，這2種抗生素經常用于牛等家畜的臨床疾病治療，主要會殘留在牛乳中。第二，四環素類抗生素。應用較為廣泛的主要有四環素、金霉素、土霉素和鹽酸多西環素，這類抗生素屬于廣譜抗菌的抗生素。第三，氨基糖苷類抗生素。這類抗生素中比較常見的主要有慶大霉素、鏈霉素、新霉素和壯觀霉素等，同樣都是奶牛疾病治療中經常使用的抗生素。第四，氯霉素類抗生素。這類抗生素主要涉及到氯霉素、甲砜霉素和富甲砜霉素。這類抗生素由于副作用和毒性較大，嚴格限制使用量。第五，大環內酯類抗生素。這類抗生素主要有紅霉素、林可霉素、螺旋霉素和鹽霉素等。第六，磺胺類抗生素。磺胺類抗生素是奶牛養殖中使用最頻繁的一類抗生素之一，這類抗生素主要有磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲嘧啶和磺胺嘧啶等。

2 檢測原理與技術

2.1 檢測原理

傳統檢測技術的原理是基于乳制品中的抗生素能夠對某些微生物產生一定的抑制作用，通過擴散或渾濁度的比較，對抗生素種類和含量作出大致的判斷。在乳品中，抗生素濃度越高，某些微生物生長的異質性就越強，生長出來的菌落也就越小。而免疫檢測法是基于抗生素抗體的一種檢測方法。在動物體內，應用含量超標的抗生素后，會產生相應的應激變化，在體內形成抗體，通過使用抗原和抗體進行特異性反應，確定抗生素的種類和含量。該種檢測方法是利用細胞質因子專一性的特點，能夠和某些抗生素進行特異性反應，通過整個反應系統中酶活性的變化和基質電流的變化，判斷檢測物種是否存在抗生素，同時還能夠對抗生素的濃度做進一步的推斷。最終達到提高檢測效率，縮小資金和成本投入的目的。而高效液相色譜和質譜檢測技術，能夠實現對乳制品中抗生素濃度和含量種類的定量定性分析判斷，這2種方法主要是基于它們具有測定痕量物質的優越性。

2.2 檢測技術

結合FDA獸醫學中心的相關規定，乳品中殘留抗生素檢測技術，要確保敏感性強、特異性高。抗生素的檢測方法，要想被認可，并形成統一的技術規范，對其檢測標準值有很高的要求。某種檢測技術的最低檢測范圍應該控制在95%以上。在對某種檢測技術進行評價時，主要涉及以下幾個方面。

第一，對檢測技術的敏感性和特異性進行判斷。在進行特異性判斷過程中，所選擇的乳制品要絕對不含有抗生素，體細胞數量要大于106個/mL，檢測結果為陰性，由此能夠證明，所選擇的檢測技術具有很好的特異性。在進行抗生素敏感性檢測中，在鮮奶中添加MRL水平的抗生素，最終得出的結果是陽性。第二，乳品中抗生素殘留最低濃度值檢測。在進行最低濃度值測定中，會采集60個左右的樣本進行檢測。通過對60個樣本進行全面檢測，根據相應的濃度變化，繪制出檢測標準曲線，反應乳品中最低濃度值。第三，評價因素。要選擇含有內毒素，且體細胞含量在2×106～6×106 個/mL的乳品，要確保特異性結果高達90%以上。第四，現場檢驗。利用該種檢測技術，在各個地區不同規模的養殖場，不同抗生素類型的奶樣進行全面檢測，將得到的檢測結果和液相色譜分析法檢測結果進行對照，查看兩者之間的差異性[1]。

2.2.1 微生物檢測法

微生物檢測法是我國鮮奶抗生素殘留應用最為常見的一種檢測方法，該檢測方法的原理是基于抗生素對某些微生物具有抑制作用。具體操作包含以下幾個方面：在脫脂乳培養基上接種單菌種，7 ℃保溫箱內培養，15 h后選擇培養物，按照1∶1的比例進行充分稀釋，作為待檢溶液。將得到的溶液，在80 ℃環境下水浴，加熱5 min，再冷卻到37 ℃，然后向其中加入事先制備好的菌液，混合均勻后，按照上述的加熱標準，再繼續加熱2 h，并向其中加入指示劑，按照上述溫度繼續加熱30 min，如果整個溶液的顏色變成紅色，則表明乳品中不存在抗生素，抗生素殘留水平在該種檢測方法的最低濃度以下；如果顏色不變，則表示待檢溶液中存在兩個抗生素，顯示為陽性。微生物檢測法在檢測乳汁中青霉素、鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素等方面具有較強的靈敏性[2]。該種方法具有操作簡便，費用低，作用時間較長等特點。菌液制備是該種檢測方法成功的關鍵。

2.2.2 戴爾沃檢測法

戴爾沃檢測法同樣屬于微生物檢測法范疇。該種方法主要利用嗜熱芽孢菌，通過2～3 h的培養后，會產生酸，而產生的酸會因為指示劑分解而呈黃色。具體操作方法如下：在無菌環境下，將相應的指示劑放入潔凈試管內，然后向試管內加入待檢乳品，恒溫箱內64 ℃培養3 h，觀察整個反應溶液顏色的變化情況。如果在試管底部，有超過2/3的固體介質呈現黃色，則可判定為陰性；如果變成紫色，則可判定為陽性。該種檢測方法具有操作簡便，檢測時間短，成本低的特點。

2.2.3 酶聯免疫吸附檢測法

該種方法的基本操作是將待檢的乳樣放入到試管中，混合均勻，加熱樣品和檢測板，作用5 min。向樣品孔中加入待檢乳汁，當激活圓環開始退卻時，按Snap鍵，作用10 min后，使用讀數儀器讀取并打印結果，檢測結果小于1.05 h為陰性，大于1.05 h為陽性，該種方法普遍應用到β-內酰胺類多種抗生素檢測。該種檢測方法操作時間短，在10 min以內即可以判斷出乳汁中β-內酰胺類、四環素類、磺胺類等抗生素的殘留量[3]。

2.2.4 現代儀器分析法

現代儀器分析法主要是利用抗生素分子中基因所具有的特殊反應或理化特性，通過利用現代分析儀器，對抗生素殘留情況進行精確化分析的一種方法，如色譜法、熒光法、色譜質譜聯用法，其中應用最為廣泛的是色譜法。色譜法主要有氣相色譜檢測法、高效液相色譜檢測法、反相高效液相色譜法等，它主要應用色譜理論，通過使用高精度的檢測儀器對乳品中的抗生素進行精確檢測，具有檢測速度快、檢測效率高、操作自動化的特點。整個檢測流程包含樣品提取、脫蛋白處理、離心處理、層析柱凈化、衍生化等步驟。該種方法能夠詳細具體的檢測出抗生素的具體含量。利用現代儀器分析法，具有快速分離、檢測效率高、自動化程度高的特點，能夠精確檢測出抗生素的含量，靈敏性高，但整個操作過程較為繁雜，消耗時間較長，同時在操作中還需要相應的昂貴儀器設備和試劑，通常在大型實驗室使用，不適合在基層快速檢測應用。