補中益氣湯發酵制劑對肉雞生長性能和免疫功能的影響

靳雙星,張桂枝,張 瀟,王學強

(1.河南牧業經濟學院動物醫學院,河南 鄭州 450046;2.河南牧業經濟學院動物科技學院,河南 鄭州 450046;3.開封市動物疫病預防控制中心,河南 開封 475000)

中藥因其具有安全、高效、低毒、價廉、不易產生耐藥性等優點,在動物疫病防控中發揮著越來越大的作用。炮制中藥的工藝是中藥制藥的精髓。近年來,通過微生物發酵手段炮制中藥的研究越來越受到重視,并取得了一定進展[1-2]。與未發酵中藥相比,發酵中藥可較大幅度地改變藥性,提高療效,降低毒副作用,擴大適應癥,是現代生物技術和中藥研究的完美結合,為中藥的發展開辟了廣闊新空間,成為中藥研究與開發的新熱點[3]。因此,本課題組根據中獸醫理論及養殖生產實踐研制出補中益氣湯發酵制劑。為探討其對肉雞生長性能和免疫功能的影響,在飼料中添加不同劑量的補中益氣湯發酵制劑,測定艾拔益加(AA)肉雞的日增重、料肉比、免疫器官指數、新城疫(ND)抗體效價和血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)等指標的變化,為該制劑在生產中應用提供理論依據和技術參考。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品 復方中藥是由黃芪、白術、黨參、甘草、當歸、柴胡、陳皮、升麻等8味中藥組成的補中益氣湯。發酵方法參考張桂枝的文獻[4]。

1.2 日糧組成及試驗設計

1.2.1 日糧組成,見表1。

表1 試驗動物日糧組成

1.2.2 試驗設計 1日齡健康AA肉雞,隔離飼養至7日齡,選取300只體重相近健康的肉仔雞,隨機分為4組,每組設5個重復,每個重復15只雞,分籠飼養,自由采食和飲水,試驗期間各組飼養管理條件一致。空白對照組,飼喂基礎日糧;中藥對照組,基礎日糧中添加1%未發酵補中益氣湯中藥;試驗1、2組,在飼料中分別添加0.5%、1.0%補中益氣湯發酵制劑。免疫程序：4組雞均在7日齡1.5倍量點眼滴鼻接種新城疫活疫苗(LaSota株);21日齡2.5倍量飲水接種新城疫活疫苗(LaSota株)。

1.3 主要試劑 IgG、IgA、IgM ELISA檢測試劑盒(均購自南京建成生物工程研究所),新城疫(ND)標準濃縮抗原、ND標準陽性血清(均購自中國獸醫藥品監察所),雞新城疫活疫苗(LaSota株)(購自齊魯動物保健品有限公司)。

1.4 主要儀器 高壓蒸汽滅菌鍋、生化培養箱、酶標儀、恒溫培養箱、離心機、96孔V型反應板、微量移液器等。

1.5 檢測指標及測定方法

1.5.1 平均日增重 每組分別在 7、14、21、28、35日齡早上未飼喂情況下空腹稱重,計算平均日增重。平均日增重=(周末平均體重-周初平均體重)/7。

1.5.2 階段料肉比 雞群在7日齡開始準確記錄喂料量,并且準確稱量雞只體重并記錄。階段料肉比=平均喂料量/(末體重-初體重)。

1.5.3 免疫器官指數測定 于14、21、28、35日齡,每個處理組共選15只雞,分別稱重,頸靜脈放血致死,迅速摘取胸腺、脾臟和腔上囊,進行稱重并計算其免疫器官指數。免疫器官指數=免疫器官重量(g)/試驗階段體重(kg)。

1.5.4 抗體效價測定 分別在14、21、28、35日齡,每個處理組共選15只雞,采用微量紅細胞凝集抑制試驗(HI)檢測血清中ND抗體,用n log2來表示。

1.5.5 免疫球蛋白濃度測定 按照ELISA試劑盒說明書,測定血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM濃度。

1.6 統計分析 試驗數據用SPSS 20.0統計軟件的One-Way ANOVA法進行單因素方差分析,并用Duncan's法進行顯著性檢驗,以P＜0.05作為差異顯著性判斷標準,試驗結果均以平均值±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 補中益氣湯發酵制劑對AA肉雞生長性能的影響

2.1.1 補中益氣湯發酵制劑對AA肉雞平均日增重的影響 由表2可以看出,在14、21、28日齡時各組之間差異均不顯著(P＞0.05);35日齡時試驗1組的平均日增重與空白對照組相比差異顯著(P＜0.05),但與中藥對照組和試驗2組相比差異不顯著(P＞0.05)。

2.1.2 補中益氣湯發酵制劑對AA肉雞階段料肉比的的影響 由表3可知,14、21日齡時各組之間差異均不顯著(P＞0.05),28、35日齡時試驗1組料肉比與空白對照組和中藥對照組之間差異顯著(P＜0.05);但與試驗2組相比差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 補中益氣湯發酵制劑對AA肉雞免疫器官指數的影響 由表4可以看出,14日齡時各組之間免疫器官指數無顯著差異(P＞0.05);21日齡時中藥對照組、試驗1組和2組胸腺指數明顯增高,與空白對照組相比差異顯著(P＜0.05);28、35日齡時試驗1組所有的免疫器官指數均顯著高于空白對照組和中藥對照組(P＜0.05);28日齡,試驗1組與試驗2組免疫器官指數差異不顯著(P＞0.05),35日齡試驗1組腔上囊指數顯著高于試驗2組(P＜0.05)。

表2 補中益氣湯發酵制劑對肉雞平均日增重的影響 (gd-)

表3 補中益氣湯發酵制劑對肉雞料肉比的影響

表4 補中益氣湯發酵制劑對肉雞免疫器官指數的影響

2.3 補中益氣湯發酵制劑對AA肉雞ND抗體效價的影響 由表5可知,14、21日齡時各組之間ND抗體效價無明顯差異(P＞0.05)。28日齡和35日齡時,中藥對照組、試驗1組和2組的ND抗體效價明顯高于空白對照組(P＜0.05),且試驗1組和2組明顯高于中藥對照組(P＜0.05),但試驗1組和2組之間無明顯差異(P＞0.05)。

2.4 補中益氣湯發酵制劑對AA肉雞血清免疫球蛋白的影響 由表6可以看出,在14日齡時各組IgG、IgA、IgM指標差異均不顯著(P＞0.05)。在21日齡時,試驗1、2組的IgG濃度明顯升高,與空白對照組和中藥對照組相比差異顯著(P＜0.05);IgA濃度,中藥對照組、試驗1組和2組顯著高于空白對照組(P＜0.05)。28日齡時,IgG和IgA濃度,中藥對照組、試驗1組和2組顯著高于空白對照組(P＜0.05);試驗1組IgM濃度顯著高于空白對照組和中藥對照組(P＜0.05)。35日齡時,IgG濃度,中藥對照組、試驗1組和2組顯著高于空白對照組(P＜0.05),且試驗1、2組與中藥對照組相比差異顯著(P＜0.05);IgA濃度,試驗1組明顯高于空白對照組和中藥對照組(P＜0.05)。

表5 補中益氣湯發酵制劑對肉雞新城疫抗體效價的影響 (n log2)

表6 補中益氣湯發酵制劑對AA肉雞血清免疫球蛋白的影響

3 討論

現代藥理研究顯示[5-7],補中益氣湯具有調整胃腸運動的作用,能調節胃酸、胃蛋白酶的分泌;能增強小腸對葡萄糖的吸收功能;增加胰液的分泌。本試驗研究結果表明,在飼料中添加補中益氣湯發酵制劑可顯著增加肉雞的日增重,提高飼料轉化率,尤其在試驗后期效果較明顯。

胸腺、腔上囊和脾臟是禽類重要的免疫器官,免疫臟器指數可在一定程度上反映機體免疫功能的強弱[12]。免疫器官質量和指數增加是由于其器官自身的細胞生長發育和分裂增殖所致,是機體免疫增強的表現。本研究發現,補中益氣湯發酵制劑能顯著提高AA肉雞的免疫器官指數,說明中藥補中益氣湯經過發酵后,可較大幅度地提高藥效,降低藥物用量,促進肉雞免疫器官的發育。

體液免疫是機體抵抗傳染病的主要因素之一,抗體是介導體液免疫的重要分子,抗體效價的高低直接反映機體的體液免疫狀態[9]。本試驗結果表明,28、35日齡時試驗1組的ND抗體效價明顯高于空白對照組和中藥對照組。說明中藥經過發酵后免疫增強效果提高,這與安勝英等[10]、張桂枝等[4]試驗結果相一致。

免疫球蛋白是介導體液免疫的主要抗體,在一定程度上反映機體對疾病的抵抗能力[11],其含量升高,說明機體體液免疫功能增強。通過各種方式被動獲得的各種免疫球蛋白具有抗菌、抗外毒素或抗病毒的免疫功能[12]。本研究結果表明,AA肉雞飼料中添加補中益氣湯發酵制劑能顯著提高IgG、IgA和IgM濃度,增強肉雞的體液免疫功能。

韓春楊等[13]研究表明,微生物發酵中藥是一種新的中藥炮制方法,通過微生物的降解作用,最大限度地提取藥物的有效成分和活性物質,并生成新的藥物成分,這可能是中藥發酵后藥效增強的主要機制。朱新術[14]研究表明,利用篩選的某乳酸菌株發酵黃芪后,微生物與中藥之間產生了協同效果。微生物與中藥之間存在協同效應[15]或者是中藥與益生菌雙重疊加,調節胃腸菌群平衡,發揮促生長和免疫調節作用,有可能是發酵中藥發揮藥效的作用機理之一。本研究結果顯示,補中益氣湯經過發酵后效果明顯增強,可能是由于通過發酵有效成分以及含量發生了某些改變所致,具體有效成分發生何種改變,有待后續研究。